一株原油降解菌株及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一株原油降解菌株及其应用，所述菌株分类命名为中度嗜盐菌（Salinicola sp.）X4，保藏编号为CCTCC NO：M2018773，属于革兰氏阴性菌。该菌株不透明，米黄色，菌株细胞为短杆状。与现有原油降解菌株相比，本发明专利技术提供菌株的降解效率高，培养简单，适于高盐环境，在石油行业高盐含油废水及海上原油泄漏事故处理中有良好的应用潜力。

A Crude Oil Degrading Strain and Its Application

The present invention relates to a crude oil degrading strain and its application. The strain is classified as Salinicola sp. X4, and its storage number is CCTCC NO: M2018773, belonging to Gram-negative bacteria. The strain is opaque, beige, and its cells are short rods. Compared with the existing crude oil degrading strains, the strains provided by the invention have high degradation efficiency, simple cultivation, and are suitable for high-salt environment, and have good application potential in treating high-salt oily wastewater in the petroleum industry and oil spill accidents at sea.

【技术实现步骤摘要】
一株原油降解菌株及其应用
本专利技术属于微生物
，具体涉及一株原油降解菌株及其应用。
技术介绍
石油又称为地球的“黑色血液”，在国家和地区经济发展中具有举足轻重的作用。随着石油资源的不断开发和利用，并行产生的污染问题也越发严重。在石油勘探开发过程中，钻井、采油、运输、贮存、利用等环节中，往往会产生含油污水、油泥、油污土壤等环境问题。伴随着原油条件、地质条件或采油条件的不同，往往会有高盐、高pH、高温等极端条件出现，如果不能在这些极端环境中良好地处理石油烃类物质，往往会造成严重的环境问题，甚至会威胁到人类的生命安全。在高盐油污废水处理过程中，物理法和化学方法普遍会出现处理不彻底、经济效益不理想、二次污染等问题，而难以实现推广。随着极端环境的生物资源的开发和生物技术的发展，通过生物途径解决此类问题成为了可能。嗜盐菌是一类适合在高盐环境下生长的微生物，其特殊的功能酶和细胞结构具有很好的环境耐受性，是一类较为理想的原油降解菌株。可以应用于处理海上原油泄漏、货轮油舱清洗及盐碱土壤修复等问题。中国专利CN108300674A公布了一种石油降解菌及其应用，利用分支杆菌（Mycobacteriumsp.）CSC-6菌株对150-1500mg/L原油1-3d降解率达到63.70-78.45%，对10-100g/L原油0-7d降解率达到18.25-50.10%。中国专利CN104017747B公布了一种石油降解菌及其应用，利用谷氨酸棒杆菌（Corynebacteriumglutamicum）降解含油污泥，在37℃培养30天后石油烃降解率达39.69%。中国专利CN10276424A公布了一种原油降解嗜盐菌--芽孢杆菌（Bacillussubtilissp.）Y-B，并提供了其在不同类型的高盐含油废液处理中的应用。该菌从油田钻井废弃泥浆中分离得到，加入体积比达2~10%时，在25~30℃培养7d能够使得190~2200mg/L的石油总烃降解率达到70%以上。以上专利中提供的菌株，短期内对含油量较少的环境下都有较为高效的降解效率。但对于高含盐环境下，具有良好经济效益的原油降解菌株考察并未有显著成果。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株嗜盐菌及其应用，所述嗜盐菌可在高盐环境下良好地处理石油烃类物质降解，为含盐油污废水处理提供了一种高效、廉价、环境友好的方法。为实现上述技术目的，本专利技术采用如下技术方案：一株原油降解菌株，其分类命名为中度嗜盐菌（Salinicolasp.）X4，保藏编号为CCTCCNO：M2018773。所述嗜盐菌在透射电镜下观察细胞形态为短杆状，有鞭毛；固体培养基培养菌落为淡黄色、表面光滑、湿润、易挑取、边缘整齐。所述嗜盐菌的筛选方法为：将被原油污染的土样作为菌株来源，在温度30-40℃条件下，在原油为唯一碳源的高盐无机盐培养基中培养3-5d，待培养基浑浊后，吸取培养上液转入新鲜的灭菌高盐无机盐培养基中，连续传代培养3-5次。将多次传代培养的培养基加入无菌水，梯度稀释涂布到LB平板上，在30-40℃恒温培养箱中培养2-3d，分别挑选培养获得的不同菌落形态的菌落转接到LB培养基中富集培养，获得多株单菌。将获得的菌株分别接入含原油2-3g/L高盐无机盐培养基中，30-40℃，200rpm培养3-5d，分析菌株的生长状况和原油的降解效率，最终得到一株对原油有高效降解作用的菌株。所述的高盐无机盐培养基的成分模拟高盐含油废水成分，各组分质量百分比为：NaCl5%，NH4Cl0.4%，KH2PO40.05%，K2HPO40.05%，MgSO4·6H2O0.033%，酵母膏0.05%，金属离子母液0.1%，其余为蒸馏水，并调节pH到6.5±0.1。金属离子母液各组分质量百分比为：FeSO4·7H2O1%，CaCl20.1%，ZnSO40.2%，MnSO4·7H2O0.05%，CuSO4·5H2O0.01%，Na2MoO40.01%，H3BO30.002%。固体LB培养基各组分质量百分比为：蛋白胨1%，酵母粉0.5%，氯化钠5%，琼脂粉2%，其余为蒸馏水。本专利技术的另一个目的是提供上述原油降解菌株在降解原油烃类中的应用。本专利技术提供的一种应用方法为，利用嗜盐菌对废液中的石油进行降解处理，培养一定时间后能够良好地将石油烃乳化，将其降解为二氧化碳和水等代谢产物。通过种子培养基培养1-2天将菌株活化，以1%接种量转接到含油的高盐无机盐培养基中，30~40℃，震荡培养3-5天，过程中不添加其他培养物或补料。培养完成后用石油醚萃取剩余原油，在60℃烘箱中将石油醚充分烘干后称取残余的石油烃重量，计算石油降解率。所述种子培养基为高含盐LB培养基，其各组分质量百分比为：蛋白胨1%，酵母粉0.5%，氯化钠5%，其余为蒸馏水。所述高盐无机盐培养基各组分质量百分比为：原油0.2-0.3%，NaCl，NH4Cl0.4%，KH2PO40.05%，K2HPO40.05%，MgSO4·6H2O0.033%，酵母膏0.05%，金属离子母液0.1%，其余为蒸馏水；所述金属离子母液各组分质量百分比为：FeSO4·7H2O1%，CaCl20.1%，ZnSO40.2%，MnSO4·7H2O0.05%，CuSO4·5H2O0.01%，Na2MoO40.01%，H3BO30.002%。优选的，高盐无机盐培养基中含盐量为2.5~10%。进一步的，高盐无机盐培养基中还可加入鼠李糖脂，与嗜盐菌X4菌株进行复配，联用驱油。本专利技术的嗜盐菌（Salinicolasp.）X4，降解效率高，培养简单，适于高盐环境，在石油行业高盐含油废水及海上原油泄漏事故处理中有良好的应用潜力，为丰富高盐环境原油降解菌库和高盐环境下的解烃技术提供参考。附图说明图1是Salinicolasp.X4菌落图；图2是Salinicolasp.X4透射电镜图；图3是Salinicolasp.X4菌株发育树；图4是Salinicolasp.X4原油降解率与盐度关系图；图5是Salinicolasp.X4不同盐度下生长情况图；图6是Salinicolasp.X4不同温度下生长情况图；图7是Salinicolasp.X4不同pH下生长情况图；图8是Salinicolasp.X4与不同烃类物质的乳化特性；图9是Salinicolasp.X4对不同盐度下柴油降解性能；图10是Salinicolasp.X4对不同浓度的柴油降解性能；图11是GC-MS内标品萘的出峰；图12是GC-MS检测降解前柴油；图13是GC-MS检测降解后柴油；图14是不同类表面活性剂对菌体生长的影响；图15是不同类表面活性剂对菌体柴油各链长降解作用的影响；图16是不同类表面活性剂对菌体柴油降解作用的影响；本专利技术所述的生物材料，其分类命名为中度嗜盐菌（Salinicolasp.）X4，已于2018年11月12日保藏于中国典型培养物保藏中心（简称CCTCC，地址：中国.武汉.武汉大学），保藏编号为CCTCCNO：M2018773。具体实施方式实施例1：嗜盐菌Salinicolasp.X4的分离纯化、筛选、鉴定菌株的分离纯化：（1）称取1-2g青海油田附近的被原油污染的土壤土样，加入原油高盐无机盐培养基（培养基各组分质量百分比为：原油0.2-0.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株原油降解菌株，其分类命名为中度嗜盐菌（

【技术特征摘要】
1.一株原油降解菌株，其分类命名为中度嗜盐菌（Salinicolasp.）X4，保藏编号为CCTCCNO：M2018773。2.权利要求1所述原油降解菌株在降解原油烃类中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，包括：将中度嗜盐菌X4在种子培养基中活化后，接种至含原油的高盐无机盐培养基中震荡培养。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述种子培养基为高含盐LB培养基，其各组分质量百分比为：蛋白胨1%，酵母粉0.5%，氯化钠5%，其余为蒸馏水。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述震荡培养温度为30~40℃。6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，培养pH为6.5±0.1。7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述高盐无机盐培养基各组分质...

【专利技术属性】
技术研发人员：李霜，林佳辉，张坤成，郑欣然，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32