一种高效同时检测禽蛋、禽肉及猪肉中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺多残留的分析方法技术

本发明专利技术涉及兽药残留检测领域，具体涉及一种高效同时检测禽蛋、禽肉及猪肉中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺多残留的分析方法，包括如下步骤：1）禽蛋、禽肉或猪肉样品提取与净化；2）超高效液相色谱‑荧光检测：a.超高效液相色谱条件：以流动相A：含0.005mol/L的NaH2PO4、0.003mol/L十二烷基硫酸钠和0.05%的三乙胺的水溶液和流动相B：乙腈为流动相；b.荧光检测。该方法能高效、准确同时检测禽蛋（鸡蛋、鸭蛋、鹅蛋、鸽蛋和鹌鹑蛋）、禽肉（鸡肉、鸭肉和鹅肉）及猪肉中甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺的残留，且满足中国农业部、美国（FDA）和欧盟（EU）兽药残留检测方法的要求。

An efficient and simultaneous determination of thiamphenicol, florfenicol and florfenicol in poultry eggs, meat and pork*

The invention relates to the field of veterinary drug residue detection, in particular to an efficient and simultaneous determination of thiamphenicol, florfenicol and florfenicol residues in poultry eggs, poultry meat and pork, including the following steps: 1) extraction and purification of poultry eggs, poultry or pork samples; 2) ultra-high performance liquid chromatography fluorescence detection: a. Ultra-high performance liquid chromatography conditions: mobile phase A: containing 0.005 Mol/L NaH2PO4, 0.003mol/L sodium dodecyl sulfate and 0.05% triethylamine in aqueous solution and mobile phase B: acetonitrile as mobile phase; B. Fluorescence detection. The method can simultaneously detect thiamphenicol, florfenicol and its metabolite florfenicol residues in poultry eggs (eggs, duck eggs, goose eggs, pigeon eggs and quail eggs), poultry meat (chicken, duck and goose) and pork, and meet the requirements of the Ministry of Agriculture of China, the United States (FDA) and the European Union (EU) for veterinary drug residues detection.

【技术实现步骤摘要】
一种高效同时检测禽蛋、禽肉及猪肉中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺多残留的分析方法
本专利技术涉及兽药残留检测领域，具体涉及一种高效同时检测禽蛋、禽肉及猪肉中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺多残留的分析方法。
技术介绍
目前，国内外关于甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺残留的检测方法有微生物法、免疫学检测方法、气相色谱法、高效液相色谱法、气相色谱-串联质谱法和液相色谱-串联质谱法等，但超高效液相色谱-荧光检测法(UPLC-FLD)同时检测禽蛋、禽肉及猪肉中甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺残留的方法还尚未见报道。因此，本专利技术首次建立禽蛋、禽肉及猪肉中甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺残留同时检测的UPLC-FLD检测法。
技术实现思路
为了能高效、准确的同时检测甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺在禽蛋(鸡蛋、鸭蛋、鹅蛋、鸽蛋和鹌鹑蛋)、禽肉(鸡肉、鸭肉和鹅肉)及猪肉中的残留，本专利技术提供了一种超高效液相色谱-荧光检测(UPLC-FLD)方法。该方法能高效、准确的同时检测禽蛋、禽肉及猪肉中甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺的残留，且满足中国农业部、欧盟(EU)兽药残留检测的要求。该方法洗脱程序简单，溶剂消耗少，分析效率高，灵敏度和精密度好，适合在大批量样品分析中应用与推广。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案为：一种高效同时检测禽蛋、禽肉及猪肉中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺多残留的分析方法，其特征在于，包括如下步骤：1)禽蛋、禽肉或猪肉样品提取与净化；2)超高效液相色谱-荧光检测：a.超高效液相色谱条件：以ACQUITYBEHC18为色谱柱；以流动相A：含0.005mol/L的NaH2PO4、0.003mol/L十二烷基硫酸钠和0.05％的三乙胺的水溶液和流动相B：乙腈为流动相；流速：0.2mL/min；柱温：30℃；所述的百分比为体积百分比；b.荧光检测：采用荧光检测器，激发波长233±2nm，发射波长284±2nm。步骤a中，流动相A的pH值为5.3±0.1。在步骤a中，分离禽蛋中目标物时流动相A:B＝64:36V/V，分离禽肉及猪肉中目标物时流动相A:B＝65:35V/V；所述的目标物指甲砜霉素、氟苯尼考或氟苯尼考胺。步骤a中，进样体积优选10μL。步骤(1)具体过程为：1)准确称取均质好的禽蛋、禽肉或猪肉空白样品放于研钵中，并加入适量硅藻土研磨，装入萃取池中，用ASE进行萃取；2)在1500psi，80℃萃取条件下，禽蛋样品用乙腈:氨水萃取，乙腈:氨水的体积比为98:2，禽肉和猪肉样品用乙酸乙酯:氨水萃取，乙酸乙酯:氨水的体积比为98:2，静态萃取2次，每次静态萃取时间3min，氮气吹扫60s，收集萃取液待用；3)将上述萃取液转移至离心管，置于50℃离心浓缩仪中浓缩；萃取液浓缩后，加入纯乙腈，漩涡振荡混匀，加入正己烷漩涡混匀，去脂，静置，弃去上层，重复去脂一次，然后再置于离心浓缩仪中浓缩至干，待用；4)将浓缩干后的样品用35％的乙腈复溶，漩涡振荡混匀，离心，过滤，滤液供超高效液相色谱-荧光检测。本专利技术比较了不同体积比例的乙腈:氨水(99:1，98:2，97:3，96:4，95:5，V/V)为禽蛋中提取剂时，乙腈:氨水(98:2，V/V)、乙酸乙酯:氨水(98:2，V/V)和乙腈:乙酸乙酯:氨水(49:49:2，V/V)为禽肉和猪肉中提取剂时的方法回收率，结果表明在禽蛋中以乙腈:氨水的比例为98:2，V/V时，禽肉和猪肉中以乙酸乙酯:氨水(98:2，V/V)作为提取剂时，目标化合物的回收率最高。本试验还对比了不同的ASE提取温度对提取回收率的影响，发现温度为80℃时的提取回收率最高，提取效果最好。因此，最终选择提取温度为80℃，以乙腈:氨水(98:2，V/V)为禽蛋中提取剂，乙酸乙酯:氨水(98:2，V/V)为禽肉和猪肉中的提取剂，该提取方法样品基质影响小、提取效率高、回收率高。相对于现有技术，本专利技术的有益效果为：本专利技术中采用ACQUITYBEHC18(2.1×50mm，1.7μm)色谱柱，以水(含0.005mol/L的NaH2PO4溶液，0.003mol/L十二烷基硫酸钠和0.05％的三乙胺，用85％的H3PO4调pH至5.3±0.1)-乙腈体系为流动相(禽蛋：64:36，V/V；禽肉和猪肉：65:35，V/V)，流速为0.2mL/min，色谱峰峰型尖锐，分析物保留时间适中，无其他杂质峰干扰。本专利技术提供了一种超高效液相色谱-荧光检测(UPLC-FLD)方法。本专利技术在分析效率、溶剂消耗、回收率、精密度、灵敏度及重现性角度，与其他检测方法进行比较，发现本方法分析效率更高、流动相消耗少、回收率、准确度和灵敏度高，重现性好，适合在批量样品分析中应用与推广。该方法能高效、准确同时检测禽蛋(鸡蛋、鸭蛋、鹅蛋、鸽蛋和鹌鹑蛋)、禽肉(鸡肉、鸭肉和鹅肉)及猪肉中甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺的残留，且满足中国农业部、美国(FDA)和欧盟(EU)兽药残留检测方法的要求。附图说明图1标准品、空白鸡蛋和空白鸡蛋样品添加标准品(甲砜霉素：25μg/kg，氟苯尼考和氟苯尼考胺：50μg/kg)色谱图；图2标准品、空白鸭蛋和空白鸭蛋样品添加标准品(甲砜霉素：25μg/kg，氟苯尼考和氟苯尼考胺：50μg/kg)色谱图；图3标准品、空白鹅蛋和空白鹅蛋样品添加标准品(甲砜霉素：25μg/kg，氟苯尼考和氟苯尼考胺：50μg/kg)色谱图；图4标准品、空白鸽蛋和空白鸽蛋样品添加标准品(甲砜霉素：25μg/kg，氟苯尼考和氟苯尼考胺：50μg/kg)色谱图；图5标准品、空白鹌鹑蛋和空白鹌鹑蛋样品添加标准品(甲砜霉素：25μg/kg，氟苯尼考和氟苯尼考胺：50μg/kg)色谱图；图6标准品、空白鸡肉和空白鸡肉样品添加标准品(甲砜霉素：25μg/kg，氟苯尼考和氟苯尼考胺：50μg/kg)色谱图；图7标准品、空白鸭肉和空白鸭肉样品添加标准品(甲砜霉素：25μg/kg，氟苯尼考和氟苯尼考胺：50μg/kg)色谱图图8标准品、空白鹅肉和空白鹅肉样品添加标准品(甲砜霉素：25μg/kg，氟苯尼考和氟苯尼考胺：50μg/kg)色谱图；图9标准品、空白猪肉和空白猪肉样品添加标准品(甲砜霉素：25μg/kg，氟苯尼考和氟苯尼考胺：50μg/kg)色谱图；图10鸡蛋中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的基质添加标准曲线；图11鸭蛋中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的基质添加标准曲线；图12鹅蛋中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的基质添加标准曲线；图13鸽蛋中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的基质添加标准曲线；图14鹌鹑蛋中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的基质添加标准曲线；图15鸡肉中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的基质添加标准曲线；图16鸭肉中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的基质添加标准曲线；图17鹅肉中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的基质添加标准曲线；图18猪肉中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的基质添加标准曲线。具体实施方式在本专利技术中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细地描述本专利技术。这些实施例只是为了举例说明本专利技术，而非以任何方式限制本专利技术的范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效同时检测禽蛋、禽肉及猪肉中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺多残留的分析方法，其特征在于，包括如下步骤：1）禽蛋、禽肉或猪肉样品提取与净化；2）超高效液相色谱‑荧光检测：a. 超高效液相色谱条件：以ACQUITY UPLC

【技术特征摘要】
1.一种高效同时检测禽蛋、禽肉及猪肉中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺多残留的分析方法，其特征在于，包括如下步骤：1）禽蛋、禽肉或猪肉样品提取与净化；2）超高效液相色谱-荧光检测：a.超高效液相色谱条件：以ACQUITYUPLC®BEHC18为色谱柱；以流动相A：含0.005mol/L的NaH2PO4、0.003mol/L十二烷基硫酸钠和0.05%的三乙胺的水溶液和流动相B：乙腈为流动相；流速：0.2mL/min；柱温：30°C；b.荧光检测：采用荧光检测器，激发波长233±2nm，发射波长284±2nm。2.根据权利要求1所述的一种高效同时检测禽蛋、禽肉及猪肉中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺多残留的分析方法，其特征在于，步骤a中，流动相A的pH值为5.3±0.1。3.根据权利要求1所述的一种高效同时检测禽蛋、禽肉及猪肉中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺多残留的分析方法，其特征在于，在步骤a中，分离禽蛋中目标物时流动相A:B=64:36V/V，分离禽肉及猪肉中目标物时流动相A:B=65:35V/V；所述的目标物指甲砜霉素、氟苯尼考或氟苯尼考胺。4.根据权利要求1所述的一种高效同时检测禽蛋、禽肉及猪肉中甲砜霉...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢恺舟，王波，赵霞，谢星，庞茂达，王雅娟，郭亚文，卜晓娜，刘楚君，刁志祥，张培杨，王旭堂，陈长宽，张跟喜，张涛，戴国俊，王冉，卜仕金，王金玉，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32