一种利用蛹虫草菌接种蓖麻蚕5龄幼虫培育蚕虫草的方法技术

技术编号:20910065 阅读:44 留言:0更新日期:2019-04-20 08:32
一种利用蛹虫草菌接种蓖麻蚕5龄幼虫培育蚕虫草的方法,包括以下步骤:(1)蛹虫草菌宿主选择;(2)菌种液体制备液扩大培养;(3)宿主蓖麻蚕接种后处理;(4)蚕虫草子实体培育管理:将蛹虫草斜面母种接种于固体平板培养基上活化后,接种于液体培养基中,扩大培养后接种于健康蓖麻蚕幼虫中感染僵化,将感染僵化尚未发菌的蚕体放置于无菌处理的透明塑料盒中培养管理,即得。本发明专利技术充分利用蓖麻蚕幼虫个体大、身体柔软、营养丰富等优势培育子实体;杂菌污染率低,感染僵化率、出草率高,所得蓖麻蚕蚕虫草稳定性好,子实体产量高,有效活性成份含量丰富,适合规模化生产,开发前景广阔。

A Method of Cultivating Silkworm Cordyceps militaris by inoculating 5th instar larvae of Castor Silkworm with Cordyceps militaris

A method of cultivating Cordyceps militaris by inoculating the 5th instar larvae of Castor silkworm with Cordyceps militaris fungus includes the following steps: (1) selection of host of Cordyceps militaris fungus; (2) enlarged culture of liquid preparation liquid; (3) post-treatment of host castor silkworm inoculation; (4) cultivation and management of Cordyceps militaris fruiting body: inoculate the oblique mother seeds of Cordyceps militaris on solid plate culture medium after activation, inoculate in liquid culture medium, and expand After inoculating in healthy larvae of castor silkworm, the infected silkworm was infected with rigidity, and the infected silkworm was placed in a sterile transparent plastic box for culture and management. The invention makes full use of the advantages of large individual, soft body and rich nutrition of the castor silkworm larvae to cultivate fruiting bodies; the contamination rate of the fungi is low, the infection rigidity rate and the weeding rate are high, and the obtained castor silkworm Cordyceps has good stability, high yield of fruiting bodies, rich content of effective active ingredients, which is suitable for large-scale production and has broad development prospects.

【技术实现步骤摘要】
一种利用蛹虫草菌接种蓖麻蚕5龄幼虫培育蚕虫草的方法
本专利技术涉及一种利用蛹虫草菌接种蓖麻蚕5龄幼虫培育蚕虫草的方法,属于虫草培育

技术介绍
虫草是一类具有显著滋补功效的药食同源真菌,有“活黄金”之美誉。古语云:“宁要虫草一把,不要金玉满车”。冬虫夏草、蛹虫草以及金蝉花均是中药用虫草的佼佼者。蛹虫草(Cordycepsmilitaris)亦称北虫草,是麦角菌科虫草属的模式种,以鳞翅目昆虫为寄主,通过不同方式侵染昆虫幼体,经过不断的生长发育突破昆虫体表而形成的一种真菌与虫体外壳共存的虫菌复合体。蛹虫草的药用价值在医药书目中多有记载,其药性作用温和,具有广泛的药用和食用性,无任何副作用,是我国药食两用的高级滋补品。经研究证明蛹虫草含有虫草素、喷司他丁、虫草多糖等活性成分,具有抗疲劳、抗衰老、提高机体免疫力、抑制肿瘤等作用,可以与人参、鹿茸相媲美,是一种珍稀的食用菌和珍贵的抗癌中药材。1950年,科学家首次在蛹虫草中发现和鉴定了腺苷类系物虫草素,后陆续发现其具有抗菌、抗虫和抗癌等生物活性。虫草素含量因此成了衡量虫草质量最主要的指标。2011年以来,中科院上海植物生理生态研究所先后完成了冬虫夏草、蛹虫草和蝉花等18种虫草的基因组研究。在此基础上,完整地解析了虫草素生物合成的分子机理。并首次发现蛹虫草能够合成抗癌药物喷司他丁,为蛹虫草的抗癌活性提供了分子证据,为蛹虫草的质量标准提供了新的分子指标。蛹虫草因具有其他虫草无可比拟的优点,使其在功能食品和医药等方面都有很好的开发利用前景,目前已被国家科技部批准为冬虫夏草的替代品和新资源食品。近年来,以鳞翅目经济昆虫家蚕幼虫为寄主人工栽培蛹虫草的技术不断成熟,其培育的蛹虫草形态近似于天然蛹虫草,活性成分含量高于其他寄主栽培的蛹虫草。蓖麻蚕是一种体型较大的鳞翅目泌丝昆虫,与家蚕类似,蚕体含有丰富的粗脂肪、蛋白质、氨基酸、维生素、矿物质元素,其脂肪酸组成也较合理,不饱和脂肪酸含量较高,而且还含有丰富的亚麻酸,是低胆固醇食品的潜在来源。20世纪中后期,由于食物及肉类匮乏,广西蓖麻蚕养殖户尝试把蚕蛹作为菜肴烹饪,久而久之在当地逐渐形成富有特色的饮食文化,如今已由最初的食蛹发展为食用熟蚕和预蛹。蓖麻蚕抗逆性和抗病性都比家蚕强,体型大、蚕体柔软、营养丰富。以蓖麻蚕为宿主,更便于大规模生产接种及提升蚕虫草产量和活性成分积累,从而提升保健食品附加值,有利于规模化推广。蓖麻蚕蚕虫草是蛹虫草的一种,目前与蓖麻蚕有关的人工栽培成功的蛹虫草报道较少。中国专利技术专利申请201910113947.2公开了以木薯蚕蛹为寄主培育的木薯蚕蛹虫草及其培育方法:本专利技术是将蛹虫草菌种培养成蛹虫草液体菌种,用无菌注射器将菌种注入木薯蚕蛹体内,然后控制温、湿、光等环境条件培养出草来。木薯蚕蛹虫草产品具有多种活性成分和营养成分,其功效与冬虫夏草相似,可作为药品,保健品,食品应用,其培育方法简单,周期短,成本低,是开发新型蛹虫草的一种实用方法。中国专利技术专利申请201811136359.6公开了一种蓖麻蚕蚕虫草人工栽培方法:包括蓖麻蚕饲养,其特征在于还包括寄主蚕饲养及选择、虫草母种选择、寄主蚕接种和发菌等步骤。该方法通过液体菌种将蓖麻蚕幼虫作为寄主与蛹虫草结合,培养出来的蚕虫草有效成份含量高,尤其是SOD含量比冬虫夏草高。李亚洁等(2011)采用蛹虫草菌种接种蓖麻蚕蚕蛹培育蓖麻蛹虫草,其虫草素含量高出野生蛹虫草接近2倍,而腺苷含量与野生蛹虫草相当。蓖麻蚕是一类野蚕,抗逆性和抗病性均比家蚕强的多,如何提升蛹虫草菌对蓖麻蚕感染的能力,如何预防蛹虫草菌在感染僵化期间,蚕体容易被其他病菌侵染、变黑软化腐臭是蓖麻蚕蚕虫草人工栽培需要解决的关键问题。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是,克服现有技术的缺陷,提供一种杂菌污染率低,感染僵化率、出草率高且稳定的利用蛹虫草菌接种蓖麻蚕5龄幼虫人工培育蚕虫草的方法。本专利技术解决其技术问题采用的技术方案是,一种利用蛹虫草菌接种蓖麻蚕5龄幼虫培育蚕虫草的方法,包括以下步骤:(1)蛹虫草菌宿主选择:选择五龄3~5d蓖麻蚕健康蚕体,5龄饷食后,在温度25~30℃,相对湿度60~70%环境下,连续给蓖麻叶饲养,保证通风,及时除沙,选择健壮的蓖麻蚕幼虫备用;(2)菌种液体制备液扩大培养:选用蛹虫草菌斜面母种,接种于添加5~8wt%蚕蛹粉的现配固体平板培养基上,活化7~10天;无菌操作下,将菌种均匀分割成黄豆大小,及时接种7~9块黄豆大小的菌种于1L添加6~10wt%蚕蛹粉的液体培养基中,在黑暗条件、温度20~22℃下静置培养1天,第2天开始振荡培养,每天振荡3~5h、130~140r/min,第5天在100~150lx光照强度下培养1天,用3~4层无菌纱布过滤除去菌丝,获得菌种液体制备液;蛹虫草菌斜面母种优选对抗病性强的一代杂交品种家蚕幼虫感染力强、出草稳定、子实体优质高产的母种。进一步,步骤(2)中,所述蛹虫草菌斜面母种为北冬虫夏草菌,活化后,经过抗病性强的一代杂交品种家蚕5龄幼虫活体复壮优选后分离、纯化、保存后备用。所述添加5~8wt%蚕蛹粉的现配固体平板培养基和添加6~10wt%蚕蛹粉的液体培养基为普通常用的固体平板培养基和液体培养基中分别添加蚕蛹粉。添加5~8wt%蚕蛹粉的现配固体平板培养基原料重量配比为:马铃薯25%、葡萄糖2%、蛋白胨0.2%、酵母浸膏0.1%、蚕蛹粉5~8wt%、琼脂粉1.5%、KH2PO40.15%、MgSO40.05%、水1000mL、pH7.0;添加6~10wt%蚕蛹粉的液体培养基原料重量配比为:马铃薯25%、葡萄糖2%、蛋白胨0.25%、酵母浸膏0.2%、蚕蛹粉6~10wt%、KH2PO40.2%、MgSO40.1%、VB10.01%、水1000mL、pH7.5。(3)宿主蓖麻蚕接种后处理:取步骤(1)所得健壮的蓖麻蚕幼虫,每头注射0.45~0.60ml的步骤(2)所得菌种液体制备液,注射完成后立即将蚕体放在草木灰上自由爬行(所述草木灰经过100℃以上高温灭菌8~10小时处理过),温度21~24℃,相对湿度60~70%,通风条件下培养3天,待接种伤口完全愈合后放入纱网木框中,用纱网盖住,温度21~24℃,相对湿度60~70%,通风条件下继续培养7~9天,待95%以上蚕体被感染僵化后,收集整理感染僵化尚未发菌的蚕体,剔除因杂菌感染、变黑软化或未感染僵化的蚕体;草木灰优选为水稻谷壳燃烧处理所得的黑灰;(4)蚕虫草子实体培育管理:将步骤(3)所得感染僵化尚未发菌的蚕体整齐放置于带盖透明塑料盒(所述带盖透明塑料盒经过紫外灯无菌处理3小时以上)中,放置在温度18℃~22℃、相对湿度60%~70%的黑暗环境下培养7~10天;再转入光强为100~260lx,温度为白天20~22℃、夜晚16~18℃,相对湿度70~75%的条件下培养4~6天;在带盖透明塑料盒盖打孔透气后,再转入光强为150~300lx,温度为18℃~23℃,相对湿度70%~80%的条件下培养40~50天,即获得成熟蓖麻蚕蚕虫草。进一步,步骤(2)中,蚕蛹粉的制备方法:将蛹体色黄褐、变硬、未羽化前的家蚕蛹,在60~70℃烘干粉碎,过80目筛,即得。进一步,步骤(3)中,接种时应缓慢平稳推进,尽量减轻本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种利用蛹虫草菌接种蓖麻蚕5龄幼虫培育蚕虫草的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)蛹虫草菌宿主选择:选择五龄3~5d蓖麻蚕健康蚕体,5龄饷食后,在温度25~30℃,相对湿度60~70%环境下,连续给蓖麻叶饲养,保证通风,及时除沙,选择健壮的蓖麻蚕幼虫备用;(2)菌种液体制备液扩大培养:选用蛹虫草菌斜面母种,接种于添加5~8wt%蚕蛹粉的现配固体平板培养基上,活化7~10天;无菌操作下,将菌种均匀分割成黄豆大小,及时接种7~9块黄豆大小的菌种于1L添加6~10wt%蚕蛹粉的液体培养基中,在黑暗条件、温度20~22℃下静置培养1天,第2天开始振荡培养,每天振荡3~5h、130~140 r/min,第5天在100~150lx光照强度下培养1天,用3~4层无菌纱布过滤除去菌丝,获得菌种液体制备液;(3)宿主蓖麻蚕接种后处理:取步骤(1)所得健壮的蓖麻蚕幼虫,每头注射0.45~0.60ml的步骤(2)所得菌种液体制备液,注射完成后立即将蚕体放在草木灰上自由爬行,温度21~24℃,相对湿度60~70%,通风条件下培养3天,待接种伤口完全愈合后放入纱网木框中,用纱网盖住,温度21~24℃,相对湿度60~70%,通风条件下继续培养7~9天,待95%以上蚕体被感染僵化后,收集整理感染僵化尚未发菌的蚕体,剔除因杂菌感染、变黑软化或未感染僵化的蚕体;(4)蚕虫草子实体培育管理:将步骤(3)所得感染僵化尚未发菌的蚕体整齐放置于带盖透明塑料盒中,放置在温度18℃~22℃、相对湿度60%~70%的黑暗环境下培养7~10天;再转入光强为100~260lx,温度为白天20~22℃、夜晚16~18℃,相对湿度70~75%的条件下培养4‑6天;在带盖透明塑料盒盖打孔透气后,再转入光强为150~300lx,温度为18℃~23℃,相对湿度70%~80%的条件下培养40~50天,即获得成熟蓖麻蚕蚕虫草。...

【技术特征摘要】
1.一种利用蛹虫草菌接种蓖麻蚕5龄幼虫培育蚕虫草的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)蛹虫草菌宿主选择:选择五龄3~5d蓖麻蚕健康蚕体,5龄饷食后,在温度25~30℃,相对湿度60~70%环境下,连续给蓖麻叶饲养,保证通风,及时除沙,选择健壮的蓖麻蚕幼虫备用;(2)菌种液体制备液扩大培养:选用蛹虫草菌斜面母种,接种于添加5~8wt%蚕蛹粉的现配固体平板培养基上,活化7~10天;无菌操作下,将菌种均匀分割成黄豆大小,及时接种7~9块黄豆大小的菌种于1L添加6~10wt%蚕蛹粉的液体培养基中,在黑暗条件、温度20~22℃下静置培养1天,第2天开始振荡培养,每天振荡3~5h、130~140r/min,第5天在100~150lx光照强度下培养1天,用3~4层无菌纱布过滤除去菌丝,获得菌种液体制备液;(3)宿主蓖麻蚕接种后处理:取步骤(1)所得健壮的蓖麻蚕幼虫,每头注射0.45~0.60ml的步骤(2)所得菌种液体制备液,注射完成后立即将蚕体放在草木灰上自由爬行,温度21~24℃,相对湿度60~70%,通风条件下培养3天,待接种伤口完全愈合后放入纱网木框中,用纱网盖住,温度21~24℃,相对湿度60~70%,通风条件下继续培养7~9天,待95%以上蚕体被感染僵化后,收集整理感染僵化尚未发菌的蚕体,剔除因杂菌感染、变黑软化或未感染僵化的蚕体;(4)蚕虫草子实体培育管理:将步骤(3)所得感染僵化尚未发菌的蚕体整齐放置于带盖透明塑料盒中,放置在温度18℃~22℃、相对湿度60%~70%的黑暗环境下培养7~10天;再转入光强为100~260lx,温度为白天20~22℃、夜晚16~18℃,相对湿度70~75%的条件下培养4-6天;在带盖透明塑料盒盖打孔透气后,再转入光强为150~300lx,温度为18℃~23℃,相对湿度70%~80%的条件下培养40~50天,即获得成熟蓖麻蚕蚕虫草。2.根据权利要求1所述的利用蛹虫草菌接种蓖麻蚕5龄幼虫培育蚕虫草...

【专利技术属性】
技术研发人员:张俊李一平颜新培廖模祥钱荷英张月华李刚张晓米雅兰徐瑛雷语
申请(专利权)人:湖南省蚕桑科学研究所
类型:发明
国别省市:湖南,43

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