一种以透析袋为基础的高效割胶回收系统及其应用技术方案

本发明专利技术提供一种以透析袋为基础的高效割胶回收系统，由DNA电泳缓冲液，透析袋，透析袋夹，手提式紫外灯，玻璃板，平衡液，结合液，DNA吸附柱，漂洗液，洗脱液组成，其中选用截留分子量小于要回收的核酸分子量的透析袋。本发明专利技术提供的割胶回收系统，可在DNA割胶回收中的应用。通过本发明专利技术应用后的核算回收率可达80％左右，显著高于现有商业化传统割胶回收试剂盒(传统方法回收率20％左右)，回收率可提高3‑4倍。本发明专利技术方法操作简单，且不用等待胶块加热融化，大约30分钟即可完成回收，用时短，价格低廉，简便易行，易于推广。

An Efficient Rubber Cutting Recovery System Based on Dialysis Bag and Its Application

The invention provides an efficient rubber tapping recovery system based on a dialysis bag, which consists of DNA electrophoresis buffer, dialysis bag, dialysis bag clip, portable ultraviolet lamp, glass plate, balance liquid, binding liquid, DNA adsorption column, rinsing liquid and eluent, in which a dialysis bag with molecular weight less than the molecular weight of the nucleic acid to be recovered is selected. The rubber cutting recovery system provided by the invention can be used in DNA rubber cutting recovery. The accounting recovery rate after the application of the present invention can reach about 80%, which is significantly higher than that of the commercial traditional rubber cutting Recovery Kit (about 20% of the recovery rate of the traditional method), and the recovery rate can be increased by 3_4 times. The method of the invention has the advantages of simple operation, no need to wait for the rubber block to be heated and melted, and can be recovered in about 30 minutes. The method has the advantages of short time, low cost, simple operation and easy popularization.

【技术实现步骤摘要】
一种以透析袋为基础的高效割胶回收系统及其应用
本专利技术属于核酸纯化系统，涉及一种DNA割胶回收系统，尤其是涉及一种以透析袋为基础的高效割胶回收系统及其应用。
技术介绍
DNA割胶回收是最基本的分子生物学操作之一，广泛用于载体构建等。近来年，以DNA疫苗等为代表的核酸治疗方法的兴起，使得DNA的需求量大大增加，因而，提高DNA割胶纯化的效率至关重要。然而，传统的DNA割胶回收方法需要加热将凝胶溶解，操作时间长，回收效率低。商业化DNA割胶回收试剂盒宣称回收效率在80％左右，但实验中实际回收效率在10-20％左右。因而，如何提高回收效率，以降低生产成本显得非常重要。本专利技术通过将目的胶条放入透析袋中继续电泳，使得凝胶中的DNA电泳至透析袋中，直接用透析袋内液体进行回收，大大提高了回收效率，且避免加热溶胶过程，极大地节约了回收时间，简单方便，易于推广。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种以透析袋为基础的高效割胶回收系统，由DNA电泳缓冲液，透析袋，透析袋夹，手提式紫外灯，玻璃板，平衡液，结合液，DNA吸附柱，漂洗液，洗脱液组成，其中透析袋的截留分子量选用小于要回收的核酸分子量。其中DNA电泳缓冲液为TAE缓冲液，平衡液为pH值至9.0～10.0的三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液，结合液为pH值至5.0～7.0的三羟甲基氨基甲烷(Tris)和四乙酸二钠(EDTA)的混合溶液，漂洗液选用乙醇，洗脱液为无核糖核酸酶的去离子水，透析袋根据要回收的核酸分子量选择截留分子量，要求是核酸分子量大于截留分子量。其中透析袋的截留分子量小于要回收的核酸分子量，优选为3.5KD、1KD，以防止DNA跑出透析袋。所用DNA电泳缓冲液、平衡液，结合液，DNA吸附柱，漂洗液，洗脱液均可用市售成品。本专利技术的另一个目的是提供上述割胶回收系统在DNA割胶回收中的应用。本专利技术所述割胶回收系统的应用，通过以下步骤实现：在DNA电泳结束后，将目的条带进行割胶，割下的胶条装入透析袋内，并根据胶条大小，在透析袋内加入适量DNA电泳缓冲液，用夹子夹闭透析袋，继续电泳，将手提式紫外灯置于玻璃板下方进行实时观察，当观察到DNA条带从凝胶中消失时停止电泳，打开透析袋，收集透析袋内液体，加入结合液，随后使用平衡液预处理DNA吸附柱，将样品加入到DNA吸附柱中离心，使DNA与吸附柱结合，使用漂洗液漂洗2次，室温放置数分钟干燥，最后加入洗脱液洗脱。本专利技术提供的割胶回收系统，回收核酸效率可达80％左右，显著高于现有商业化传统割胶回收试剂盒(传统方法回收率20％左右)，使用本专利技术方法回收核酸的回收率可提高3-4倍。本专利技术方法操作简单，且不用等待胶块加热融化，大约30分钟即可完成回收，用时短，价格低廉，简便易行，易于推广。附图说明图1为本专利技术系统的部分物品结构示意图。图2为使用本专利技术回收系统，DNA从凝胶中转移到透析袋中。图3为DNA电泳比较回收前，传统方法割胶回收以及使用本专利技术系统回收后的电泳图。图4为计算得到的DNA回收效率统计图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步的说明。实施例1参见图1，一种以透析袋为基础的高效割胶回收系统，由DNA电泳缓冲液，透析袋，透析袋夹，手提式紫外灯，玻璃板，平衡液，结合液，DNA吸附柱，漂洗液，洗脱液组成。准备本专利技术的各项物品，图1中A为手提式紫外灯，B为玻璃板，C为透析袋，D为透析袋夹。在DNA电泳结束后，紫外灯下割胶得到目的胶条，将胶条置入透析袋中，向透析袋中加入电泳液，夹闭透析袋，凝胶成像，记录此时的胶条上DNA。继续电泳，将手提式紫外灯置于玻璃板下方进行实时观察，当观察到DNA条带从凝胶中消失时停止电泳，凝胶成像。如图2所示，将胶条置于透析袋内不影响电泳，DNA从胶条内(图2A)电泳至透析袋中(图2B)。透析袋根据要回收的核酸分子量选择截留分子量，要求是核酸分子量大于截留分子量，以防止DNA跑出透析袋。本实施例所用DNA电泳缓冲液、平衡液，结合液，DNA吸附柱，漂洗液，洗脱液均购于天根生化科技(北京)有限公司成品。实施例2取相同量的DNA，分2个孔进行电泳。在DNA电泳结束后，紫外灯下割胶得到相同量的目标胶条2份。将1份胶条用天根生化科技(北京)有限公司生产的大量琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(货号DP210)进行回收。另一份胶条置入透析袋中，向透析袋中加入电泳液，夹闭透析袋，继续电泳，将手提式紫外灯置于玻璃板下方进行实时观察，当观察到DNA条带从凝胶中消失时停止电泳，打开透析袋，收集透析袋内液体，加入结合液，随后使用平衡液预处理DNA吸附柱，将样品加入到DNA吸附柱中离心，使DNA与吸附柱结合，使用漂洗液漂洗，室温放置数分钟干燥，最后加入洗脱液洗脱。将回收前的DNA，以及使用传统方法和本专利技术所得的洗脱液重新进行电泳，比较回收效率。结果如图3所示，使用本专利技术得到的洗脱液，DNA含量明显高于传统方法，并与回收前的DNA含量接近。本实施例回收核酸大小为500bp，折算分子量约为30KD，可使用截留分子量为30KD以下的透析袋，本次实验使用3.5KD透析袋。实施例3取相同量的DNA，分2个孔进行电泳。在DNA电泳结束后，紫外灯下割胶得到相同量的目标胶条2份。将1份胶条用天根生化科技(北京)有限公司生产的大量琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(货号DP210)进行回收。另一份胶条置入透析袋中，向透析袋中加入电泳液，夹闭透析袋，继续电泳，将手提式紫外灯置于玻璃板下方进行实时观察，当观察到DNA条带从凝胶中消失时停止电泳，打开透析袋，收集透析袋内液体，加入结合液，随后使用平衡液预处理DNA吸附柱，将样品加入到DNA吸附柱中离心，使DNA与吸附柱结合，使用漂洗液漂洗，室温放置数分钟干燥，最后加入洗脱液洗脱。测定回收前的DNA，以及使用传统方法和本专利技术所得的洗脱液中的DNA浓度，并根据洗脱液的体积，计算DNA含量，分析使用传统方法和本专利技术所得洗脱液的回收效率。结果如图4所示，使用本专利技术所述方法，回收效率大约在80％左右，显著高于传统割胶回收组(传统回收率20％左右)，本专利技术方法可提高3-4倍。本实施例回收核酸大小为500bp，折算分子量约为30KD，可使用截留分子量为30KD以下的透析袋，本次实验使用3.5KD透析袋。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种以透析袋为基础的高效割胶回收系统，其特征在于，由DNA电泳缓冲液，透析袋，透析袋夹，手提式紫外灯，玻璃板，平衡液，结合液，DNA吸附柱，漂洗液，洗脱液组成，其中选用截留分子量小于要回收的核酸分子量的透析袋。

【技术特征摘要】
1.一种以透析袋为基础的高效割胶回收系统，其特征在于，由DNA电泳缓冲液，透析袋，透析袋夹，手提式紫外灯，玻璃板，平衡液，结合液，DNA吸附柱，漂洗液，洗脱液组成，其中选用截留分子量小于要回收的核酸分子量的透析袋。2.根据权利要求1所述的一种以透析袋为基础的高效割胶回收系统，其特征在于，其中DNA电泳缓冲液为TAE缓冲液，平衡液为pH值至9.0～10.0的三羟甲基氨基甲烷溶液，结合液为pH值至5.0～7.0的三羟甲基氨基甲烷和四乙酸二钠的混合溶液，漂洗液选用乙醇，洗脱液为无核糖核酸酶的去离子水。3.根据权利要求1所述的一种以透析袋为基础的高效割胶回收系统，其特征在于，透析袋的截留分子量小于要回收的核酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙泽玮，陈文静，郑良荣，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33