一种应用核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱高效分离喜树碱与10-羟基喜树碱的方法技术

本发明专利技术公开一种应用核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱高效分离喜树碱与10‑羟基喜树碱的方法，以甲基丙烯酸或甲基丙烯酸甲酯为单体，马来海松酸丙烯酸乙二醇酯或丙烯海松酸丙烯酸乙二醇酯为交联剂，与自由基引发剂充分混合后涂覆到硅胶表面，然后使其进行自由基聚合反应得到核壳型SiO2@松香基高分子微球，微球粒径分布为2‑50μm，孔径分布0.5‑15nm，比表面积150‑350m

A Method for High Performance Separation of Camptothecin and 10-Hydroxycamptothecin by Core-Shell SiO 2@Rosin-based Polymer Chromatographic Column

The invention discloses a method for separating camptothecin and 10-hydroxycamptothecin by core-shell SiO_2@rosin-based high molecular chromatography column, using methacrylic acid or methyl methacrylate as monomer, ethylene glycol maleopimaric acid acrylate or ethylene glycol acrylate acrylate acrylate as crosslinking agent, fully mixed with free radical initiator, coated on the surface of silica gel, and then made it self-acting. Core-shell SiO 2@rosin-based polymer microspheres were synthesized by radical polymerization. The size distribution of the microspheres was 2_50 um, the pore size distribution was 0.5_15 nm, and the specific surface area was 150_350 M.

【技术实现步骤摘要】
一种应用核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱高效分离喜树碱与10-羟基喜树碱的方法
本专利技术属于高效液相色谱法领域，具体涉及一种应用核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱高效分离喜树碱与10-羟基喜树碱的方法。
技术介绍
喜树碱，化学结构式为：喜树碱是喜树中所含的吲哚类生物碱，具有显著的抗癌活性，是植物资源的第三大天然抗癌药物，喜树碱对肠胃道和头颈部癌等有较好的疗效，通过抑制拓扑异构酶I发挥细胞毒性；结构与10-羟基喜树碱类似，但药理作用不同。10-羟基喜树碱，化学结构式为：10-羟基喜树碱是喜树中含量较少的吲哚类生物碱，也可以通过喜树碱合成。它不仅比喜树分离得到的碱类物质具有更高药理活性，而且产生更少的毒性，结构与喜树碱类似，但药理作用高于喜树碱，因此有必要把喜树果中的喜树碱和10-羟基喜树碱分离开来。液相色谱分析是指流动相为液体的色谱技术。通过改进填料的粒度及柱压，在经典的液相柱色谱的基础上引入了气相色谱的塔板理论，在技术上采用了高压输液泵，高效固定相和高灵敏度的检测器，实现了分析速度快、分离效率高和操作自动化，这种色谱技术被称为高效液相色谱法(Highperformanceliquidchromatography，简称HPLC)。HPLC具有分离效能高、选择性高、灵敏度高、分析速度快和应用范围广的优势。目前，关于喜树碱和10-羟基喜树碱分离的方法报道，我们查到如下一些文献：1.刘文哲，秦海燕，索志荣.喜树果中喜树碱和10-羟基喜树碱的HPLC分析.药物分析杂志.2005，25(2)：168-170；其中提到喜树碱和10-羟基喜树碱的液相色谱条件，用HypersilODS色谱柱(250mm×4.0mm)，以甲醇和水为流动相进行梯度洗脱，流速1.0mL/min，检测波长254nm，柱温25℃。2.史伟国，祖元刚，杨磊.聚酰胺分离纯化喜树果中10-羟基喜树碱和喜果苷的研究.中国中药杂志.2008，33(21):2486-2489；其中提到10-羟基喜树碱和喜果苷的检测方法，采用C18色谱柱(250mm×4.6mm)，以乙腈和水为流动相，流速1.0mL/min，检测波长254nm，柱温35℃。3.申请号：200510024487.8，专利技术名称：一种10-羟基喜树碱的生产方法，其中提到喜树碱和10-羟基喜树碱的分离，采用高压液相制备柱(填料为小颗粒球形硅胶，粒径为10-16μm)在10-30℃的条件下进样上柱，流速为250-350mL/min，设定紫外检测波长254nm。上述方法存在着对喜树碱和10-羟基喜树碱的分离效果不够理想的问题。4.申请号：201611001162.2，专利技术名称：一种应用松香基高分子分离喜树碱与10-羟基喜树碱的方法，以α-甲基丙烯酸(或甲基丙烯酸甲酯)为单体，马来松香丙烯酸乙二醇酯为交联剂，采用微悬浮自由基聚合方法制备松香基高分子微球，将松香基高分子微球用装柱机湿法装柱制备色谱柱；通过对喜树碱和10-羟基喜树碱进行HPLC分离，检测波长：230-290nm，温度30±10℃，流速0.3-1.0mL/min，喜树碱和10-羟基喜树碱的分离度为1.80-2.15。然而，其固定相填料(松香基高分子微球)的制备工艺较繁琐且其制备的松香基高分子色谱柱的理论塔板数较低，对10-羟基喜树碱与喜树碱的分离度较低，因此有必要探索一种更为高效的分离喜树碱和10-羟基喜树碱的方法。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提供一种应用核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱高效分离喜树碱与10-羟基喜树碱的方法，该方法对喜树碱和10-羟基喜树碱具有较高的分离度和选择性，且该方法灵敏度高，操作简单，快速高效，环境友好。本专利技术的技术方案如下：一种应用核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱高效分离喜树碱与10-羟基喜树碱的方法，将核壳型SiO2@松香基高分子微球作为固定相填料，采用湿法装柱制备得到核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱；将核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱接入液相色谱仪，设置液相色谱仪的流动相流速为0.3-1.0mL/min，检测波长254nm，柱温箱30±10℃；启动进样阀使流动相将喜树碱和10-羟基喜树碱的混合溶液带入核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱中，实现喜树碱和10-羟基喜树碱的分离。核壳型SiO2@松香基高分子微球分离两种物质的机理：本专利技术使用的色谱柱的固定相填料核壳型SiO2@松香基高分子微球既保持了二氧化硅微球粒径均一，球形度良好的特点，同时又兼顾了松香基高分子微球孔结构规整，表面官能团丰富的优势，所以以该微球作为固定相制备得到的核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱具有高于松香基高分子色谱柱的理论塔板数，对10-羟基喜树碱与喜树碱的分离度也明显提高。作为技术方案的优选，所述的核壳型SiO2@松香基高分子微球粒径分布为2-50μm，孔径分布0.5-15nm，比表面积150-350m2/g。作为技术方案的优选，所述的湿法装柱为用恒压泵将核壳型SiO2@松香基高分子微球填充于空色谱柱中，在3000-6000psi的压力下装柱30-120min，待柱压平衡后，将色谱柱卸下并装上柱头，即得到核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱。作为技术方案的优选，所述的核壳型SiO2@松香基高分子微球的制备方法为：以甲基丙烯酸或甲基丙烯酸甲酯为单体，马来海松酸丙烯酸乙二醇酯或丙烯海松酸丙烯酸乙二醇酯为交联剂，与自由基引发剂按一定比例充分混合后，均匀涂覆到硅胶表面，然后置于水相中进行自由基聚合反应6-10h，接着用无水乙醇对产物进行索氏提取，再真空干燥，即可制得核壳型SiO2@松香基高分子微球。作为技术方案的优选，所述单体、交联剂与自由基引发剂的质量比为1-50:1-100:0.1-5。作为技术方案的优选，所述交联剂及单体与硅胶的质量比1:1-100。作为技术方案的优选，所述水相为质量分数为1-15％的十二烷基硫酸钠水溶液。作为技术方案的优选，所述的自由基引发剂为有机过氧化物类引发剂或偶氮类引发剂；作为技术方案的进一步优选，所述的自由基引发剂为过氧化二苯甲酰、偶氮二异丁腈或偶氮二异庚腈。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：1.本专利技术使用的色谱柱的固定相填料核壳型SiO2@松香基高分子微球形状规则，粒径分布均匀，孔结构丰富且规整，机械强度大，溶剂耐受度高，在较高的流速和压力下，没有出现压塌的现象，并且稳定性好，可重复使用，长时间使用后，色谱柱里的填料仍没有破坏、溶解。2.本专利技术使用的色谱柱的固定相填料核壳型SiO2@松香基高分子微球改善了单一松香基聚合物微球对水敏感的特点，当流动相为不同比例的水溶液时，以核壳型SiO2@松香基高分子微球作为固定相填充的色谱柱，仍能保持良好的分离性能。此外，由于核壳型SiO2@松香基高分子微球相对于硅胶微球，其表面键合了具有特殊官能团的松香基聚合物，因此本专利技术的以核壳型SiO2@松香基高分子微球作为固定相填充的色谱柱的选择性又高于单一的二氧化硅微球填充的色谱柱。3.本专利技术使用的色谱柱的固定相填料核壳型SiO2@松香基高分子微球既保持了二氧化硅微球粒径均一，球形度良好的特点，同时又兼顾了松香基高分子微球孔结构规整，表面官能团丰富的优势，所以以该微球作为固定相制备得到的核壳型SiO2@松香本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种应用核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱高效分离喜树碱与10‑羟基喜树碱的方法，其特征在于：将核壳型SiO2@松香基高分子微球作为固定相填料，采用湿法装柱制备得到核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱；将核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱接入液相色谱仪，设置液相色谱仪的流动相流速为0.3‑1.0mL/min，检测波长254nm，柱温箱30±10℃；启动进样阀使流动相将喜树碱和10‑羟基喜树碱的混合溶液带入核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱中，实现喜树碱和10‑羟基喜树碱的分离。

【技术特征摘要】
1.一种应用核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱高效分离喜树碱与10-羟基喜树碱的方法，其特征在于：将核壳型SiO2@松香基高分子微球作为固定相填料，采用湿法装柱制备得到核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱；将核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱接入液相色谱仪，设置液相色谱仪的流动相流速为0.3-1.0mL/min，检测波长254nm，柱温箱30±10℃；启动进样阀使流动相将喜树碱和10-羟基喜树碱的混合溶液带入核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱中，实现喜树碱和10-羟基喜树碱的分离。2.根据权利要求1所述的应用核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱高效分离喜树碱与10-羟基喜树碱的方法，其特征在于：所述的核壳型SiO2@松香基高分子微球粒径分布为2-50μm，孔径分布0.5-15nm，比表面积150-350m2/g。3.根据权利要求1或2所述的应用核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱高效分离喜树碱与10-羟基喜树碱的方法，其特征在于：所述的湿法装柱为用恒压泵将核壳型SiO2@松香基高分子微球填充于空色谱柱中，在3000-6000psi的压力下装柱30-120min，待柱压平衡后，将色谱柱卸下并装上柱头，即得到核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱。4.根据权利要求1或2所述的应用核壳型SiO2@松香基高分子色谱柱高效分离喜树碱与10-羟基喜树碱的方法，其特征在于：所述的核壳型SiO2...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷福厚，孙耀，李鹏飞，王婷，姚兴东，覃丽婷，程格格，鄂羽羽，杨建林，
申请(专利权)人：广西民族大学，广西运领生物质转化研究有限公司，
类型：发明
国别省市：广西,45