一种齐墩果酸接枝的壳聚糖载药纳米颗粒的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种齐墩果酸接枝的壳聚糖载药纳米颗粒的应用，载药纳米颗粒生物相容性良好，水合粒径大小在160nm左右，能最大程度的发挥EPR效应；齐墩果酸接枝壳聚糖载药纳米颗粒，能够有效促进乳腺癌细胞凋亡，并且减少化疗所引起的系统毒副作用。

Application of Oleanolic Acid Grafted Chitosan Drug-loaded Nanoparticles

The present invention relates to the application of oleanolic acid-grafted chitosan drug-loaded nanoparticles. The drug-loaded nanoparticles have good biocompatibility and the hydration size is about 160 nm, which can maximize the EPR effect. Oleanolic acid-grafted chitosan drug-loaded nanoparticles can effectively promote the apoptosis of breast cancer cells and reduce the systemic toxicity and side effects caused by chemotherapy.

【技术实现步骤摘要】
一种齐墩果酸接枝的壳聚糖载药纳米颗粒的应用
本专利技术属于壳聚糖载药纳米材料的应用领域，特别涉及一种齐墩果酸接枝的壳聚糖载药纳米颗粒的应用。
技术介绍
据统计，每年全世界大约有八百多万人死于癌症。近几十年来，越来越多的新型药物传递系统(DDS)，如脂质体、水凝胶、胶束和纳米颗粒，被设计成药物载体来提高疗效和减少副作用的。在这些DDS中，纳米颗粒已显示出在癌症治疗中极大的潜在临床应用。结合大量之前的研究也证实了纳米颗粒在药物缓释、延长治疗时间、增强药物在病变部位积累方面的有利作用。值得注意的是，选择具有良好生物相容性、生物降解性和低毒性的共聚物作为基体材料是合适的纳米颗粒成功设计的前提。壳聚糖(CS)是一种天然的阳离子碳水化合物，具有良好的生物相容性、低免疫原性和转运药物通过细胞膜的潜在能力。重要的是，在体内代谢酶的作用下，壳聚糖可以降解为水和二氧化碳，最终不会对机体产生不良影响。与此同时，壳聚糖在弱酸性pH环境(如肿瘤微环境)中具有较强的敏感性，因此壳聚糖广泛应用于pH响应药物传递领域。研究报道，壳聚糖纳米颗粒具有控制药物释放的优势，可以提高药物的溶解性和稳定性，提高药效，降低毒性。此外，壳聚糖纳米颗粒具有纳米级尺寸，使其具有通过体内生物屏障并通过EPR效应在病变部位有效积累的特性。虽然壳聚糖纳米颗粒具有很好的生物相容性，但常见的功能化修饰往往会引入一些外来物质(如NIPAM、DEGMA、goldNPs、MSN等)，给正常组织带来不可避免的系统毒性。为了克服这一不利因素，可以选择接枝合适的具有系统保护作用的共聚物，并且为壳聚糖提供兼容的疏水嵌段，以提供疏水药物存储的疏水核心。根据之前报道，ChawanManaspon等，同样利用叶酸修饰的壳聚糖载体，聚合普朗尼克作为DOX储药中心，并将这种智能纳米药物传递系统(ChawanManaspon，等.JournalofNanomaterials2012)，应用于乳腺癌靶向治疗治疗。该方法合成过程简单，操作步骤容易，也得到了较好的治疗效果。但该纳米载药系统对系统毒副作用较大，粒径偏小，极易在体内被代谢掉，药物血循环时间较短，不能最大程度发挥药效。因此对这种共载药系统的深入探究，具有广阔的研究前景。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种齐墩果酸接枝的壳聚糖载药纳米颗粒的应用，该齐墩果酸接枝壳聚糖载药纳米颗粒的生物相容性好，水合粒径大小在160nm左右，能最大程度的发挥EPR效应，可以有效发挥抗癌作用，且有减少系统毒副作用的效果，在乳腺癌靶向治疗方面具有巨大应用潜能。本专利技术一种齐墩果酸接枝的壳聚糖载药纳米颗粒在制备乳腺癌化疗药物中的应用。本专利技术的一种齐墩果酸接枝的壳聚糖载药纳米颗粒在制备减少乳腺癌化疗副作用药物中的应用。所述齐墩果酸接枝的壳聚糖载药纳米颗粒由下列方法制备，步骤包括：(1)将叶酸FA经EDC和NHS活化，将活化后的FA加到溶有壳聚糖的醋酸缓冲液中，避光搅拌，透析，冻干，得到接枝叶酸的壳聚糖FA-CS，其中FA、EDC和NHS的摩尔比为1:1～1.5:1～1.5，叶酸FA与壳聚糖的摩尔比为500:1～100:1；(2)在DMAP的存在下，将步骤(1)中FA-CS溶解在吡啶中，加入齐墩果酸OA，搅拌反应，纯化，得到接枝齐墩果酸的叶酸壳聚糖纳米颗粒FA-CS-g-OA，冻干，其中FA-CS、DMAP、吡啶和OA的摩尔比为1:0.00001～1:0.01～1:400～0.0001；(3)将步骤(2)中冻干后的FA-CS-g-OA溶于水中，将DOX溶解于有机溶剂中，将得到的FA-CS-g-OA溶液和DOX溶液一起密封在透析袋中透析，离心，得到齐墩果酸接枝的壳聚糖载药纳米颗粒FA-CS-g-OA@DOX，其中FA-CS-g-OA溶液浓度为8～15mg/mL，DOX溶液浓度为1～3mg/mL，FA-CS-g-OA与DOX的摩尔比为4:1～6:1。所述步骤(1)中将叶酸FA经EDC和NHS活化具体为：将叶酸FA、EDC和NHS加入到无水DMSO溶液中，在室温下搅拌0.5～2h。所述步骤(1)中醋酸缓冲液浓度为0.8～1.5％w/v；溶有壳聚糖的醋酸缓冲液pH值为4～5；避光搅拌为：室温下避光搅拌过夜。所述步骤(1)中透析为：用MWCO＝3000～5000的透析袋在1.0mMNaOH溶液中透析70～80小时。所述步骤(2)中搅拌反应温度为室温，搅拌反应时间为2～5h。所述步骤(2)中纯化具体为：旋转蒸发掉溶剂，得到的沉淀物溶解在丙酮中，用水冲洗三次。所述步骤(3)中透析袋是用Mw＝8000～10000Da的透析袋；透析温度为20～30℃，透析时间为40～50℃。所述步骤(3)中有机溶剂为DMSO；离心为：5000～8000rpm离心20～40分钟。将上述FA-CS-g-OA@DOX载药纳米颗粒与单独的DOX、齐墩果酸以及未载药的FA-CS-g-OA，分别通过荷瘤小鼠尾静脉注射入体内，比较各组药物治疗抗癌效果。所述各组药物注射的量为(7.5mgDOXequiv.kg-1)，DOX和齐墩果酸使用DMSO溶解，FA-CS-g-OA@DOX和FA-CS-g-OA使用生理盐水溶解。将上述各组药物分别通过荷瘤小鼠尾静脉注射入体内，30天后心脏取血，离心收集血清，检测各生化因子含量，比较各组药物引起副作用情况。所述抽取的血液离心条件为3500rpm离心15分钟，生化因子检测方法为酶联免疫(ELISA)法。有益效果(1)本专利技术利用齐墩果酸接枝的壳聚糖材料具有两亲性的特性，在水溶液中自组装成球形壳核结构，利用其疏水核心的疏水性载入大量细胞毒性药物DOX，进行抗癌研究，与ChawanManaspon等制备的壳聚糖材料相比，该制备方法实验原理简易、操作程序简单、条件温和；(2)本专利技术的齐墩果酸接枝壳聚糖载药纳米颗粒的生物相容性良好，水合粒径大小在160nm左右(ChawanManaspon等制备的壳聚糖材料粒径在37nm左右，极易在体内被迅速代谢掉)，能最大程度的发挥EPR效应；(3)本专利技术齐墩果酸接枝壳聚糖载药纳米颗粒，能够有效促进乳腺癌细胞凋亡，并且减少化疗所引起的系统毒副作用。附图说明图1为本专利技术FA-CS-g-OA@DOX载药纳米颗粒的红外(A)和紫外(B)图谱；图2为本专利技术FA-CS-g-OA@DOX载药纳米颗粒的SEM图；图3为本专利技术FA-CS-g-OA@DOX载药纳米颗粒的DLS图；图4为实施例2中药物DOX、齐墩果酸(OA)、载体FA-CS-g-OA及载药纳米颗粒FA-CS-g-OA@DOX对乳腺癌荷瘤小鼠的抗癌疗效结果；图5为实施例3中药物DOX、齐墩果酸(OA)、载体FA-CS-g-OA及载药纳米颗粒FA-CS-g-OA@DOX对乳腺癌荷瘤小鼠的肝功能(A)和肾功能(B)指标的影响；图6为实施例4中药物DOX、齐墩果酸(OA)、载体FA-CS-g-OA及载药纳米颗粒FA-CS-g-OA@DOX对乳腺癌荷瘤小鼠的抗炎(A)和抗氧化(B)指标影响；图7为实施例1中药物DOX、单纯的OA、载体FA-CS-g-OA及载药纳米颗粒FA-CS-g-OA@DOX对乳腺癌细胞中耐药性相关因子P-gp、MPR1和β-action的灰度值扫描图(A)以及对P-gp、MPR本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种齐墩果酸接枝的壳聚糖载药纳米颗粒在制备乳腺癌化疗药物中的应用。

【技术特征摘要】
2018.11.15 CN 20181135921231.一种齐墩果酸接枝的壳聚糖载药纳米颗粒在制备乳腺癌化疗药物中的应用。2.一种齐墩果酸接枝的壳聚糖载药纳米颗粒在制备减少乳腺癌化疗副作用药物中的应用。3.根据权利要求1、2任一所述应用，其特征在于，所述齐墩果酸接枝的壳聚糖载药纳米颗粒由下列方法制备，步骤包括：(1)将叶酸FA经EDC和NHS活化，将活化后的FA加到溶有壳聚糖的醋酸缓冲液中，避光搅拌，透析，冻干，得到接枝叶酸的壳聚糖FA-CS，其中FA、EDC和NHS的摩尔比为1:1～1.5:1～1.5，叶酸FA与壳聚糖的摩尔比为500:1～100:1；(2)在DMAP的存在下，将步骤(1)中FA-CS溶解在吡啶中，加入齐墩果酸OA，搅拌反应，纯化，得到接枝齐墩果酸的叶酸壳聚糖纳米颗粒FA-CS-g-OA，冻干，其中FA-CS、DMAP、吡啶和OA的摩尔比为1:0.00001～1:0.01～1:400～0.0001；(3)将步骤(2)中冻干后的FA-CS-g-OA溶于水中，将DOX溶解于有机溶剂中，将得到的FA-CS-g-OA溶液和DOX溶液一起密封在透析袋中透析，离心，得到齐墩果酸接枝的壳聚糖载药纳米颗粒FA-CS-g-OA@DOX，其中FA-CS-g-...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱利民，牛世伟，张雪静，陈霞，
申请(专利权)人：东华大学，
类型：发明
国别省市：上海,31