一种番茄红素含量的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种番茄红素含量的检测方法，其方法工艺为：（1）番茄样品提取得到样品溶液，或者番茄提取物样品溶解得到样品溶液；所述样品溶液浓度为0.01～0.1mg/mL；（2）使用分光光度计测定样品溶液，得到样品中总类胡萝卜素的含量；（3）使用高效液相色谱仪测定样品溶液，得到番茄红素的峰面积归一化比例，色谱柱为Agilent ZOBAX SB‑C18、150mm*4.6mm、5μm，流动相条件为甲醇:二氯甲烷=95:5，采用与步骤（2）相同的检测波长；（4）通过计算公式X=X0×P，计算得到样品中番茄红素的含量；其中X为样品中番茄红素的含量；X0为样品中总类胡萝卜素的含量；P为样品中番茄红素的峰面积归一化比例。本方法能够保证检测的准确性和稳定性，操作简单快捷。

A Method for Detecting Lycopene Content

The invention discloses a method for detecting the content of lycopene, which comprises: (1) extracting tomato samples to obtain sample solution, or dissolving tomato extract samples to obtain sample solution; the concentration of the sample solution is 0.01-0.1mg/mL; (2) determining sample solution by spectrophotometer to obtain the content of total carotenoids in the sample; (3) using high performance liquid chromatography to obtain the content of total carotenoids in the sample; (3) using high performance liquid chromatography to obtain the content of total carotenoids in the sample. The chromatographic column was Agilent ZOBAX SB_C18, 150mm*4.6mm, 5um. The mobile phase condition was methanol: dichloromethane = 95:5, and the detection wavelength was the same as step (2); (4) The content of lycopene in the sample was calculated by calculating formula X=X0 *P; X was the content of lycopene in the sample; X0 was the content of total carotenoids in the sample, and P was the normalized ratio of peak area of lycopene in the sample. This method can ensure the accuracy and stability of the detection, and the operation is simple and fast.

【技术实现步骤摘要】
一种番茄红素含量的检测方法
本专利技术属于食品检测领域，尤其是一种番茄红素含量的检测方法。
技术介绍
番茄红素(Lycopene)是一种天然食用色素，主要植物来源是番茄，其他类型植物如西瓜和胡萝卜中也含有少量番茄红素。番茄红素是由11个共轭和2个非共轭碳-碳双键组成的直链型碳氢化合物，分子式为C40H56。番茄红素是一种非常重要的天然抗氧化剂，其抗氧化性能在类胡萝卜素中最强，其清除单线态氧效果是VE的100倍。番茄红素也是一种保健食品原料，在防癌和抗癌作用具有一定的效果，能有效预防前列腺癌、消化道癌等及心血管疾病的发生。番茄红素已被联合国粮农组织和世界卫生组织(FAO/WHO)，联合国食品添加剂委员会(JECFA)认定为A类营养素，并为50多个国家和地区作为营养和着色双重作用的食品添加剂。关于番茄及其提取物中番茄红素含量的检测方法，目前主要有分光光度法和高效液相色谱法，但这两种方法均不能准确定量样品中的番茄红素含量。其中：分光光度法测定的是番茄提取物中总类胡萝卜素的含量，其中包括番茄红素和其他类胡萝卜素成分，从检测原理上无法真实地反应样品中番茄红素的含量；高效液相色谱法虽能够准确的定位到番茄红素成分，但由于番茄红素标准品的稳定性和不易控制问题(粉末条件下与氧气快速发生反应而降解，溶液条件下即使在-20℃条件下存在，在24h内即会发生成分转化和降解)，造成液相番茄红素检测方法很难控制，检测结果误差达到10％水平。由于目前行业番茄红素检测方法的不准确和可操作性问题，造成行业内经常出现贸易纠纷，尤其是涉及到国际贸易过程中。因此，准确的检测番茄红素含量，对于提高行业质量控制水平，更好地促进国内番茄红素产品推向国际市场具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种准确性高的番茄红素含量的检测方法。为解决上述技术问题，本专利技术所采取的方法工艺为：(1)番茄粉样品用含有0.05wt％BHT的二氯甲烷溶液采用超声或水浴的方式进行提取，料液体积比1:5～20(m/v)，过滤得到测试液A；或者，番茄提取物样品用含有0.05wt％BHT的二氯甲烷溶液直接溶解，得到测试液A；(2)移取2mL测试液A至100mL容量瓶中，加入10mL无水乙醇，石油醚定容，混合均匀，得到测试液B；测试液B以石油醚为空白，在472nm处测定吸光度；样品中总类胡萝卜素含量以质量分数w计，数值以％表示，按公式E.1计算样品中总类胡萝卜素的含量：式中：X0－样品中总类胡萝卜素的质量分数，％；A－测试液B的吸光度；K－样品的稀释倍数；3450－1％试样液在石油醚中波长472nm处的吸收系数；m－样品的称样量，g；(3)测试液A过滤后用高效液相色谱仪测定，得到番茄红素的峰面积归一化比例P；色谱柱为AgilentZOBAXSB-C18、150mm*4.6mm、5μm，流动相条件为甲醇:二氯甲烷＝95:5，流速1.5mL/min，检测波长472nm，色谱柱温度40℃，进样量10μL；(4)通过计算公式X＝X0×P，计算得到样品中番茄红素的含量；其中X为样品中番茄红素的含量；X0为样品中总类胡萝卜素的含量；P为样品中番茄红素的峰面积归一化比例。本专利技术所述步骤(1)中，番茄提取物包括番茄红素油树脂、番茄红素晶体、番茄红素油或番茄红素粉末。本专利技术所述步骤(1)中，超声功率200～400W，超声频率40KHZ，超声温度为25～50℃，超声时间为20～60min。本专利技术所述步骤(1)中，水浴温度25～50℃，水浴时间为30～90min。采用上述技术方案所产生的有益效果在于：本专利技术具有无需使用番茄红素标准品定量的优势，只需要通过标准品在色谱图上进行峰位置定性，然后对所有色谱组分在基线部分进行积分，在积分结果表中读取番茄红素成分的峰面积比例；再结合分光光度法测定样品中的总类胡萝卜素含量，通过总类胡萝卜素乘以番茄红素比例，即可得到准确的番茄红素含量。本专利技术使用的面积归一化法对高效液相色谱条件的选择具有较高的要求，需要解决总类胡萝卜素含量乘以番茄红素的峰面积归一化例等于番茄红素含量的对等关系问题；因此，本专利技术采用下述改进：首先，在检测波长选择上，高效液相色谱条件的波长与分光光度法测定总类胡萝卜素的波长一致。其次，在流动相选择和色谱柱选择上，使得样品液中的各种类胡萝卜素成分均能在液相图谱上得到分离，且番茄红素成分的分离度需要满足要求。最后，在液相检测样品液的浓度选择上，调整至合适的浓度范围，得到的番茄红素峰面积归一化比例能真实的反应样品成分比例。本专利技术克服了番茄红素标准品由于不稳定带来的检测技术困难，解决了番茄红素传统检测方法中分光光度法检测稳而不准和高效液相色谱法准而不稳的技术问题，具有明显技术进步。本专利技术采用一种面积归一化法测定番茄红素，能够保证检测的准确性和稳定性，解决了番茄红素标准品不稳定的问题，该方法操作简单快捷，易于在行业内推广使用。附图说明下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明。图1是番茄红素的紫外分光光度计扫描图谱；图2是实施例1番茄粉的液相检测图谱；图3是实施例7番茄红素油树脂的液相检测图谱；图4是实施例8番茄红素油的液相检测图谱；图5是实施例9番茄红素粉末的液相检测图谱；图6是实施例10番茄红素晶体的液相检测图谱。具体实施方式本番茄红素含量的检测方法采用下述工艺：(1)制备样品溶液：番茄样品提取或者番茄提取物样品溶解得到测试液A；具体提取或配置工艺为：A、番茄粉样品使用含有0.05wt％BHT(2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚)的二氯甲烷溶液按照料液比1:5～20(m/v)的方式，使用超声或水浴的方式进行提取，提取液经定性滤纸过滤制备得到测试液A。采用超声提取时的参数为：超声功率200～400W，超声频率为40KHZ，超声温度为25～50℃，超声时间为20～60min。采用水浴提取时的参数为：水浴温度25～50℃，水浴时间为30～90min。B、番茄提取物样品使用含有0.05wt％BHT的二氯甲烷溶液直接溶解得到测试液A；番茄提取物包括：番茄红素油树脂、番茄红素晶体、番茄红素油或番茄红素粉末。(2)测定样品中总类胡萝卜素的含量：移取2mL测试液A置于100mL棕色容量瓶中，加入10mL无水乙醇，石油醚定容，混合均匀，得到测试液B。使用分光光度计进行测定，将得到的测试液B置于1cm比色皿中，以石油醚为空白，在472nm处测定吸光度。样品中总类胡萝卜素含量以质量分数w计，数值以％表示，按公式E.1计算样品中总类胡萝卜素的含量：式中：X0－样品中总类胡萝卜素的质量分数，％；A－测试液B的吸光度；K－样品的稀释倍数；3450－1％试样液在石油醚中波长472nm处的吸收系数；m－样品的称样量，g。由于样品溶解(萃取)后不占体积，所以稀释倍数K按下式进行计算：测试液B*测试液A/2。(3)测定样品中番茄红素的峰面积归一化比例：使用高效液相色谱仪进行测定，将步骤(1)所得测试液A用0.45μm有机滤膜过滤后注入液相色谱进行检测，记录色谱图。将色谱图中所有可见成分在基线位置进行积分，从积分结果表中读出番茄红素成分的峰面积归一化比例P。高效液相色谱参数条件如下：色谱柱：AgilentZOBAXSB-C18，150mm*4.6mm，5μm；流动相本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种番茄红素含量的检测方法，其特征在于，其方法工艺为：（1）番茄粉样品用含有0.05wt%BHT的二氯甲烷溶液采用超声或水浴的方式进行提取，料液体积比1:5～20（m/v），过滤得到测试液A；或者，番茄提取物样品用含有0.05wt%BHT的二氯甲烷溶液直接溶解，得到测试液A；（2）移取2mL测试液A至100mL容量瓶中，加入10mL无水乙醇，石油醚定容，混合均匀，得到测试液B；测试液B以石油醚为空白，在472nm处测定吸光度；样品中总类胡萝卜素含量以质量分数w计，数值以%表示，按公式E.1计算样品中总类胡萝卜素的含量：

【技术特征摘要】
1.一种番茄红素含量的检测方法，其特征在于，其方法工艺为：（1）番茄粉样品用含有0.05wt%BHT的二氯甲烷溶液采用超声或水浴的方式进行提取，料液体积比1:5～20（m/v），过滤得到测试液A；或者，番茄提取物样品用含有0.05wt%BHT的二氯甲烷溶液直接溶解，得到测试液A；（2）移取2mL测试液A至100mL容量瓶中，加入10mL无水乙醇，石油醚定容，混合均匀，得到测试液B；测试液B以石油醚为空白，在472nm处测定吸光度；样品中总类胡萝卜素含量以质量分数w计，数值以%表示，按公式E.1计算样品中总类胡萝卜素的含量：式中：X0－样品中总类胡萝卜素的质量分数，%；A－测试液B的吸光度；K－样品的稀释倍数；3450－1%试样液在石油醚中波长472nm处的吸收系数；m－样品的称样量，g；（3）测试液A过滤后用高效液相色谱仪测定，得到番茄红素的峰面积归一化比例P；色谱柱为AgilentZOB...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨清山，冯默，陶晓青，卜丽双，申亚，
申请(专利权)人：晨光生物科技集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13