The invention discloses a method for extracting total RNA from microalgae cells. By grinding microalgae in plant RNA extraction auxiliary liquid containing quartz sand, the grinding and polysaccharide removal of microalgae can be accomplished quickly in one step, the demand for microalgae volume is greatly reduced, the experimental operation is greatly simplified and the experimental time-consuming is reduced. The invention combines the breaking of cell wall of microalgae with the removal of polysaccharides, and can complete cell wall breaking and polysaccharide removal within 5 minutes. Through the innovation and improvement of the overall extraction method, the extraction time of microalgae RNA can be shortened to less than 30 minutes. On this basis, all the operations of microalgae RNA extraction can be carried out in general laboratory environment without removing the special extraction environment of RNA enzymes. No DEPC water deRNAase treatment was needed for the experimental products. While alleviating the preliminary preparation work, it avoids the damage of DEPC water to the health of the researchers and protects the safety of the experimenters.
【技术实现步骤摘要】
一种微藻细胞总RNA的提取方法
本专利技术属于RNA提取领域,具体涉及了一种微藻细胞总RNA的提取方法。
技术介绍
微藻是一类含有叶绿素,能进行光合作用自养生长的一类微小生物的总称。由于其细胞富含藻多糖、蛋白质、脂肪酸等营养物质,而其又具有可以利用光合作用快速生长等特点而受到人们的广泛关注,在食品、保健、医疗等领域有着广阔的应用前景。微藻也由于其光合效率高、生长周期短、油脂含量高以及微藻生物柴油的物理和化学特性与传统柴油相似等特点,成为第三代生物柴油,作为现在最有希望实现工业化的生物柴油。微藻虽然具有很高的价值和良好的应用前景,但是其实现工业化的产品却很少,其中一个很重要的原因是其基础研究的薄弱。基于微藻RNA的功能基因相对荧光定量分析,转录组测序及分析在微藻的基础及前沿研究中扮演了非常重要的作用。而微藻RNA提取的便捷性也直接影响到整体实验工作的进展速度。但是目前关于微藻RNA的提取仍存在几个问题:1,微藻RNA提取时样品量需求量大:传统微藻RNA提取第一步通常是液氮研磨,所以较大的样品量,使得动态监测微藻RNA水平变得困难。2,微藻多糖严重影响RNA提取:藻细胞中富含藻多糖,而多糖会在微藻破壁后结合RNA一起沉淀,使得RNA的提取质量严重下降,而且微藻培养到后期其多糖的含量增加,更加增加了RNA提取的困难。3,DEPC水的危害:一般提取RNA时,所有的实验用品,实验产所都要经过DEPC水去RNA酶处理,而DEPC水是致癌的,严重影响研究者的人身安全。4,微藻RNA提取耗时长:由于提取微藻RNA的所有实验用品、工作台要经过去RNA酶处理,微藻要液氮研磨, ...
【技术保护点】
1.一种微藻细胞总RNA的提取方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)将2~6mL藻液离心浓缩收集的微藻细胞置于2mL离心管中;加入0.5~1.0mL植物RNA提取辅助液和0.3~0.8g石英砂,振荡破碎细胞后离心,收集上清液,用于后续的RNA提取。
【技术特征摘要】
1.一种微藻细胞总RNA的提取方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)将2~6mL藻液离心浓缩收集的微藻细胞置于2mL离心管中;加入0.5~1.0mL植物RNA提取辅助液和0.3~0.8g石英砂,振荡破碎细胞后离心,收集上清液,用于后续的RNA提取。2.根据权利要求1所述的微藻细胞总RNA的提取方法,其特征在于:还包括如下步骤:(2)将上清液置于1.5mL离心管中,加入0.5mLTrizol混匀,加入200μL氯仿,剧烈振荡,待溶液充分乳化后,离心,上清液转移至新的1.5mL离心管中;(3)加入等体积异丙醇,0.8~1μL核酸助沉剂,上下颠倒离心管充分混匀后,室温静置,离心,弃上清;(4)加入75%乙醇,上下颠倒离心管充分混匀后,离心,弃上清,室温干燥,加入20~30μL的RNase-free水溶解沉淀,得到总RNA。3.根据权利要求1或2所述的微藻细胞总RNA的提取方法,其特征在于:所述的微藻包括但不限于Chlorellasacchrarophila、Chlorellapyrenoidosa、Scenedesmusobliquus、Chlamydomonasreinhardtii和Chlorellaluteorividis中的至少一种。4.根据权利要求2所述的微藻细胞总RNA的提取方法,其特征在于:步骤(1)中所述的藻液的体积为4mL;步骤(1)中,加入0.5mL植物RNA提取辅助液和0.5g石英砂;步骤(3)中所述的核酸助沉剂的用量为1μL。5.根据权利要求1或2所述的微藻细胞总RNA的提取方法,其特征在于:步骤(1)中所述的离心浓缩的转速为10000~1200...
【专利技术属性】
技术研发人员:林炜铁,罗剑飞,谢章彰,
申请(专利权)人:华南理工大学,
类型:发明
国别省市:广东,44
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。