用于从全血中自动采集白细胞的方法技术

本发明专利技术涉及用于在自动血液细胞分离系统中从全血中分离淋巴细胞和/或干细胞的方法，其中，所采集的淋巴细胞和/或干细胞的质量得到提高，并且细胞采集程序通过利用检测器装置中所包括的用以在所要求保护的方法中和在细胞分离器中对浊度和颜色进行测量的光学传感器而进一步自动化，该细胞分离器可以被用于执行所要求保护的方法。本发明专利技术的方法对于从全血中采集淋巴细胞和/或干细胞部分是特别有用的，其中，减少了血小板、红细胞和粒细胞对所采集的细胞部分的污染。

A Method for Automated Collection of Leukocyte from Whole Blood

The present invention relates to a method for separating lymphocytes and/or stem cells from whole blood in an automatic blood cell separation system, in which the quality of the collected lymphocytes and/or stem cells is improved, and the cell acquisition program measures turbidity and color by using the methods included in the detector device for the required protection and in the cell separator. Optical sensors are further automated, and the cell separator can be used to perform the required protection methods. The method of the present invention is particularly useful for collecting lymphocyte and/or stem cell parts from whole blood, in which platelets, red blood cells and granulocytes are reduced to contaminate the collected cell parts.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于从全血中自动采集白细胞的方法
本专利技术涉及用于在自动血液分离系统中从全血中分离干细胞和/或淋巴细胞的方法，其中，所采集的产品的质量得到提高并且细胞采集程序通过利用检测器而进一步自动化，该检测器包括用以在所要求保护的方法中和在细胞分离系统中对流体流的颜色和浊度进行测量的光学传感器，该细胞分离系统可以被用于执行所要求保护的方法。
技术介绍
本专利技术涉及血液分离术的领域。分离术是下述任何程序：在所述任何程序中，血液被从供血者/患者体内抽出并且对一部分(比如，血浆、白细胞、血小板或红细胞)进行分离和保留，并且剩余部分被重新输注到该供血者/患者体内。各类型的分离术包括红细胞分离术、白细胞分离术、淋巴细胞分离术、干细胞分离术、血浆分离术、以及血小板分离术(血小板单采术)。分离术还被用在治疗中，其中，全血被分离成全血的主要成分血浆和红细胞，并且异常的致病成分通过在治疗性血浆置换程序中与血浆一起被移除；或者异常的红细胞在红细胞置换程序中被去除且被健康的细胞置换。此外，除了血浆置换程序和红细胞置换程序之外，还存在治疗性的程序以去除白血球(白细胞分离术)或者去除血小板(血小板分离术)。淋巴细胞分离术和干细胞采集法是用以从供血者/患者体内所抽出的血液中采集包含有淋巴细胞和/或干细胞(其利用特殊药物从骨髓中冲出到外全血中)的单核细胞成分的分离程序，其中，血液的剩余部分被重新输注到该供血者/患者体内。血液分离术通常利用血液细胞分离机来执行。这种血液细胞分离机通常包括下述离心机单元：该离心机单元被用于按照密度和大小将血液成分分离。离心方法可以被分为两个基本类别：连续流离心法(CFC)以及间歇流离心法。在CFC方法中的“连续”指的是血液被采集、旋转并同时回流。该方法和系统的主要优点在于，程序的体外体积低。这在少数人群、小孩或心脏和循环系统有问题的患者必须经受分离术程序时是特别有利的。间歇流离心法以包括下述步骤的循环工作：以一定剂量抽取血液、使血液旋转、对血液进行处理、采集一种或更多种成分、以及使血液的剩余成分回流到供血者/患者体内。为了防止血液凝固，当血液从人体被泵送到分离机器中时抗凝剂被自动地与血液混合。血液离心法的最终产品是：处于分离室外部的沉降红细胞：处于中间的包含MNC(MNC是单核的细胞，即淋巴细胞和单核细胞)、干细胞和血小板的血沉棕黄层；以及处于分离室内部的血浆。近年来，已经研发了自动分离系统。在装置中已经实施了自动夹和传感器。此外，已经研发了特别适于对血液成分进行自动分离的具有离心室的细胞分离机。EP0985453公开了用于细胞分离机的相应的离心室，该细胞分离机特别地用于将全血分离成全血的各成分。EP1025872涉及用于对将血液分离成血液各成分的细胞分离机的管套件并且涉及利用所述管套件的细胞分离机。EP1025872还涉及用于进行血液分离的方法。一种已知的且商用的细胞分离机是COM.细胞分离机(Fresenius)。该COM.装置利用连续流离心法以便分离血液成分。血液成分在离心机外进行采集。此外，COM.使用无密封的一次性套件。仅需要较低的体外体积来操作COM.装置。捐赠以及治疗可以利用COM.装置来运行。对于治疗应用而言，例如对于连续的光化学疗法或供者淋巴细胞输注(DLI)而言，期望的是，从全血中采集高纯度的淋巴细胞。干细胞产品的纯度相对于冻融程序是重要的。淋巴细胞与单核细胞一起都属于单核的细胞(MNC)。在本专利技术的优选实施方式中，特别期望的是，从全血中分离包含血沉棕黄层部分中的淋巴细胞和/或干细胞的MNC。通常能够利用COM.分离系统通过离心法从全血中分离血沉棕黄层，该血沉棕黄层包含具有靶细胞(淋巴细胞和/或干细胞)的MNC。为了自动采集MNC，COM.系统包括下述检测器装置：该检测器装置包括光学传感器，该光学传感器检测到细胞通过该传感器并且触发处理器装置以开始对血沉棕黄层中所包含的靶细胞(淋巴细胞和/或干细胞)进行采集。然而，现存的常规系统具有下述缺点：血沉棕黄层的量可能非常少并且所采集的靶细胞部分可能受到太多红细胞的污染。这是因为：对靶细胞的采集是根据预定量以常规的方式执行的，但是在靶细胞的采集期间当红细胞的内容物在血沉棕黄层流中增加时，靶细胞的采集不是自动停止的。
技术实现思路
因此，本专利技术的目的是改进从全血中自动采集靶细胞(淋巴细胞和干细胞)的程序，并且因此克服现有技术的缺点，其中，所述靶细胞被包含在血沉棕黄层中。该问题通过包括根据权利要求1的步骤的方法而解决。具体地，根据本专利技术的用于从全血中分离淋巴细胞和/或干细胞的方法在自动血液细胞分离装置中执行。根据本专利技术的自动血液细胞分离装置适当地是连续流分离器，该连续流分离器在被称为自动MNC的新的完全自动的采集系统的情况下以间歇采集循环工作，所述新的完全自动的采集系统具有用以采集干细胞和/或淋巴细胞的子程序。患者/供血者的特征(体重、身高和性别)以及细胞预计数(白细胞浓度、CD34+细胞浓度以及红细胞比容百分比)被登记到细胞分离器的菜单中。基于这些值，该装置计算最优采集参数(循环量、血沉棕黄层量、处理的血液量)。可以通过修改循环次数来对所需产量进行调整。每个循环包括以下三个自动阶段：1.在分离阶段期间，全血在分离室中被分离成红细胞层、被称为血沉棕黄层的MNC(单核的细胞)层、以及富含血小板的血浆(PRP)。在红细胞和PRP直接回流到患者/供血者体内的同时，MNC层在分离室内沉积在被光学摄像系统控制的预定位置中。成熟的粒细胞处于红细胞层内。2.在达到了循环量之后，溢出阶段开始：MNC层经由从分离室排出的血浆而被泵送到对采集夹进行控制的光学传感器。3.当该传感器检测到细胞时，该传感器使溢出阶段自动地停止并且立即开始血沉棕黄层阶段：传感器关闭通向患者的路径并且打开通向采集容器的路径。根据本专利技术的自动血液细胞分离装置总体上包括具有图形用户界面(GIU)的前面板、泵、自动夹和检测器装置、用于附接生理盐水袋和抗凝剂袋的静脉输液架、灌注袋、以及用于靶细胞和血浆的采集容器，该检测器装置包括用于对流体流进行监测的光学传感器。自动血液细胞分离装置还包括离心室，该离心室包括具有用以安置室保持器的机构的转子，该室保持器用于对用于从全血中自动分离血液成分的分离室进行保持。分离室和容器通过管线系统彼此连接。泵优选地是蠕动泵，并且泵将血液、血液成分和溶液输送在自动血液细胞分离装置的上述部件之间。自动夹被自动血液细胞分离装置的处理器装置控制，并且自动夹有助于将管线系统中的流体流导引至安装在自动血液细胞分离装置上的管线系统的预期部分。在血液被供应至安装在自动血液分离系统上的管线套件之后，红细胞和血浆部分在离心单元的分离室中进行分离。在该步骤期间，生理盐水溶液被从分离室导流，并且形成了包含红细胞的外层和包含血浆的内层。在分离室中，血沉棕黄层作为另一层积聚在红细胞与血浆部分之间。随后，在所谓的凝结阶段中，在开始进行溢出之前，血沉棕黄层在分离室中恰当地定位。红细胞外层与血浆内层之间的血沉棕黄层在自动血液细胞分离装置的分离室中的位置适当地被监测装置来监测，该监测装置包括位于分离室上的八孔印记、以及光学传感器，该光学传感器适当地是一种摄像系统。在溢出阶段期间，进入到分离室中的血液的特定流速和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于在自动血液细胞分离装置(1)中从全血中分离淋巴细胞和/或干细胞的方法，所述方法包括以下步骤：‑将血液供应至所述管线套件；‑在离心单元(40)中的分离室(30)中分离红细胞(37)部分和血浆(36)部分；‑在所述分离室(30)中将血沉棕黄层(38)积聚在所述红细胞(37)部分与所述血浆(36)部分之间；‑在所述分离室(30)中使所述血沉棕黄层(38)凝结；‑将所述血沉棕黄层(38)溢出到位于所述自动血液细胞分离装置(1)的前面板(100)处的检测器装置(115)；‑将所述淋巴细胞和/或干细胞转移并采集到采集容器(53)中，其特征在于，为了使所述淋巴细胞和/或干细胞转移并采集到所述采集容器(53)中，应用至少两个准则，其中，‑作为第一准则，由所述检测器装置(115)对血浆/血沉棕黄层管(124)中的流体流的浊度和颜色进行监测、优选地对血浆/血沉棕黄层管(124)中的流体流的白色进行监测，并且当所述血浆/血沉棕黄层管(124)中的所述流体流的所述浊度升高且在白色的血沉棕黄层已经通过所述检测器装置(115)中所包括的传感器之后所述血浆/血沉棕黄层管(124)中的所述流体流的所述颜色增加时，开始将所述淋巴细胞和/或干细胞转移到所述采集容器(53)中；以及‑作为第二准则，由所述检测器装置(115)对所述血浆/血沉棕黄层管(124)中的血沉棕黄层流的颜色进行监测、优选地对所述血浆/血沉棕黄层管(124)中的血沉棕黄层流的红色进行监测，并且当达到所述血浆/血沉棕黄层管(124)中的所述血沉棕黄层流的颜色的预定阈值时，终止将所述淋巴细胞和/或干细胞转移到所述采集容器(53)中。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.09.06 EP 16187458.11.一种用于在自动血液细胞分离装置(1)中从全血中分离淋巴细胞和/或干细胞的方法，所述方法包括以下步骤：-将血液供应至所述管线套件；-在离心单元(40)中的分离室(30)中分离红细胞(37)部分和血浆(36)部分；-在所述分离室(30)中将血沉棕黄层(38)积聚在所述红细胞(37)部分与所述血浆(36)部分之间；-在所述分离室(30)中使所述血沉棕黄层(38)凝结；-将所述血沉棕黄层(38)溢出到位于所述自动血液细胞分离装置(1)的前面板(100)处的检测器装置(115)；-将所述淋巴细胞和/或干细胞转移并采集到采集容器(53)中，其特征在于，为了使所述淋巴细胞和/或干细胞转移并采集到所述采集容器(53)中，应用至少两个准则，其中，-作为第一准则，由所述检测器装置(115)对血浆/血沉棕黄层管(124)中的流体流的浊度和颜色进行监测、优选地对血浆/血沉棕黄层管(124)中的流体流的白色进行监测，并且当所述血浆/血沉棕黄层管(124)中的所述流体流的所述浊度升高且在白色的血沉棕黄层已经通过所述检测器装置(115)中所包括的传感器之后所述血浆/血沉棕黄层管(124)中的所述流体流的所述颜色增加时，开始将所述淋巴细胞和/或干细胞转移到所述采集容器(53)中；以及-作为第二准则，由所述检测器装置(115)对所述血浆/血沉棕黄层管(124)中的血沉棕黄层流的颜色进行监测、优选地对所述血浆/血沉棕黄层管(124)中的血沉棕黄层流的红色进行监测，并且当达到所述血浆/血沉棕黄层管(124)中的所述血沉棕黄层流的颜色的预定阈值时，终止将所述淋巴细胞和/或干细胞转移到所述采集容器(53)中。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述检测器装置(115)包括光学传感器。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述检测器装置(115)中所包括的所述光学传感器包括：红色发射LED，所述红色发射LED用于浊度测量；以及绿色发射LED，所述绿色发射LED用于测量所述血浆和/或血沉棕黄层管(124)中由红细胞对所发出的绿光的吸收。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，由光电晶体管对传输通过所述血浆/血沉棕黄层管(124)中的所述流体的光以及发射到后部的光二者进行检测，并且后面的测量部分用作能够对所述发射LED的老化效应和温度漂移进行补偿的基准测量分支。5.根据权利要求1至4中的任一项所述的方法，其特征在于，所述管(124)中的所述流体流的所述浊度增加和所述颜色增加从所述检测器装置(115)向处理器装置(133)触发一个信号，并且所述处理器装置(133)通过将溢出夹(110)的位置切换成处于将所述淋巴细胞和/或干细胞“采集”到采集容器(53)中的方向而对所述淋巴细胞和/或干细胞的转移和采集的开始进行触发。6.根据权利要求1至5中的任一项所述的方法，其特征在于，达到所述血浆/血沉棕黄层管(124)中的所述流体流的所述颜色的预定阈值从所述检测器装置(115)向处理器装置(133)触发一个信号，并且所述处理器装置(133)通过将溢出夹(110)的位置改变成处于对红细胞随后溢出至患者体内的“重新输注”的方向或者将所述红细胞“转移”至采集容器的方向而对所述淋巴细胞和/或干细胞的转移和采集的终止进行触发。7.根据权利要求1至6中的任一项所述的方法，其特征在于，所述血浆/血沉棕黄层管(124)中的所述血沉棕黄层流的红色的所述预定阈值是与红细胞比容值高达25％、优选地高达20％或15％、更优选地高达14％、13％、12％、11％或10％、最优选地高达9％、8％、7％、6％或5％相对应的红色。8.根据权利要求1至7中的任一项所述的方法，其特征在于，在由所述检测器装置(115)中所包括的所述光学传感器检测到所述红色之后并且在允许额外默认体积的血沉棕黄层(38)通过溢出夹(110)之后，所述淋巴细胞和/或干细胞的采集被终止。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，在循环的前半段中，在由所述检测器装置(115)中所...

【专利技术属性】
技术研发人员：海克·米舒拉特，迈克尔·布林克曼，
申请(专利权)人：费森尤斯卡比德国有限公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE