抗Eno1抗体及其用途制造技术

技术编号:20930029 阅读:20 留言:0更新日期:2019-04-20 12:46
本发明专利技术公开了抗Eno1抗体及其用途,涉及抗体技术领域。一种特异性结合真菌Eno1蛋白抗体或其片段,所述抗体或其片段对真菌Eno1蛋白具有特异性结合亲和力;所述抗体包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL);其中,所述重链可变区(VH)包含以下的CDR组合:VH‑CDR1、VH‑CDR2和VH‑CDR3;所述轻链可变区(VL)包含以下的CDR组合:VL‑CDR1、VL‑CDR2和VL‑CDR3。本发明专利技术提供的抗体具有与致病真菌Eno1蛋白结合并抑制真菌侵袭宿主细胞的能力,可以单独或者与现有抗真菌化学药物联合用于治疗侵袭性真菌感染。

Anti-Eno1 antibody and its application

The invention discloses anti-Eno1 antibody and its use, and relates to the technical field of antibody. A specific binding fungal Eno1 protein antibody or its fragment has a specific binding affinity to fungal Eno1 protein; the antibody contains heavy chain variable region (VH) and light chain variable region (VL); the heavy chain variable region (VH) contains the following CDR combinations: VH CDR1, VH CDR2 and VH CDR3; and the light chain variable region (VL) contains the following CDR combinations: CDR1, VL, CDR2 and VL, CDR3. The antibody provided by the invention has the ability to bind to Eno1 protein of pathogenic fungi and inhibit fungi from invading host cells, and can be used to treat invasive fungal infections alone or in combination with existing antifungal chemicals.

【技术实现步骤摘要】
抗Eno1抗体及其用途
本专利技术涉及抗体
,具体涉及一种抗Eno1抗体。
技术介绍
真菌烯醇化酶1(enolase,Eno1)又称2-磷酸-D-甘油盐水解酶,由440个氨基酸组成,烯醇化酶的基本功能是参与糖酵解反应,能催化2-磷酸甘油酸(2-PGE)与磷酸烯醇式丙酮相互转化。近年来研究发现,侵袭性真菌烯醇化酶除了分布于细胞质外,还分布于侵袭性真菌细胞壁表面。Eno1分子可以通过与纤溶酶原结合激活纤溶系统感染宿主。血纤维溶酶原是血纤维溶解酶的前体,存在于多数脊椎动物体内,是纤溶系统的关键成分。血纤维溶酶原在血纤维溶酶原激活蛋白(plasminogenactivator)的作用下会切去N端部分序列,转化为具有丝氨酸蛋白酶活性的血纤维溶酶(plasmin),它能转化胶原酶原为胶原酶,然后与之一起降解纤维蛋白和其他细胞外基质比如层粘连蛋白和纤连蛋白。侵袭性真菌表面的烯醇化酶结合血纤维溶酶原后,会加速其活化为血纤维溶酶并引发一系列下游反应,这样侵袭性真菌便可以利用寄主纤溶系统降解其组织屏障,以进行组织侵染或迁移扩散。抑制真菌细胞表面Eno1分子活性能够有效的抑制真菌对宿主的侵袭。有文献报道,免疫白念珠菌Eno1蛋白的兔血清能够抑制白念珠菌对人肠道上皮细胞的粘附,提示Eno1蛋白在白念珠菌粘附宿主上皮细胞中发挥了重要的作用。小鼠免疫白念珠菌Eno1蛋白再次感染白念珠菌时,小鼠肾脏、脑组织、肺、脾载菌量显著减少。这一现象可能与Th1介导的适应性免疫应答有关。综上所述,真菌Eno1蛋白在致病真菌细胞内高度保守,生物学功能重要(与真菌毒力、应激反应等密切相关);真菌细胞内定位与哺乳动物细胞不同(哺乳动物细胞Eno1位于细胞浆内;真菌细胞Eno1位于细胞壁表面),基于真菌细胞壁表面Eno1蛋白设计抗体药物不会对人体细胞Eno1蛋白造成影响,也不会被小分子化合物药物取代(小分子化合物可透过细胞膜影响人体细胞Eno1蛋白功能);真菌Eno1蛋白结构可以在感染患者体内诱导保护性抗体产生。所以,Eno1蛋白是抗真菌感染抗体药物理想的作用靶点。近年来,随着医学治疗技术的发展,比如造血干细胞移植、实体器官移植、高强度免疫抑制剂、广谱抗生素、各种置管技术的广泛使用以及重症监护病人、老龄病人、艾滋病患者的增多使得侵袭性真菌感染发病率逐年增高。侵袭性真菌感染在中国、美国及欧洲院内感染位居第4-6位。由于侵袭性真菌具有高度适应性,在体内转变成菌丝、形成生物被膜后也会高度耐药,加上新型抗真菌药物的研发及相关早期的诊断方法进展缓慢,使得侵袭性真菌感染病死率高达40%,对人类健康造成严重威胁。念珠菌血症的病死率高达40%,侵袭性曲霉菌感染未能及时诊疗的病死率高达90%以上,已经成为严重威胁人类健康的感染性疾病。目前临床上可供选择的抗真菌药物非常有限,应用较多的仍然是唑类抗真菌药物如氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑等,随着在临床上的长期应用,真菌耐药现象日趋严重;有些真菌如克柔念珠菌、烟曲霉菌等先天耐药;真菌有高适应性特点,在体内形成生物被膜、转变成菌丝后也会高度耐药,甚至出现了“超级耐药”真菌的流行,耐药性也成为侵袭性真菌感染治疗失败的主要原因之一。所以研究高效的新型抗真菌药物是临床上亟待解决的问题。目前尚未有产业化针对靶向真菌Eno1蛋白开发的单克隆抗体。
技术实现思路
本专利技术的目的在于:克服现有技术的不足,提供一种特异性结合真菌Eno1蛋白的抗体或其功能片段,并基于该抗体或其功能片段提供其用途。为实现上述目标,本专利技术提供了如下技术方案:一种特异性结合真菌Eno1蛋白抗体或其片段,所述抗体或其片段对真菌Eno1蛋白具有特异性结合亲和力;所述抗体包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL);其中,所述重链可变区(VH)包含以下的CDR组合:VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3;所述轻链可变区(VL)包含以下的CDR组合:VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3;所述重链可变区为:VH-CDR1氨基酸:GFNIKDYY,VH-CDR2氨基酸:IDPENGNN,VH-CDR3氨基酸:ARYEGNYVSY,所述轻链可变区为:VL-CDR1氨基酸:QSIVHSNGYTY,VL-CDR2氨基酸:KVS,VL-CDR3氨基酸:FQSSHVPYT。进一步,所述重链可变区(VH)包含选自以下的序列:与SEQIDNO:1所示的氨基酸序列具有至少75%同一性的氨基酸序列;优选地,所述至少75%同一性为例如至少80%、优选至少85%、更优选至少90%、进一步优选至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或甚至99%同一性等≥75%的任何百分比的同一性。和/或,所述轻链可变区(VL)包含选自以下的序列:与SEQIDNO:2所示的氨基酸序列具有至少75%同一性的氨基酸序列。优选地,所述至少75%同一性为例如至少80%、优选至少85%、更优选至少90%、进一步优选至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或甚至99%同一性等≥75%的任何百分比的同一性。进一步,所述抗体或其片段包含选自以下的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的组合:如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列或与SEQIDNO:1所示的氨基酸序列具有至少75%同一性的氨基酸序列的重链可变区;和与SEQIDNO:2所示的氨基酸序列具有至少75%同一性的氨基酸序列的轻链可变区。进一步,所述抗体为单克隆抗体、单链抗体、单域抗体、完全或部分人源化抗体或者嵌合抗体中的任意一种;优选地,所述抗体为IgA、IgD、IgE、IgG或IgM,更优选为IgG1。所述片段选自所述抗体的scFv、Fab、F(ab′)2或Fv片段。另一方面,本专利技术还提供了一种核酸分子,其编码如前述抗体或其片段中的重链CDR、轻链CDR、重链可变区、轻链可变区、重链或轻链。另一方面,本专利技术还提供了一种缀合物,所述缀合物包含前述的抗体或其片段。另一方面,本专利技术还提供了一种载体,其包含前述的核酸分子。所述载体可以为真核表达载体、原核表达载体、人工染色体或噬菌体载体等。另一方面,本专利技术还提供了一种药物组合物,其包含前述的抗体或其片段,或者核酸分子,或者缀合物,或者载体;以及任选的药学上可接受的辅料。另一方面,本专利技术还提供了前述的抗体或其片段,或者前述的核酸分子,或者前述的缀合物,或者前述的载体,或者前述的药物组合物在制备用于预防或治疗真菌感染的药物中的用途。另一方面,本专利技术还提供了一种诊断真菌感染的方法,所述方法包括使前述的抗体或其片段,或者前述的核酸分子,或者前述的缀合物,或者前述的载体,或者前述的药物组合物与来自受试者的样品相接触。所述真菌感染为皮肤与软组织感染、深部真菌感染或侵袭性真菌感染。优选地,所述真菌为能够引起哺乳动物如人类感染的病原真菌,优选为念珠菌属、隐球菌属和霉菌属真菌,如白念珠菌。优选地,还可以结合其它抗真菌药物比如唑类抗真菌药物(例如氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、艾沙康唑等)、棘白菌素类抗真菌药物(例如卡泊芬净、阿尼芬净、米卡芬净等)、多烯类抗真菌药(例如两性霉素等)、丙烯胺类抗真菌药物(例如特比萘芬等)或嘧啶类抗真菌药物(例如5-氟胞嘧啶等)制作组合药物。本发本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种特异性结合真菌Eno1蛋白抗体或其片段,所述抗体或其片段对真菌Eno1蛋白具有特异性结合亲和力;所述抗体包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL);其中,所述重链可变区(VH)包含以下的CDR组合:VH‑CDR1、VH‑CDR2和VH‑CDR3;所述轻链可变区(VL)包含以下的CDR组合:VL‑CDR1、VL‑CDR2和VL‑CDR3;所述重链可变区为:EVQLQQSGAELVRPGALVKLSCKASGFNIKDYYMNWVKQRPEQGLEWIGWIDPENGNNIYDPKFQGKASITADKSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCARYEGNYVSYWAQGTLVTVSA(SEQ ID NO:1),VH‑CDR1氨基酸:GFNIKDYY,VH‑CDR2氨基酸:IDPENGNN,VH‑CDR3氨基酸:ARYEGNYVSY,所述轻链可变区为:DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGYTYLEWYLQKPGQSPKLLMYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQSSHVPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:2),VL‑CDR1氨基酸:QSIVHSNGYTY,VL‑CDR2氨基酸:KVS,VL‑CDR3氨基酸:FQSSHVPYT。...

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合真菌Eno1蛋白抗体或其片段,所述抗体或其片段对真菌Eno1蛋白具有特异性结合亲和力;所述抗体包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL);其中,所述重链可变区(VH)包含以下的CDR组合:VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3;所述轻链可变区(VL)包含以下的CDR组合:VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3;所述重链可变区为:EVQLQQSGAELVRPGALVKLSCKASGFNIKDYYMNWVKQRPEQGLEWIGWIDPENGNNIYDPKFQGKASITADKSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCARYEGNYVSYWAQGTLVTVSA(SEQIDNO:1),VH-CDR1氨基酸:GFNIKDYY,VH-CDR2氨基酸:IDPENGNN,VH-CDR3氨基酸:ARYEGNYVSY,所述轻链可变区为:DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGYTYLEWYLQKPGQSPKLLMYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQSSHVPYTFGGGTKLEIK(SEQIDNO:2),VL-CDR1氨基酸:QSIVHSNGYTY,VL-CDR2氨基酸:KVS,VL-CDR3氨基酸:FQSSHVPYT。2.根据权利要求1所述的抗体或其片段,其特征在于:所述重链可变区(VH)包含选自以下的序列:与SEQIDNO:1所示的氨基酸序列具有至少75%同一性的氨基酸序列;和/或,所述轻链可变区(VL)包含选自以下的序列:与SEQIDNO:2所示的氨基酸序列具有至少75%同一性的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的抗体或其片段,其...

【专利技术属性】
技术研发人员:陈思敏邹最郭诗雨田复波邹泽强安毛毛
申请(专利权)人:上海嘉霈医药科技有限公司
类型:发明
国别省市:上海,31

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