一种维拉卡肽的制备方法技术

技术编号:21079758 阅读:31 留言:0更新日期:2019-05-11 06:09
本发明专利技术提供了一种维拉卡肽的制备方法,属于多肽药物制备技术领域。本发明专利技术使用Fmoc‑D‑Arg(Pbf)‑D‑Arg(Pbf)‑D‑Arg(Pbf)‑OH为原料,将D‑Arg残基以D‑Arg‑D‑Arg‑D‑Arg三肽片段的形式接入,有效地避免了缺失肽杂质[‑1‑D‑Arg]‑维拉卡肽、[‑2‑D‑Arg]‑维拉卡肽和[‑3‑D‑Arg]‑维拉卡肽的产生;同时,本发明专利技术将脱Mmt维拉卡肽‑氨基主链肽树脂的Cys侧链巯基活化后再与Boc‑L‑Cys‑OH进行偶联反应,可以成功的构建维拉卡肽的二硫键,且本发明专利技术提供的制备方法合成效率高,适合工业化大规模生产。

A Method for the Preparation of Veracar Peptide

The invention provides a preparation method of veracar peptide, which belongs to the technical field of polypeptide drug preparation. \u672c\u53d1\u660e\u4f7f\u7528Fmoc\u2011D\u2011Arg(Pbf)\u2011D\u2011Arg(Pbf)\u2011D\u2011Arg(Pbf)\u2011OH\u4e3a\u539f\u6599\uff0c\u5c06D\u2011Arg\u6b8b\u57fa\u4ee5D\u2011Arg\u2011D\u2011Arg\u2011D\u2011Arg\u4e09\u80bd\u7247\u6bb5\u7684\u5f62\u5f0f\u63a5\u5165\uff0c\u6709\u6548\u5730\u907f\u514d\u4e86\u7f3a\u5931\u80bd\u6742\u8d28[\u20111\u2011D\u2011Arg]\u2011\u7ef4\u62c9\u5361\u80bd\u3001[\u20112\u2011D\u2011Arg]\u2011\u7ef4\u62c9\u5361\u80bd\u548c[\u20113\u2011D\u2011Arg]\u2011\u7ef4\u62c9\u5361\u80bd\u7684\u4ea7\u751f\uff1b\u540c\u65f6\uff0c\u672c\u53d1\u660e\u5c06\u8131Mmt\u7ef4\u62c9\u5361\u80bd\u2011\u6c28\u57fa The disulfide bond of veracar peptide can be successfully constructed by activating the side chain thiol group of the main chain peptide resin and then coupling with Boc_L_Cys_OH. The preparation method provided by the invention has high synthesis efficiency and is suitable for industrial large-scale production.

【技术实现步骤摘要】
一种维拉卡肽的制备方法
本专利技术涉及多肽药物制备
,特别涉及一种维拉卡肽的制备方法。
技术介绍
继发性甲状旁腺功能亢进(SHPT,简称继发性甲旁亢),是指在慢性肾功能不全、肠吸收不良综合征、Fanconi综合征和肾小管酸中毒、维生素D缺乏或抵抗以及妊娠、哺乳等情况下,甲状旁腺长期受到低血钙、低血镁或高血磷的刺激而分泌过量的甲状旁腺激素(PTH),以提高血钙、血镁和降低血磷的一种慢性代偿性临床表现,长期的甲状旁腺增生最终导致形成功能自主的腺瘤。维拉卡肽是由KaiPharmaceuticals,Inc.开发的一种新颖的拟钙剂(calcimimeticagent),能够抑制甲状旁腺激素的分泌。维拉卡肽可结合并激活甲状旁腺上的钙敏感受体,实现甲状旁腺激素水平的降低。维拉卡肽有3个D构型的精氨酸、2个D构型的丙氨酸、1个D构型的精氨酰胺、1个L构型半胱氨酸与1个D构型半胱氨酸(N段被乙酰基封闭)构成,其中D构型半胱氨酸与L构型半胱氨酸以二硫键连接在一起(N-acetyl-D-cysteinyl-D-alanyl-D-arginyl-D-arginyl-D-arginyl-D-alanyl-D-Argininamide,disulfidewithL-cysteine),其结构式I所示:该化合物合成的关键在于二硫键的构建,常规的肽合成中使用的构建二硫键的方法包括空气氧化法,碘/醋酸体系氧化法,双氧水氧化法等,这类方法仅适合于环肽的二硫键的构建,但是维拉卡肽需要进行分子间巯基的氧化反应,若按照常规的二硫键构建方法进行反应,将无法得到理想收率和纯度的最终产物。同时,精氨酸(Arg)属于困难氨基酸,非常容易产生[-D-Arg]的缺失肽,而维拉卡肽序列在中含有3个连续的D-Arg残基,极易产生缺失肽杂质[-1-D-Arg]-维拉卡肽、[-2-D-Arg]-维拉卡肽和[-3-D-Arg]-维拉卡肽。这些杂质与目标肽的极性相近,不易分离,增加产品分离纯化的难度。因此,在维拉卡肽的制备过程中需要解决二硫键的构建困难和易产生缺失肽的问题。
技术实现思路
有鉴于此,本专利技术目的在于提供一种维拉卡肽的制备方法。本专利技术提供的维拉卡肽的制备方法能够解决二硫键的构建困难和易产生缺失肽的问题,适于工业化大批量的生产,且所得维拉卡肽的产率高,纯度高。为了实现上述专利技术目的,本专利技术提供以下技术方案:本专利技术提供了一种维拉卡肽的制备方法,包括以下步骤:(1)在缩合体系作用下,以Fmoc保护的氨基树脂为载体,将全保护氨基酸和Fmoc-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-OH三肽片段进行缩合,得到具有式(a)所示结构的维拉卡肽-氨基主链肽树脂;所述缩合按照维拉卡肽主链肽从C端至N端的顺序进行;所述全保护氨基酸和Fmoc-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-OH三肽片段的缩合顺序为:Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Ala-OH、Fmoc-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Ala-OH、N-Ac-D-Cys(Mmt)-OH;(2)将所述维拉卡肽-氨基主链肽树脂和去Mmt保护溶液混合,进行脱Mmt保护反应,得到具有式(b)所示结构的脱Mmt维拉卡肽-氨基主链肽树脂;(3)将所述脱Mmt维拉卡肽-氨基主链肽树脂的Cys侧链巯基活化后与Boc-L-Cys-OH混合,进行偶联反应,得到具有式(c)所示结构的全保护维拉卡肽-氨基树脂;(4)将所述全保护维拉卡肽-氨基树脂和裂解试剂混合进行裂解反应,得到维拉卡肽。优选的,所述Fmoc-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-OH三肽片段由以下方法制备得到:(I)将Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH和HOSu在DCC的作用下进行偶联反应,得到Fmoc-D-Arg(Pbf)-OSu;(II)将所述Fmoc-D-Arg(Pbf)-OSu和H-D-Arg(Pbf)-OH在碱催化剂的作用下进行偶联反应,得到Fmoc-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-OH;(III)将所述Fmoc-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-OH和HOSu在DCC的作用下进行偶联反应,得到Fmoc-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-OSu;(IV)将所述Fmoc-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-OSu和H-D-Arg(Pbf)-OH在碱催化剂的作用下进行偶联反应,得到Fmoc-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-OH。优选的,所述步骤(II)和步骤(IV)中的碱催化剂为Na2CO3。优选的,所述步骤(1)具体为:i)将Fmoc氨基树脂溶胀后,在去Fmoc保护溶液作用下进行脱Fmoc保护,得到脱保护的氨基树脂;ii)将所述全保护氨基酸、Fmoc-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-OH三肽片段与缩合体系混合,进行活化反应,得到活化的氨基酸和三肽片段;iii)将所述活化的氨基酸和三肽片段与所述脱保护的氨基树脂混合,进行缩合反应,得到维拉卡肽-氨基主链肽树脂;所述步骤i)和步骤ii)没有时间顺序的限制。优选的,所述缩合体系包括缩合剂和反应溶剂,所述缩合剂为DIC/HOBt、PyBOP/HOBt/DIEA或HATU/HOBt/DIEA;所述反应溶剂为DMF、DCM、NMP和DMSO中的一种或几种;所述全保护氨基酸、缩合剂与Fmoc氨基树脂的摩尔比为2~5:2~5:1。优选的,所述氨基树脂为RinkAmide树脂、RinkAmideMBHA树脂和RinkAmideAM树脂中的一种或几种;所述氨基树脂的取代度为0.2~1.0mmol/g。优选的,所述步骤i)中溶胀用溶胀剂为DCM或DMF;所述去Fmoc保护溶液为哌啶和DMF的混合液。优选的,所述步骤(2)中的去Mmt保护溶液为TFA的DCM溶液,所述去Mmt保护溶液中TFA的体积含量为1~3%。优选的,所述步骤(3)中脱Mmt维拉卡肽-氨基主链肽树脂的Cys侧链巯基的活化方法为:将所述脱Mmt维拉卡肽-氨基主链肽树脂与活化剂混合,进行活化反应,得到Cys侧链巯基活化的维拉卡肽-氨基主链肽树脂;所述活化剂为2,2'-二硫二吡啶。优选的,所述步骤(4)中的裂解试剂为TFA、苯甲硫醚、TIS、EDT和H2O的混合溶剂,所述混合溶剂中TFA、苯甲硫醚、TIS、EDT和H2O的体积比为80~90:10~5:5~2:5~2:1。本专利技术提供了一种维拉卡肽的制备方法,本专利技术使用Fmoc-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-OH为原料,将D-Arg残基以D-Arg-D-Arg-D-Arg三肽片段的形式接入,有效地避免了缺失肽杂质[-1-D-Arg]-维拉卡肽、[-2-D-Arg]-维拉卡肽和[-3-D-Arg]-维拉卡肽的产生;同时,本专利技术将脱Mmt维拉卡肽-氨基主链肽树脂的Cys侧链巯基活化后再与Boc-L-Cys-OH进行偶联反应,可以成功的构建维拉卡肽的二硫键,且本专利技术提供的制备方法合成效率高,适合工业化大规模生产。实施例结果表明,使本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种维拉卡肽的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)在缩合体系作用下,以Fmoc保护的氨基树脂为载体,将全保护氨基酸和Fmoc‑D‑Arg(Pbf)‑D‑Arg(Pbf)‑D‑Arg(Pbf)‑OH三肽片段进行缩合,得到具有式(a)所示结构的维拉卡肽‑氨基主链肽树脂;所述缩合按照维拉卡肽主链肽从C端至N端的顺序进行;

【技术特征摘要】
1.一种维拉卡肽的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)在缩合体系作用下,以Fmoc保护的氨基树脂为载体,将全保护氨基酸和Fmoc-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-OH三肽片段进行缩合,得到具有式(a)所示结构的维拉卡肽-氨基主链肽树脂;所述缩合按照维拉卡肽主链肽从C端至N端的顺序进行;所述全保护氨基酸和Fmoc-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-OH三肽片段的缩合顺序为:Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Ala-OH、Fmoc-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Ala-OH、N-Ac-D-Cys(Mmt)-OH;(2)将所述维拉卡肽-氨基主链肽树脂和去Mmt保护溶液混合,进行脱Mmt保护反应,得到具有式(b)所示结构的脱Mmt维拉卡肽-氨基主链肽树脂;(3)将所述脱Mmt维拉卡肽-氨基主链肽树脂的Cys侧链巯基活化后与Boc-L-Cys-OH混合,进行偶联反应,得到具有式(c)所示结构的全保护维拉卡肽-氨基树脂;(4)将所述全保护维拉卡肽-氨基树脂和裂解试剂混合进行裂解反应,得到维拉卡肽。2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述Fmoc-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-OH三肽片段由以下方法制备得到:(I)将Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH和HOSu在DCC的作用下进行偶联反应,得到Fmoc-D-Arg(Pbf)-OSu;(II)将所述Fmoc-D-Arg(Pbf)-OSu和H-D-Arg(Pbf)-OH在碱催化剂的作用下进行偶联反应,得到Fmoc-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-OH;(III)将所述Fmoc-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-OH和HOSu在DCC的作用下进行偶联反应,得到Fmoc-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-OSu;(IV)将所述Fmoc-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-OSu和H-D-Arg(Pbf)-OH在碱催化剂的作用下进行偶联反应,得到Fmoc-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-OH...

【专利技术属性】
技术研发人员:顾海东金晶刘婷婷姚坚陈英陈丰
申请(专利权)人:苏州科技大学
类型:发明
国别省市:江苏,32

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