同时去除低温地下水中腐殖酸和硝酸盐的假单胞菌及其应用制造技术

同时去除低温地下水中腐殖酸和硝酸盐的假单胞菌及其应用，涉及微生物领域，尤其涉及一株假单胞菌及其应用。是要解决现有的微生物无法同时去除地下水中腐殖酸和硝酸盐的问题。该假单胞菌为Pseudomonas poae Y5‑5，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2018年10月29日，保藏编号为CGMCC No.16654。该菌株能去除6～10℃地下水中的有机污染物和硝酸盐。经测定硝酸盐还原速率为43.54～90.21mg/L/h，有机物去除率为85.2％。本发明专利技术用于去除低温地下水中污染物。

Pseudomonas spp. for simultaneous removal of humic acid and nitrate from low temperature groundwater and its application

At the same time, the removal of humic acid and nitrate from low-temperature groundwater by Pseudomonas spp. and its application involve the field of microorganisms, especially one strain of Pseudomonas spp. and its application. To solve the problem that existing microorganisms can not simultaneously remove humic acid and nitrate from groundwater. Pseudomonas poae Y5 5 is deposited in the General Microbial Center of the China Council for the Preservation of Microbial Species. The date of preservation is October 29, 2018, and the number of preservation is CGMCC No. 16654. The strain can remove organic pollutants and nitrates from groundwater at 6-10 C. The reduction rate of nitrate was 43.54-90.21 mg/L/h and the removal rate of organic matter was 85.2%. The invention is used for removing pollutants in low temperature groundwater.

【技术实现步骤摘要】
同时去除低温地下水中腐殖酸和硝酸盐的假单胞菌及其应用
本专利技术涉及微生物领域，尤其涉及一株假单胞菌及其应用。
技术介绍
地下水是我国居民的生活用水主要来源之一。由于农业经济发展、农业化肥的大量施用，使部分地区的地下水中硝酸盐浓度过高，超过国家《生活饮用水卫生标准》(GB5749-2006)规定的10mg/L。如果饮用水中含有过量的硝酸盐容易引起高铁血红蛋白症，甚至会诱发癌症，对人体造成危害。由于土地渗滤作用，地下水中有机物通常是以难生物降解的腐殖酸形式存在。由于腐殖酸分子量高，难以通过微生物降解或活性炭吸附等方法去除，在经消毒工艺中氯氧化，容易生成三氯甲烷类物质(致癌、至畸、致突变)。如何在去除地下水中硝酸盐的同时，去除水中过量的腐殖酸类有机物仍是尚未解决的问题。
技术实现思路
本专利技术是要解决现有的微生物无法同时去除地下水中腐殖酸和硝酸盐的问题，提供一株同时去除低温地下水中腐殖酸和硝酸盐的假单胞菌及其应用。本专利技术同时去除低温地下水中腐殖酸和硝酸盐的假单胞菌为PseudomonaspoaeY5-5，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2018年10月29日，保藏编号为CGMCCNo.16654。本专利技术PseudomonaspoaeY5-5为专性好氧菌，革兰氏染色阴性，菌落凸起，粘稠，呈乳白色；氧化酶阳性，生长温度4～37℃，最适pH值为7.5～8.0。本专利技术PseudomonaspoaeY5-5可以产生硫化氢，可以水解明胶、尿素，可以还原硝酸盐；可以以蔗糖、肌糖、树胶醛糖、海藻糖、葡萄糖、葡萄糖酸、天冬酰胺、羟丁氨酸、阿拉伯醇、乙醇、乙酸钠、丁酸钠、苯甲酸钠为碳源进行生长；碱性磷酸酯酶、酯酶(C4)、白氨酸芳胺酶、缬氨酸芳胺酶、胱氨酸芳胺酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、酸性磷酸酶、萘酚-AS-BI磷酸水解酶阳性，可代谢脂类、萘酚类、萘胺类和多肽类化合物。本专利技术PseudomonaspoaeY5-5通过16SrDNA序列比对分析，与模式菌株PseudomonaspoaeP527/13T的相似性为99.78％。通过结合菌体形态特征、生长条件、生理生化鉴定结果确定，本专利技术的菌株Y5-5属于Pseudomonaspoae。本专利技术的假单胞菌在去除低温地下水中污染物的应用。进一步的，所述低温地下水为6～10℃的地下水。进一步的，所述污染物为有机污染物和硝酸盐。进一步的，所述有机污染物为腐殖酸。本专利技术PseudomonaspoaeY5-5去除6～10℃地下水中的有机污染物和硝酸盐。经测定硝酸盐还原速率为43.54～90.21mg/L/h，腐殖酸去除率为85.2％，经降解后，出水的TOC为1.35～2.06mg/L。本专利技术PseudomonaspoaeY5-5可分泌胞外分泌物，通过生物吸附作用吸附水中溶解性腐殖酸类有机物，并利用胞外水解酶，水解腐殖酸类有机物成为小分子有机物，以提高可生物利用的C/N比，提高对水中硝酸盐的还原效率。本专利技术PseudomonaspoaeY5-5，属于Pseudomonaspoae。保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2018年10月29日，保藏编号为CGMCCNo.16654。附图说明图1为本专利技术PseudomonaspoaeY5-5的革兰氏染色结果；图2为本专利技术PseudomonaspoaeY5-5的菌落照片。具体实施方式本专利技术技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。具体实施方式一：本实施方式同时去除低温地下水中腐殖酸和硝酸盐的假单胞菌为PseudomonaspoaeY5-5，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2018年10月29日，保藏编号为CGMCCNo.16654。本实施方式PseudomonaspoaeY5-5为专性好氧菌，革兰氏染色阴性(如图1所示)，菌落凸起，粘稠，呈乳白色(如图2所示)；氧化酶阳性，生长温度4～37℃，最适pH值为7.5～8.0。参照《伯杰细菌鉴定手册》第八版和《常见细菌系统鉴定手册》对本实施方式PseudomonaspoaeY5-5进行生理生化鉴定：本实施方式PseudomonaspoaeY5-5可以产生硫化氢，可以水解明胶、尿素，可以还原硝酸盐；可以以蔗糖、肌糖、树胶醛糖、海藻糖、葡萄糖、葡萄糖酸、天冬酰胺、羟丁氨酸、阿拉伯醇、乙醇、乙酸钠、丁酸钠、苯甲酸钠为碳源进行生长；碱性磷酸酯酶、酯酶(C4)、白氨酸芳胺酶、缬氨酸芳胺酶、胱氨酸芳胺酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、酸性磷酸酶、萘酚-AS-BI磷酸水解酶阳性，可代谢脂类、萘酚类、萘胺类和多肽类化合物。具体实施方式二：本实施方式PseudomonaspoaeY5-5的获取方法为：取受硝酸盐污染(硝酸盐浓度140mg/L)的低温地下水(水温4℃)100ml，在2～6℃、150rpm/min下富集12～20d，期间不断补充NaNO3和腐殖酸，待菌液的OD600值达到0.5以上后，梯度稀释并接种于固体培养基上，在2～6℃下培养5～7d，选取典型的单一菌落进行纯化培养。将最终获得的纯培养菌株进行硝酸盐还原试验，选取30min内对硝酸盐还原率达到50％以上、对有机物(TOC)去除率达70％以上的菌株。即为本实施方式的PseudomonaspoaeY5-5。所述培养基为：NaNO30.1～0.5g/L，MnSO40.01～0.05g/L，(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O0.01～0.10g/L，CaCl20.01～0.05g/L，腐殖酸0.10～10.0mg/L，Na2HPO40.3～0.9g/L，MgSO4·7H2O0.01～0.05g/L，NaCl0.3～0.9g/L，pH值7.0～7.4，(固体培养基中加入1.8g/L的琼脂)。对PseudomonaspoaeY5-5进行分子鉴定，提取菌株的总DNA，采用细菌的16SrDNA通用引物，正向引物5’-CAGAGTTTGATCCTGGCT-3’；反向引物5’-AGGAGGTGATCCAGCCGCA-3’，以基因组DNA为模板进行PCR扩增。PCR反应体系如下：20～50ng模板DNA，0.2μLTaq酶，2.5μL10×Buffer(含Mg2+)，1μLdNTP(各2.5mmol/L)，0.5μL正向引物，0.5μL反向引物，加入无菌去离子水至25μL。PCR扩增条件：94℃预变性4min，之后94℃变性45s，55℃扩增45s，72℃延伸1min，经过30次循环后，72℃延伸10min，之后4℃终止反应，将获得片段用于测序。PseudomonaspoaeY5-5的16SrDNA序列长度为1408bp，其序列提交至GenBank注册号为MH817854，16SrDNA序列如序列表中SEQIDNO：1所示。测序结果与GenBank中的16SrDNA序列进行同源性比对，通过16SrDNA序列比对分析，与模式菌株PseudomonaspoaeP527/13T的相似性为99.78％。通过结合菌体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.同时去除低温地下水中腐殖酸和硝酸盐的假单胞菌，其特征在于该菌株为Pseudomonas poae Y5‑5，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2018年10月29日，保藏编号为CGMCC No.16654。

【技术特征摘要】
1.同时去除低温地下水中腐殖酸和硝酸盐的假单胞菌，其特征在于该菌株为PseudomonaspoaeY5-5，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2018年10月29日，保藏编号为CGMCCNo.16...

【专利技术属性】
技术研发人员：张多英，贾学斌，吴淼男，张彦龙，白也，刘玉勇，刘红，
申请(专利权)人：黑龙江大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23