核桃青皮化学成分的提取、分离、纯化方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种核桃青皮化学成分的提取、分离、纯化方法及其应用，该方法从核桃青皮中分离得到13种化合物，分别鉴定为：3,5‑二甲氧基‑4‑羟基‑苯甲酸‑7‑O‑β‑D‑葡萄糖苷（1）、myricananin F（2）、β‑谷甾醇（3）、齐墩果酸（4）、核桃酮（5）、积雪草酸（6）、常春藤皂苷元（7）、β‑胡萝卜苷（8）、(4R)‑4，8‑二羟基‑α‑四氢萘酮‑4‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷（9）、3β,23‑二羟基‑12‑烯‑28‑乌苏酸（10）、熊果酸（11）、丁香酸（12）、Juglanoside B（13）。经体外抗肿瘤活性筛选，发现其中部分化合物对癌细胞具有一定的生长抑制活性，能够进一步用于制备抗癌药物。

Extraction, Separation and Purification of Chemical Constituents from Walnut Green Peel and Its Application

The invention discloses a method for extracting, separating and purifying chemical constituents of walnut green peel and its application. Thirteen compounds are separated from walnut green peel by this method and identified as: 3,5 dimethoxy 4 hydroxyl benzoic acid 7 O beta D glucoside (1), myricananin F (2), beta sitosterol (3), oleanolic acid (4), walnut ketone (5), accumulation, respectively. Carboxylic acid (6), alabasic acid (6), Ivy saponin (7), beta carotenoid (8), beta carotenoid (8), beta, (4R) 4,8 dihydroxy alpha tetrahydronaphthalenone 4 O betbetbetbetbetbetbetbetbetbetbetbetbetbetbetbetbetbetbetbetbetbetbetbetbetbetbetbetbetbeta D D (2) The results of the study are as follows:1) The results of the study are as follows:1) The results of the study are as follows:1) The results of the study are as follows:1. Through screening of anti-cancer activity in vitro, it was found that some of the compounds had certain growth inhibition activity on cancer cells and could be further used to prepare anti-cancer drugs.

【技术实现步骤摘要】
核桃青皮化学成分的提取、分离、纯化方法及其应用
本专利技术属于核桃青皮化学成分的提取、分离、纯化
，具体涉及一种核桃青皮化学成分的提取、分离、纯化方法及其应用。
技术介绍
核桃青皮，又称青龙衣，为胡桃科植物核桃(JuglansregiaL.)和核桃楸(J.mandshuricaMaxim.)的未成熟果皮。我国核桃资源丰富，除河南外，在河北、山东、东北等省份都有分布。核桃青皮辛、苦、涩、有毒、微寒，具有清热、解毒、治痢、明目、抗肿瘤等作用，因而具有较大的医药应用价值。但迄今为止，国内外学者对核桃青皮有效成分的系统研究不多，往往更关注经济价值最高的果实部分，而核桃外面的果皮部分常被忽略，核桃成熟期间，大量青皮常作为垃圾被堆放在地头，造成环境污染及资源浪费。如能搞清楚核桃青皮的化学成分，并加以综合开发利用，不仅可以保护环境，还可以增加经济收入。为了进一步了解不同产地的核桃青皮的化学成分，探讨其药用价值，本实验对采自河南省洛阳市嵩县车村镇的核桃青皮的化学成分进行研究，从中提取分离得到多种化合物，并对提取分离得到的化合物进行体外抗肿瘤活性筛选，以期进一步用于制备抗癌药物。目前，尚没有该方面的相关研究报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供了一种核桃青皮化学成分的提取、分离、纯化方法及其应用，该方法从核桃青皮中分离得到13种化合物，经体外抗肿瘤活性筛选，发现其中部分化合物对癌细胞具有一定的生长抑制活性，能够进一步用于制备抗癌药物。本专利技术为实现上述目的采用如下技术方案，核桃青皮化学成分的提取、分离、纯化方法，其特征在于具体步骤为：步骤S1：取核桃青皮阴干粉碎后，在常温下用甲醇对其进行浸泡，每次浸泡6天，总共浸泡4次，过滤，滤液进行减压浓缩得甲醇提取物浸膏，再加入60～70℃温水悬浮，分别用乙酸乙酯和正丁醇对其进行多次萃取，萃取液减压浓缩分别得到乙酸乙酯部分浸膏和正丁醇部分浸膏；步骤S2：乙酸乙酯部分浸膏用200～300目的硅胶拌样，干法上柱进行硅胶柱层析，以氯仿-甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱，其中氯仿与甲醇的梯度体积比依次为1:0、30:1、20:1、10:1、5:1、3:1、1:1、0:1，将洗脱液通过薄层色谱检识合并后得到6个部分Fr.I-Fr.VI；Fr.I：未分离；Fr.II：通过硅胶柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱，其中石油醚与乙酸乙酯的梯度体积比依次为15:1、10:1、5:1、3:1、1:1、0:1，再进行重结晶最终在体积比3:1处得到化合物12；Fr.III：通过硅胶柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯进行第一次梯度洗脱，其中石油醚与乙酸乙酯的梯度体积比依次为30:1、20:1、15:1、10:1、5:1、3:1、1:1、0:1，最终在石油醚与乙酸乙酯体积比5:1处由丙酮重结晶得到化合物3，在石油醚与乙酸乙酯体积比1:1处用丙酮进行重结晶得到化合物2，将第一次梯度洗脱得到的样品经过薄层色谱检识后进行第二次硅胶柱色谱，以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱，其中石油醚与乙酸乙酯的梯度体积比依次为10:1、5:1、3:1、1:1，将第二次梯度洗脱得到的样品再次经过薄层色谱检识后，一部分样品通过两次凝胶柱色谱以甲醇为洗脱剂进行洗脱得到化合物4，另一部分样品进行第三次硅胶柱色谱，以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱，其中石油醚与乙酸乙酯的梯度体积比依次为5:1、3:1、1:1，最终在体积比1:1处由丙酮重结晶得到化合物5；FrIV：先用大孔吸附树脂处理，以体积比80:20的甲醇-水作为洗脱剂进行洗脱得到的浸膏经硅胶柱层析，以氯仿-异丙醇为洗脱剂进行第一次梯度洗脱，其中氯仿与异丙醇的梯度体积比依次为20:1、10:1、5:1、1:1、0:1，将第一次梯度洗脱得到的样品经过薄层色谱检识后分为A部分和B部分，A部分再经两次硅胶柱层析，两次均以氯仿-异丙醇为洗脱剂进行等度洗脱，其中氯仿与异丙醇的体积比均为10:1，最终在体积比10:1处得到化合物6，B部分先经一次硅胶柱层析，以氯仿-异丙醇为洗脱剂进行梯度洗脱，其中氯仿与异丙醇的梯度体积比依次为25:1、20:1、15:1、10:1、0:1，将洗脱得到的样品经过薄层色谱检识后再分为B1部分和B2部分，B1部分经过两次硅胶柱层析，两次均以氯仿-异丙醇为洗脱剂进行等度洗脱，其中氯仿与异丙醇的体积比均为15:1，最终得到化合物10，B2部分经过两次硅胶柱层析，两次均以氯仿-异丙醇为洗脱剂进行等度洗脱，其中氯仿与异丙醇的体积比均为10:1，再由丙酮重结晶最终得到化合物7；Fr.V：通过硅胶柱色谱，用氯仿-甲醇为洗脱剂进行第一次梯度洗脱，其中氯仿与甲醇的梯度体积比依次为30:1、20:1、15:1、5:1、1:1、0:1，将第一次梯度洗脱得到的样品经过薄层色谱检识后进行第二次硅胶柱色谱，同样以氯仿-甲醇为洗脱剂进行第二次梯度洗脱，其中氯仿与甲醇的梯度体积比依次为20:1、15:1、10:1、0:1，将第二次梯度洗脱得到的样品经过薄层色谱检识并用丙酮重结晶得到化合物8；Fr.VI：通过硅胶柱色谱，用氯仿-甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱，其中氯仿与甲醇的梯度体积比依次为25:1、20:1、15:1、10:1、5:1、1:1、0:1，将洗脱得到的样品经过薄层色谱检识后再经两次凝胶柱层析，两次洗脱均以甲醇为洗脱剂，最终得到化合物11；步骤S3：正丁醇部分浸膏用200～300目的硅胶拌样，干法上柱进行硅胶柱层析，以氯仿-甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱，其中氯仿与甲醇的梯度体积比依次为30:1、20:1、10:1、5:1、3:1、1:1、0:1，将对应洗脱液通过薄层色谱检识合并后共得到4个部分Fr.A-Fr.D；Fr.A：通过硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇为洗脱剂进行第一次梯度洗脱，其中氯仿与甲醇的梯度体积比依次为30:1、20:1、10:1、5:1、3:1、1:1、0:1，将第一次洗脱得到的样品经过薄层色谱检识后进行第二次硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱，其中氯仿与甲醇的梯度体积比依次为10:1、8:1、5:1、3:1、1:1、0:1，将第二次洗脱得到的样品再次经过薄层色谱检识后进行第三次硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇为洗脱剂进行等度洗脱，其中氯仿与甲醇的梯度体积比为5:1，最终得到化合物1；Fr.B：先用氯仿-甲醇进行硅胶柱层析，其中氯仿与甲醇的梯度体积比依次为10:1、8:1、5:1、0:1，将洗脱得到的样品经薄层色谱检识后用MCI-GELCHP20/P120反相柱色谱，以甲醇-水为洗脱剂进行梯度洗脱，其中甲醇的梯度体积百分含量依次为10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％，同样将此次洗脱得到的样品经薄层色谱检识后用葡聚糖凝胶柱SephadexLH20，以甲醇-水为洗脱剂进行梯度洗脱，其中甲醇的梯度体积百分含量依次为10％、15％、20％，将最终得到的样品经薄层色谱检识后得到化合物13；Fr.C：通过硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱，其中氯仿与甲醇的体积比依次为30:1、25:1、20:1、15:1、10:1、0:1，将洗脱得到的样品经过薄层色谱检识后再进行两次硅胶柱色谱，均以氯仿-甲醇为洗脱剂进行等度洗脱，其中氯仿与甲醇的体积比为10:1，依次将两次洗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.核桃青皮化学成分的提取、分离、纯化方法，其特征在于具体步骤为：步骤S1：取核桃青皮阴干粉碎后，在常温下用甲醇对其进行浸泡，每次浸泡6天，总共浸泡4次，过滤，滤液进行减压浓缩得甲醇提取物浸膏，再加入60~70℃温水悬浮，分别用乙酸乙酯和正丁醇对其进行多次萃取，萃取液减压浓缩分别得到乙酸乙酯部分浸膏和正丁醇部分浸膏；步骤S2：乙酸乙酯部分浸膏用200~300目的硅胶拌样，干法上柱进行硅胶柱层析，以氯仿‑甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱，其中氯仿与甲醇的梯度体积比依次为1:0、30:1、20:1、10:1、5:1、3:1、1:1、0:1，将洗脱液通过薄层色谱检识合并后得到6个部分Fr.

【技术特征摘要】
1.核桃青皮化学成分的提取、分离、纯化方法，其特征在于具体步骤为：步骤S1：取核桃青皮阴干粉碎后，在常温下用甲醇对其进行浸泡，每次浸泡6天，总共浸泡4次，过滤，滤液进行减压浓缩得甲醇提取物浸膏，再加入60~70℃温水悬浮，分别用乙酸乙酯和正丁醇对其进行多次萃取，萃取液减压浓缩分别得到乙酸乙酯部分浸膏和正丁醇部分浸膏；步骤S2：乙酸乙酯部分浸膏用200~300目的硅胶拌样，干法上柱进行硅胶柱层析，以氯仿-甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱，其中氯仿与甲醇的梯度体积比依次为1:0、30:1、20:1、10:1、5:1、3:1、1:1、0:1，将洗脱液通过薄层色谱检识合并后得到6个部分Fr.-Fr.VI；Fr.I：未分离；Fr.II：通过硅胶柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱，其中石油醚与乙酸乙酯的梯度体积比依次为15:1、10:1、5:1、3:1、1:1、0:1，再进行重结晶最终在体积比3:1处得到化合物12；Fr.III：通过硅胶柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯进行第一次梯度洗脱，其中石油醚与乙酸乙酯的梯度体积比依次为30:1、20:1、15:1、10:1、5:1、3:1、1:1、0:1，最终在石油醚与乙酸乙酯体积比5:1处由丙酮重结晶得到化合物3，在石油醚与乙酸乙酯体积比1:1处用丙酮进行重结晶得到化合物2，将第一次梯度洗脱得到的样品经过薄层色谱检识后进行第二次硅胶柱色谱，以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱，其中石油醚与乙酸乙酯的梯度体积比依次为10:1、5:1、3:1、1:1，将第二次梯度洗脱得到的样品再次经过薄层色谱检识后，一部分样品通过两次凝胶柱色谱以甲醇为洗脱剂进行洗脱得到化合物4，另一部分样品进行第三次硅胶柱色谱，以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱，其中石油醚与乙酸乙酯的梯度体积比依次为5:1、3:1、1:1，最终在体积比1:1处由丙酮重结晶得到化合物5；FrIV：先用大孔吸附树脂处理，以体积比80:20的甲醇-水作为洗脱剂进行洗脱得到的浸膏经硅胶柱层析，以氯仿-异丙醇为洗脱剂进行第一次梯度洗脱，其中氯仿与异丙醇的梯度体积比依次为20:1、10:1、5:1、1:1、0:1，将第一次梯度洗脱得到的样品经过薄层色谱检识后分为A部分和B部分，A部分再经两次硅胶柱层析，两次均以氯仿-异丙醇为洗脱剂进行等度洗脱，其中氯仿与异丙醇的体积比均为10:1，最终在体积比10:1处得到化合物6，B部分先经一次硅胶柱层析，以氯仿-异丙醇为洗脱剂进行梯度洗脱，其中氯仿与异丙醇的梯度体积比依次为25:1、20:1、15:1、10:1、0:1，将洗脱得到的样品经过薄层色谱检识后再分为B1部分和B2部分，B1部分经过两次硅胶柱层析，两次均以氯仿-异丙醇为洗脱剂进行等度洗脱，其中氯仿与异丙醇的体积比均为15:1，最终得到化合物10，B2部分经过两次硅胶柱层析，两次均以氯仿-异丙醇为洗脱剂进行等度洗脱，其中氯仿与异丙醇的体积比均为10:1，再由丙酮重结晶最终得到化合物7；Fr.V...

【专利技术属性】
技术研发人员：殷田田，闫福林，李彦灵，马矜烁，詹璐璐，吴亦男，石伟峰，
申请(专利权)人：新乡医学院三全学院，
类型：发明
国别省市：河南,41