The invention discloses a method for the determination of microcystins in fish meat by laser desorption, including sample treatment in step A, extraction of microcystins in step C, instrumental analysis in step D, calculation in step E; laser desorption of microcystins in step B is set between step A and step C: the 2G tissue homogenate A1 obtained in step A is placed in a plugged test tube, and 3+0 is added. 5 ml solvent I was mixed and stirred by magnetic force. The laser was started and the mixture in the plugged tube was treated by laser to obtain sample B1. The sample B1 was processed by step C. The invention only needs simple sample pretreatment, can realize the efficient extraction of microcystins in samples, and can promote the theory and technology research of food safety.
【技术实现步骤摘要】
利用激光解吸附测定鱼肉中微囊藻毒素的方法
本专利技术涉及一种激光解吸附组织中微囊藻毒素的方法,特别是一种利用激光解吸附鱼肉肌肉组织中微囊藻毒素,并通过液相色谱串联质谱联用检测的方法。
技术介绍
微囊藻毒素(Microcystins)为蓝藻水华释放的一类具有强烈致癌作用的肝毒素,其毒性较大,分布广泛,目前已发现异构体多约80余种,其结构由7个氨基酸组成,主要产自微囊藻(Microcystisaeruginosa)、鱼腥藻(Anabaena)、念珠藻(Notoc)等浮游性蓝藻,化学结构如图1所示,其中MC-LR最为常见。调查表明,我国60%的水体由于过多接纳了氮和磷等营养物质,使水体的生态结构与功能发生了重大变化,导致藻类的异常繁殖生长,从而出现了蓝藻水华现象。水面湖靛堆积,大量消耗水中溶解氧致鱼类窒息死亡,藻体死亡分解过程中释放生物毒素类次级代谢产物,导致水体污染,水生动植物死亡。MC进入人体肝细胞后,能强烈地抑制蛋白磷酸酶(PP1、PP2A)的活性,诱发细胞角蛋白高度磷酸化,导致肝细胞微丝分解、破裂和出血。MCs常用检测手段主要包括小鼠腹腔注射生物分析法、酶联免疫法、蛋白磷酸酶抑制等方法,但存在操作复杂,且无法实现不同种类MC的分析鉴定等缺点。将MCs氧化生成MMPB(2-甲基-3-甲氧基-4-苯基丁酸),甲酯化衍生后用气相色谱质谱(GC-MS)测定MCs总含量。采用固相萃取-液相色谱/紫外检测法(SPE-HPLC/DAD)测定水体、土壤等样品中的MCs。近几年来质谱技术的应用越来越广泛,研究人员对质谱高通量快速检测技术也提出了更高的要求。生物组织样本无法 ...
【技术保护点】
1.利用激光解吸附测定鱼肉中微囊藻毒素的方法,包括步骤A的样品处理、步骤C的微囊藻毒素提取、步骤D的仪器分析、步骤E的计算;其特征是:在步骤A和步骤C之间设置步骤B的激光解吸附微囊藻毒素:取步骤A所得的2g组织匀浆液A1放置于具塞试管中,再加入3±0.5mL溶剂I,混合后进行磁力搅拌;启动激光器,对具塞试管中混合液进行激光处理,得到样品B1;将所得的样品B1进行步骤C;所述溶剂I为甲醇/水/三氟乙酸=80/19.9/0.1(v/v/v)。
【技术特征摘要】
1.利用激光解吸附测定鱼肉中微囊藻毒素的方法,包括步骤A的样品处理、步骤C的微囊藻毒素提取、步骤D的仪器分析、步骤E的计算;其特征是:在步骤A和步骤C之间设置步骤B的激光解吸附微囊藻毒素:取步骤A所得的2g组织匀浆液A1放置于具塞试管中,再加入3±0.5mL溶剂I,混合后进行磁力搅拌;启动激光器,对具塞试管中混合液进行激光处理,得到样品B1;将所得的样品B1进行步骤C;所述溶剂I为甲醇/水/三氟乙酸=80/19.9/0.1(v/v/v)。2.根据权利要求1的利用激光解吸附测定鱼肉中微囊藻毒素的方法,其特征是:A、样品处理:以鱼肉作为待测样品;制备组织匀浆液A1:在鱼肉中加入溶剂I后进行均质分散,得组织匀浆液A1;所述溶剂I为甲醇/水/三氟乙酸=80/19.9/0.1(v/v/v);鱼肉:溶剂I=1:1.5~2.5的重量比;C、微囊藻毒素提取:将样品B1离心,取离心后所得的上清液进行旋转蒸发至体积为0.6~0.9mL,然后用有机溶剂II定容至1mL,得到样品C1;所述有机溶剂II为乙腈/水=90/10(v/v);D、仪器分析:采用液相色谱串联质谱联用技术检测样品C1中的微囊藻毒素含量;使用WatersAtlantisT3色谱柱(2.1mm×150mm;ID,3.5μm);流动相A为水/甲酸(999/1,v/v),流动相B为乙腈/甲酸(999/1,v/v);梯度洗脱条件为:25%B(0~1min),25-95%B(1~5min),95%B(5~9min),and95-25%B(9~10min);流速为0.3mL/min;色谱柱温度为40℃;进样量为10μL;质谱采用正离子下的多反应监测模式,温度为500℃,离子喷雾电压5.5kV,雾化气压35psi;E、计算以等重的MC-RR、MC-YR和MC-LR...
【专利技术属性】
技术研发人员:王苢轩,邓丰田,
申请(专利权)人:杭州邦沃森生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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