一种基于固体发酵的北冬虫夏草多糖提取纯化工艺制造技术

技术编号:20930057 阅读:50 留言:0更新日期:2019-04-20 12:47
一种基于固体发酵的北冬虫夏草多糖提取纯化工艺,包括如下步骤:A、将北冬虫夏草菌种培养得到种子液;B、种子液固体发酵得到北冬虫夏草子实体;C、北冬虫夏草子实体粉碎得到北冬虫夏草混合液;D、北冬虫夏草混合液提取得到多糖浓缩液;E、多糖浓缩液离心处理得到北冬虫夏草多糖提取物;F、北冬虫夏草多糖提取物脱色得到北冬虫夏草多糖提取物无色溶液;G、北冬虫夏草多糖提取物无色溶液除去蛋白,得到北冬虫夏草粗多糖;H、北冬虫夏草粗多糖进一步纯化得到北冬虫夏草多糖。本发明专利技术的提取纯化工艺,实现了培养、提取、纯化连续处理,提取效率高,多糖产率高,操作较简单。

Extraction and Purification of Cordyceps militaris Polysaccharide Based on Solid Fermentation

A solid fermentation-based extraction and purification process of Cordyceps militaris polysaccharides includes the following steps: A. Cordyceps militaris strains were cultured to obtain seed liquor; B. Cordyceps militaris fruiting body was obtained by solid fermentation of seed liquor; C. Cordyceps militaris fruiting body was crushed to obtain Cordyceps militaris mixed liquor; D. Cordyceps militaris mixed liquor was extracted to obtain polysaccharide concentrated liquor; E. polysaccharide concentrated liquor was separated Cordyceps militaris Polysaccharide Extract was obtained by heart treatment; F, Cordyceps militaris Polysaccharide Extract decolorized to obtain the colorless solution of Cordyceps militaris Polysaccharide extract; G, Cordyceps militaris Polysaccharide Extract colorless solution to remove protein, Cordyceps militaris Polysaccharide was obtained; H, Cordyceps militaris Polysaccharide was further purified to obtain Cordyceps militaris militaris The extraction and purification process realizes continuous treatment of culture, extraction and purification, has high extraction efficiency, high polysaccharide yield and simple operation.

【技术实现步骤摘要】
一种基于固体发酵的北冬虫夏草多糖提取纯化工艺
本专利技术涉及微生物培养和天然产物提取
,具体涉及一种基于固体发酵的北冬虫夏草多糖提取纯化工艺。
技术介绍
北冬虫夏草又名蛹虫草、北虫草,属子囊菌亚门、核菌纲、球壳目、麦角菌科、虫草属真菌。其为虫草属的模式种,分布广泛,为世界各国学者所认识和接受且在人工条件下育成了完整子座而且北冬虫夏草具有更高含量的虫草多糖和虫草素等有效成分,其独特药理作用已日益引起药学界的高度重视。由于北冬虫夏草具有以上优点,成为虫草属中药用虫草菌的佼佼者。北冬虫夏草人工培养技术的成功,为我国开辟了名贵药材产业化生产的又一片天空。目前,国内北冬虫夏草的人工培养已进入到产业化阶段。虫草多糖,或称多糖,作为北冬虫夏草的主要活性成分之一,是北冬虫夏草中含量最高的药理活性物质,含量可以达到10%,是一种很有价值的潜在新型药食两用资源。虫草多糖是由甘露糖、虫草素、腺苷、半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖、岩藻糖等组成的多聚糖。它的抗癌活性和免疫活性引起人们的极大兴趣,另外冬虫夏草还用于治肺结核、气短喘咳、阳痿、梦遗、自汗盗汗、腰膝酸痛等。目前在工业生产中虫草多糖主要从蛹虫草子实体中提取。但是由于虫草子实体的生产成本高,从而导致虫草多糖的生产成本极高。目前用虫草多糖的提取方法主要有热水浸提法、酸浸提法、碱浸提法、超声波提取法、微波提取法等。此外,利用人工发酵冬虫夏草菌来获得与天然冬虫夏草化学组成成分以及药理作用基本相同的菌丝体,成为当下解决虫草资源短缺的一种最可行的方法。但是,现有的北冬虫夏草多糖提取工艺,不能实现培养提取纯化连续处理,提取效率低,北冬虫夏草多糖产率低,操作过程复杂,成本较高,且不能将多糖进一步分离纯化,无法得到纯度较高的多糖组分,使北冬虫夏草多糖产品的开发利用收到限制。基于上述情况,本专利技术提出了一种基于固体发酵的北冬虫夏草多糖提取纯化工艺可有效解决以上问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种基于固体发酵的北冬虫夏草多糖提取纯化工艺。本专利技术的基于固体发酵的北冬虫夏草多糖提取纯化工艺,实现了培养、提取、纯化连续处理,提取效率高,北冬虫夏草多糖产率高,操作过程较简单,成本较低,且能将多糖进一步分离纯化,得到纯度较高的多糖组分,有利于北冬虫夏草多糖产品的开发利用。本专利技术通过下述技术方案实现:一种基于固体发酵的北冬虫夏草多糖提取纯化工艺,包括如下步骤:A、将北冬虫夏草菌种接种到北冬虫夏草种子培养基上,放进摇床培养箱,培养2.5-4d,所述北冬虫夏草种子培养基的组成包括以下重量份的原料:蔗糖20-30份、酵母膏1.5-3份、磷酸二氢钾0.8-1.1份硫酸镁0.5-0.7份、蒸馏水1000份;B、将步骤A得到的种子液,接种到经灭菌处理的北冬虫夏草固体培养基上,接种量为8-11%,放进恒温恒湿培养箱中,在28.5℃温度条件下,发酵5-8天,得到北冬虫夏草子实体;所述北冬虫夏草固体培养基包括以下重量份的原料:小麦粉1000份,土豆粉190-215份、葡糖糖25-35份、磷酸二氢钾2.1-3.5份、蛋白陈2.5-3.6份、硫酸镁0.9-1.3份、蒸馏水450-600份;C、将步骤B得到的北冬虫夏草子实体放入破壁机中,加入10-12倍质量的蒸馏水,粉碎5-15min,得到北冬虫夏草混合液;D、将步骤C得到的北冬虫夏草混合液,超声波处理40-50min,在70-80℃下回流提取3-4.5h,提取液过滤后浓缩,得到多糖浓缩液;E、在步骤D得到的多糖浓缩液中加入2.8-3.4倍体积的无水乙醇,搅拌后冷却至4℃,静置18-36小时,进行离心处理,并将沉淀烘干得到北冬虫夏草多糖提取物;F、步骤E得到的北冬虫夏草多糖提取物加蒸馏水溶解,调节pH值至8-9,滴加双氧水溶液至无色,50-60℃保温2-3h,得到北冬虫夏草多糖提取物无色溶液;G、将步骤F得到的北冬虫夏草多糖提取物无色溶液与木瓜蛋白酶和淀粉酶混合溶液混合,两者的体积比为1:(0.45-0.6),60-65℃酶解1-2h;在酶解液中加入20%体积的Sevage试剂,振荡培养0.5-1h,然后多次离心直至无蛋白沉淀析出为止,取上清液,烘干,得到北冬虫夏草粗多糖;H、将步骤G得到的北冬虫夏草粗多糖用蒸馏水溶解后上DEAE琼脂糖凝胶FF离子交换层析柱,用氯化钠溶液进行梯度洗脱,得到北冬虫夏草多糖。本专利技术的基于固体发酵的北冬虫夏草多糖提取纯化工艺,实现了培养、提取、纯化连续处理,提取效率高,北冬虫夏草多糖产率高,操作过程较简单,成本较低,且能将多糖进一步分离纯化,得到纯度较高的多糖组分,有利于北冬虫夏草多糖产品的开发利用。优选的,步骤B中所述北冬虫夏草种子培养基的组成包括以下重量份的原料:蔗糖25份、酵母膏2.5份、磷酸二氢钾0.9份硫酸镁0.6份、蒸馏水1000份。优选的,步骤B中所述北冬虫夏草固体培养基包括以下重量份的原料:小麦粉1000份,土豆粉205份、葡糖糖30份、磷酸二氢钾2.8份、蛋白陈3.2份、硫酸镁1.1份、蒸馏水520份。优选的,步骤B中所述摇床培养箱的培养条件控制为110-125r/min的转速、28℃的环境温度。优选的,步骤D中所述的浓缩是在60℃下浓缩。优选的,步骤F中所述的双氧水溶液,体积浓度为25%。优选的,步骤G中所述木瓜蛋白酶和淀粉酶混合溶液中木瓜蛋白酶与淀粉酶的质量比为0.8:(1.2-1.4)。优选的,步骤G中所述的离心是6000r/min离心10min。本专利技术与现有技术相比,具有以下优点及有益效果:1、本专利技术的基于固体发酵的北冬虫夏草多糖提取纯化工艺,实现了培养、提取、纯化连续处理,提取效率高,北冬虫夏草多糖产率高,操作过程较简单,成本较低,且能将多糖进一步分离纯化,得到纯度较高的多糖组分,有利于北冬虫夏草多糖产品的开发利用。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步地详细说明,但本专利技术的实施方式不限于此。下述实施例中所述试验方法或测试方法,如无特殊说明,均为常规方法;所述试剂和材料,如无特殊说明,均从常规商业途径获得,或以常规方法制备。实施例1:一种基于固体发酵的北冬虫夏草多糖提取纯化工艺,包括如下步骤:A、将北冬虫夏草菌种接种到北冬虫夏草种子培养基上,放进摇床培养箱,培养2.5-4d,所述北冬虫夏草种子培养基的组成包括以下重量份的原料:蔗糖20-30份、酵母膏1.5-3份、磷酸二氢钾0.8-1.1份硫酸镁0.5-0.7份、蒸馏水1000份;B、将步骤A得到的种子液,接种到经灭菌处理的北冬虫夏草固体培养基上,接种量为8-11%,放进恒温恒湿培养箱中,在28.5℃温度条件下,发酵5-8天,得到北冬虫夏草子实体;所述北冬虫夏草固体培养基包括以下重量份的原料:小麦粉1000份,土豆粉190-215份、20g葡糖糖25-35份、磷酸二氢钾2.1-3.5份、蛋白陈2.5-3.6份、硫酸镁0.9-1.3份、蒸馏水450-600份;C、将步骤B得到的北冬虫夏草子实体放入破壁机中,加入10-12倍质量的蒸馏水,粉碎5-15min,得到北冬虫夏草混合液;D、将步骤C得到的北冬虫夏草混合液,超声波处理40-50min,在70-80℃下回流提取3-4.5h,提取液过滤后浓缩,得到多糖浓缩液;E、在步骤D得到的多糖浓缩液中加入2.8-3.本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种基于固体发酵的北冬虫夏草多糖提取纯化工艺,其特征在于:包括如下步骤:A、将北冬虫夏草菌种接种到北冬虫夏草种子培养基上,放进摇床培养箱,培养2.5‑4d,所述北冬虫夏草种子培养基的组成包括以下重量份的原料:蔗糖20‑30份、酵母膏1.5‑3份、磷酸二氢钾0.8‑1.1份硫酸镁0.5‑0.7份、蒸馏水1000份;B、将步骤A得到的种子液,接种到经灭菌处理的北冬虫夏草固体培养基上,接种量为8‑11%,放进恒温恒湿培养箱中,在28.5℃温度条件下,发酵5‑8天,得到北冬虫夏草子实体;所述北冬虫夏草固体培养基包括以下重量份的原料:小麦粉1000份,土豆粉190‑215份、葡糖糖25‑35份、磷酸二氢钾2.1‑3.5份、蛋白陈2.5‑3.6份、硫酸镁0.9‑1.3份、蒸馏水450‑600份;C、将步骤B得到的北冬虫夏草子实体放入破壁机中,加入10‑12倍质量的蒸馏水,粉碎5‑15min,得到北冬虫夏草混合液;D、将步骤C得到的北冬虫夏草混合液,超声波处理40‑50min,在70‑80℃下回流提取3‑4.5h,提取液过滤后浓缩,得到多糖浓缩液;E、在步骤D得到的多糖浓缩液中加入2.8‑3.4倍体积的无水乙醇,搅拌后冷却至4℃,静置18‑36小时,进行离心处理,并将沉淀烘干得到北冬虫夏草多糖提取物;F、步骤E得到的北冬虫夏草多糖提取物加蒸馏水溶解,调节pH值至8‑9,滴加双氧水溶液至无色,50‑60℃保温2‑3h,得到北冬虫夏草多糖提取物无色溶液;G、将步骤F得到的北冬虫夏草多糖提取物无色溶液与木瓜蛋白酶和淀粉酶混合溶液混合,两者的体积比为1:(0.45‑0.6),60‑65℃酶解1‑2h;在酶解液中加入20%体积的Sevage试剂,振荡培养0.5‑1h,然后多次离心直至无蛋白沉淀析出为止,取上清液,烘干,得到北冬虫夏草粗多糖;H、将步骤G得到的北冬虫夏草粗多糖用蒸馏水溶解后上DEAE琼脂糖凝胶FF离子交换层析柱,用氯化钠溶液进行梯度洗脱,得到北冬虫夏草多糖。...

【技术特征摘要】
1.一种基于固体发酵的北冬虫夏草多糖提取纯化工艺,其特征在于:包括如下步骤:A、将北冬虫夏草菌种接种到北冬虫夏草种子培养基上,放进摇床培养箱,培养2.5-4d,所述北冬虫夏草种子培养基的组成包括以下重量份的原料:蔗糖20-30份、酵母膏1.5-3份、磷酸二氢钾0.8-1.1份硫酸镁0.5-0.7份、蒸馏水1000份;B、将步骤A得到的种子液,接种到经灭菌处理的北冬虫夏草固体培养基上,接种量为8-11%,放进恒温恒湿培养箱中,在28.5℃温度条件下,发酵5-8天,得到北冬虫夏草子实体;所述北冬虫夏草固体培养基包括以下重量份的原料:小麦粉1000份,土豆粉190-215份、葡糖糖25-35份、磷酸二氢钾2.1-3.5份、蛋白陈2.5-3.6份、硫酸镁0.9-1.3份、蒸馏水450-600份;C、将步骤B得到的北冬虫夏草子实体放入破壁机中,加入10-12倍质量的蒸馏水,粉碎5-15min,得到北冬虫夏草混合液;D、将步骤C得到的北冬虫夏草混合液,超声波处理40-50min,在70-80℃下回流提取3-4.5h,提取液过滤后浓缩,得到多糖浓缩液;E、在步骤D得到的多糖浓缩液中加入2.8-3.4倍体积的无水乙醇,搅拌后冷却至4℃,静置18-36小时,进行离心处理,并将沉淀烘干得到北冬虫夏草多糖提取物;F、步骤E得到的北冬虫夏草多糖提取物加蒸馏水溶解,调节pH值至8-9,滴加双氧水溶液至无色,50-60℃保温2-3h,得到北冬虫夏草多糖提取物无色溶液;G、将步骤F得到的北冬虫夏草多糖提取物无色溶液与木瓜蛋白酶和淀粉酶混合溶液混合,两者的体积比为1:(0.45-0.6),60-65℃酶解1-2h;在酶解液中加入20%...

【专利技术属性】
技术研发人员:褚铭南
申请(专利权)人:桐乡市博奥生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:浙江,33

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