一种肠炎沙门氏菌检测方法、试纸条及应用技术

本发明专利技术公开了一种肠炎沙门氏菌检测方法、试纸条及应用，肠炎沙门氏菌的检测方法，包括将带正电的富氮碳纳米颗粒与待检测样品中的肠炎沙门氏菌进行孵育得到待检液，再通过肠炎沙门氏菌单克隆抗体捕获待检液中的与带正电的富氮碳纳米颗粒结合的肠炎沙门氏菌。该发明专利技术只用一种抗体划在硝酸纤维素膜上直接进行检测，打破了传统同时采用两种抗体的夹心检测方法，大大节省了成本，解决了配对抗体的困难，更简单，方便，新颖。

【技术实现步骤摘要】
一种肠炎沙门氏菌检测方法、试纸条及应用
本专利技术属生物检测领域，具体涉及一种肠炎沙门氏菌检测方法、试纸条及应用。
技术介绍
沙门氏菌是一类革兰氏阴性，大部分周生鞭毛，可以运动，无荚膜和芽孢，两端钝圆的短杆菌，最适生长温度为37℃，20℃以上可以正常繁殖。沙门氏菌感染是公共卫生学中具有重要意义的人畜共患病之一，夏秋季节的食物传播是主要感染途径，人体摄入之后一般在12-14h内出现腹泻、发热、头痛、腹痛、恶心及呕吐和畏寒等症状，还伴有乏力、肌肉酸痛等症状，严重的可以造成死亡。其中以鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌和肠炎沙门氏菌最为常见。沙门氏菌是我国众多食品标准中的检测项目，且要求不得检出。快速、准确、灵敏、简便地检测出沙门氏菌，在医疗卫生、食品卫生、动物疫病监测等方面具有重要的意义。迄今为止，已经报道了检测沙门氏菌的几种可行方法，包括传统沙门氏菌检测方法，酶联免疫吸附测定，聚合酶链反应和电化学生物传感器。但是，这些方法不适合实时检测，因为它们需要依靠复杂而昂贵的仪器，复杂的样品预处理和操作，耗时费力。为了更早更灵敏地检测肠炎沙门氏菌，特别是对于定点护理应用，实现易于操作，快速，便携和低成本的方法仍然是巨大的技术挑战。近年来，免疫层析试纸条，由于其制备和操作方便，成本低，一次性使用，检测时间短，结果直观可靠等优点，得到了广泛的关注，成为快速检测的成熟诊断工具。免疫层析试纸条是一类优异的生物传感器，在食源性致病菌检测领域得到广泛的应用。传统试纸条用胶体金作为探针，但是灵敏度低，这阻碍了其进一步的应用。为了满足需求，研究者从诸多方面致力于提高试纸条检测方法的灵敏度，例如通过使用不同的标签如荧光纳米微球，量子点，磁性微球，上转换纳米材料，石墨烯，复合材料等。虽然提高了灵敏度，但这些纳米材料的合成方法较复杂，合成条件较高。另外，在传统探针的构建过程中，会影响到抗体的活性，进而影响到免疫层析试纸条的广泛应用。因此，迫切需要不依赖于传统探针构建，稳定低成本的信号载体，以简化分析步骤，提高试纸条的实用性。
技术实现思路
针对现有技术中的缺陷和不足，本专利技术提供了一种肠炎沙门氏菌检测方法、试纸条及应用，打破传统的沙门氏菌的夹心检测方法，只用一种抗体划在硝酸纤维素膜上直接进行检测，只需将细菌和表面正电的富氮碳纳米颗粒进行简单的孵育就可得到明亮的黑色条带，而不使用任何纳传统探针的构建。为达到上述技术效果，本专利技术采取的技术方案为：根据本专利技术的第一个目的，一种肠炎沙门氏菌的检测方法，包括将带正电的富氮碳纳米颗粒与待检测样品中的肠炎沙门氏菌进行孵育得到待检液，再通过肠炎沙门氏菌单克隆抗体捕获待检液中的与带正电的富氮碳纳米颗粒结合的肠炎沙门氏菌。可选的，所述的带正电的富氮碳纳米颗粒采用氮化碳纳米颗粒在高温下碳化得到富氮碳纳米颗粒；再将得到的富氮碳纳米颗粒经过高温强酸刻蚀给富氮碳纳米颗粒表面带有正电荷即得。可选的，高温下碳化的温度为700～900℃；高温强酸刻蚀的温度为90～120℃；所述的强酸选自浓盐酸、浓硝酸或浓硫酸。可选的，(1)制备富氮碳纳米颗粒：包括将尿素在高温下煅烧得到氮化碳纳米颗粒，氮化碳纳米颗粒在高温下碳化得到富氮碳纳米颗粒；(2)制备表面正电的富氮碳纳米颗粒溶液：包括将得到的富氮碳纳米颗粒经过高温强酸刻蚀给富氮碳纳米颗粒表面带有正电荷即得；尿素的高温煅烧温度为500～600℃，高温下碳化的温度为700～900℃；高温强酸刻蚀的温度为90～120℃；所述的强酸选自浓盐酸、浓硝酸或浓硫酸。可选的，所述的待检液中，带正电的富氮碳纳米颗粒的质量百分浓度为0.010％～0.060％，肠炎沙门氏菌单克隆抗体的用量为1～1.5mg/mL。可选的，所述捕获的捕获时间为10～20分钟。根据本专利技术的第二个目的，一种肠炎沙门氏菌的检测试纸条，该试纸条采用本专利技术所述的肠炎沙门氏菌的检测方法进行检测。可选的，所述试纸条的检测线包被有肠炎沙门氏菌单克隆抗体，试纸条无质控线；所述的试纸条包括衬板，衬板上贴有硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜的一端覆盖吸水垫，硝酸纤维素膜的另一端依次覆盖样品垫和结合垫，硝酸纤维素膜的非覆盖面上沿横向设置检测线；检测线包被有肠炎沙门氏菌单克隆抗体，结合垫及样品垫分别经封闭液封闭处理。可选的，检测线包被有肠炎沙门氏菌单克隆抗体的制备方法包括：肠炎沙门氏菌单克隆抗体溶于包被液配制成1mg/mL的抗体包被溶液，将抗体包被溶液以1μL/cm的速度包被于距硝酸纤维素膜的检测线上；所述的包被液为：0.02g叠氮化钠、0.8g氯化钠、0.29g十二水磷酸氢二钠、0.02g氯化钾和磷酸二氢钾0.02g加水定容至100mL即得。本专利技术所述的肠炎沙门氏菌的检测方法或本专利技术所述的肠炎沙门氏菌的检测试纸条用于检测饮用水中肠炎沙门氏菌的应用。由于采用上述技术方案，具有以下有益效果：(1)免标记。只需将细菌和表面正电的富氮碳纳米颗粒进行简单的孵育就可得到明亮的黑色条带，免去了复杂的标记过程。(2)打破传统的夹心检测方法。该专利技术只用一种抗体划在硝酸纤维素膜上直接进行检测，打破了传统同时采用两种抗体的夹心检测方法，大大节省了成本，解决了配对抗体的困难，更简单，方便，新颖。(3)灵敏度高。本专利技术提供的试纸条对肠炎沙门氏菌的最低检测限为102cfu·mL-1，其值低于很多其他文献报道的。(4)特异性高。该专利技术用细菌鞭毛蛋白免疫制备出的单克隆抗体，只能高度特异性识别肠炎沙门氏菌，对其他沙门类和非沙门类的细菌都无特异性。(5)良好的实际应用。本专利技术可以检测饮用水中的肠炎沙门氏菌，且灵敏度与标准菌株浓度一样，可以达到102cfu·mL-1，具有很好的应用前景，可以作为通用检测方法检测所有的病原菌。本制备方法与传统的方法相比，不需要任何复杂的材料标记抗体的探针；只用一种抗体，解决了两个配对抗体的困难；大大简化了制备过程，结构简单，无需在结合垫上提前加载探针，只有检测线，没有质控线。这种方法新颖，简单，快捷，成本低，制作周期短，整个过程在15分钟内完成，且能用于实际样品饮用水的检测，通过一种抗体及简单的孵育就可作为通用的检测病原菌的方法，适合现场检测。附图说明图1为本专利技术的快速检测肠炎沙门氏菌的免疫层析试纸条的试纸条组装示意图；图2为本专利技术的快速检测肠炎沙门氏菌的免疫层析的原理流程图；图3为实施例3的结果图；图4为实施例4的结果图；图5为实施例5的结果图；图6为实施例6的结果图；以下结合说明书附图和具体实施方式对本专利技术做具体说明。具体实施方式本专利技术的工作原理为：基于静电吸附原理，表面正电的富氮碳纳米颗粒富集在了沙门菌表面，将孵育后的菌悬液滴加到试纸条上，然后由于毛细管作用，孵育后的细菌沿着硝酸纤维素膜迁移，基于抗原抗体特异性结合原理，被T线的抗体捕获，使T线显示可见的强烈的黑色条带。通过该过程，肠炎沙门氏菌能够通过T线上的捕获抗体有效捕获，其打破了传统同时采用测试抗体和捕获抗体的夹心试纸条的形式，只使用一种抗体，大大降低了成本并实现高度灵敏的检测。此外，这种简便的传感器大大简化了免疫测定相关分析试剂的早期制备过程，如传统探针的制备过程。该设备具有很高的灵敏度和很强的特异性，结构简单，成本效益高，不需要设备，快速的分析时间和便携性，具有极大的应用潜力来满足POC诊断测本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肠炎沙门氏菌的检测方法，其特征在于，包括将带正电的富氮碳纳米颗粒与待检测样品中的肠炎沙门氏菌进行孵育得到待检液，再通过肠炎沙门氏菌单克隆抗体捕获待检液中的与带正电的富氮碳纳米颗粒结合的肠炎沙门氏菌。

【技术特征摘要】
1.一种肠炎沙门氏菌的检测方法，其特征在于，包括将带正电的富氮碳纳米颗粒与待检测样品中的肠炎沙门氏菌进行孵育得到待检液，再通过肠炎沙门氏菌单克隆抗体捕获待检液中的与带正电的富氮碳纳米颗粒结合的肠炎沙门氏菌。2.如权利要求1所述的肠炎沙门氏菌的检测方法，其特征在于，所述的带正电的富氮碳纳米颗粒采用氮化碳纳米颗粒在高温下碳化得到富氮碳纳米颗粒；再将得到的富氮碳纳米颗粒经过高温强酸刻蚀给富氮碳纳米颗粒表面带有正电荷即得。3.如权利要求2所述的肠炎沙门氏菌的检测方法，其特征在于，高温下碳化的温度为700～900℃；高温强酸刻蚀的温度为90～120℃；所述的强酸选自浓盐酸、浓硝酸或浓硫酸。4.如权利要求2所述的肠炎沙门氏菌的检测方法，其特征在于，(1)制备富氮碳纳米颗粒：包括将尿素在高温下煅烧得到氮化碳纳米颗粒，氮化碳纳米颗粒在高温下碳化得到富氮碳纳米颗粒；(2)制备表面正电的富氮碳纳米颗粒溶液：包括将得到的富氮碳纳米颗粒经过高温强酸刻蚀给富氮碳纳米颗粒表面带有正电荷即得；尿素的高温煅烧温度为500～600℃，高温下碳化的温度为700～900℃；高温强酸刻蚀的温度为90～120℃；所述的强酸选自浓盐酸、浓硝酸或浓硫酸。5.如权利要求1、2、3或4所述的肠炎沙门氏菌的检测方法，其特征在于，所述的待检液中，带正电的富氮碳纳米颗粒的质量百分浓度为0.010％～0...

【专利技术属性】
技术研发人员：王建龙，王宗汉，张道宏，姚晓琳，窦磊娜，赵兵欣，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61