一种快速测定天然雌激素结合体的方法技术

本发明专利技术属于分析检测技术领域，公开了一种快速测定天然雌激素结合体的方法。将含有天然雌激素硫酸结合体样品经固相萃取柱富集后加入到有机溶剂中混合均匀，然后加入衍生化试剂BSTFA，在60～90℃条件下进行衍生化反应，反应完成后除去有机溶剂，用乙酸乙酯溶解反应产物进行GC‑MS分析。与常规的分析方法相比，本发明专利技术的最大特点是省去了操作繁琐的脱结合体和样品再浓缩过程，具有操作简单、成本低、快速等优点，具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种快速测定天然雌激素结合体的方法
本专利技术属于分析检测
，具体涉及一种快速测定天然雌激素结合体的方法。
技术介绍
天然雌激素是对一类甾醇类化合物的总称。目前已知的天然雌激素已多达17种，主要包括雌酮(estrone,E1)，雌二醇(17β-estradiol,E2)和雌三醇(estriol,E3)，天然雌激素的基本作用是维持人体和动物的内分泌功能正常运行。近二十年来，天然雌激素作为一类环境干扰化学物质得到了全球性的广泛关注。在最新的日本的饮用水水质标准里，雌二醇已被列为临时性的水质指标。环境中的天然雌激素主要来自于人体和动物的排泄，并主要随尿液排出体外。尿液中的天然雌激素以结合体形式存在，即硫酸结合体，葡萄糖苷醛酸结合体，以及硫酸和葡萄糖苷醛酸混合结合体。对天然雌激素总量进行分析时，需要将这些结合体脱结合体将其转化为对应的天然雌激素后再测定。到目前为止，天然雌激素结合体的脱结合体主要以酶水解法为主，但酶水解法具有成本高，反应时间需要长达24小时的缺点。前期本申请团队建立了一种酸溶剂解法快速脱天然雌激素结合体的方法，不仅试剂成本低，反应时间仅需要2个小时，但脱结合体后的反应液仍需要进一步浓缩，耗时较长。
技术实现思路
针对以上现有技术存在的缺点和不足之处，本专利技术的目的在于提供一种快速测定天然雌激素结合体的方法。本专利技术目的通过以下技术方案实现：一种快速测定天然雌激素结合体的方法，具体步骤如下：将含有天然雌激素硫酸结合体样品经固相萃取柱富集后加入到有机溶剂中混合均匀，然后加入衍生化试剂BSTFA(N,O-双(甲基硅烷基)三氟乙酰胺)，在60～90℃条件下进行衍生化反应，反应完成后除去有机溶剂，用乙酸乙酯溶解反应产物进行GC-MS分析。优选地，所述有机溶剂为甲基甲酰胺和乙酸乙酯中的一种或两种的混合溶剂。优选地，所述衍生化试剂为体积百分含量为99％BSTFA+1％TMCS(三甲基氯硅烷)。优选地，所述衍生化反应的时间为90～120min。上述快速测定天然雌激素结合体的方法流程图如图1所示。本专利技术的测定方法具有如下优点及有益效果：(1)与常规的分析方法相比，本专利技术的最大特点是省去了操作繁琐的脱结合体和样品再浓缩过程。(2)本专利技术方法具有操作简单、成本低、快速等优点，具有广泛的应用前景。附图说明图1为本专利技术快速测定天然雌激素结合体的方法流程图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。实施例1分别往含天然雌激素硫酸结合体E1-3S、E2-3S、E3-3S的试管里加入50μL甲基甲酰胺溶液，充分混合，再加入50mLBSTFA(含1％TMCS)。用盖子拧紧玻璃试管。然后将玻璃试管放入烘箱，在80℃条件下反应90分钟。冷却后再用缓慢的氮气流吹脱，待溶液全部吹干后，再加入900μL乙酸乙酯，充分混合溶解后，再用移液枪将所得溶液移到2mL的样品进样瓶进行GC-MS分析，测定结果分析如表1所示。表1天然雌激素硫酸结合体的测定结果天然雌激素硫酸结合体测定准确率(％)E1-3S68E2-3S71E3-3S77实施例2分别往含天然雌激素硫酸结合体E1-3S、E2-3S、E3-3S的试管里加入50μL乙酸乙酯有机溶液，充分混合，再加入50mLBSTFA(含1％TMCS)。用盖子拧紧玻璃试管。然后将玻璃试管放入烘箱，在80℃条件下反应120分钟。冷却后再用缓慢的氮气流吹脱，待溶液全部吹干后，再加入900μL乙酸乙酯，充分混合溶解后，再用移液枪将所得溶液移到2mL的样品进样瓶进行GC-MS分析，测定结果分析如表2所示。测定准确率公式请参见实施例1。表2天然雌激素硫酸结合体的测定结果天然雌激素硫酸结合体测定准确率(％)E1-3S82E2-3S71E3-3S86实施例3分别往含天然雌激素硫酸结合体E1-3S、E2-3S、E3-3S的试管里加入50μL乙酸乙酯有机溶液，充分混合，再加入50mLBSTFA(含1％TMCS)。用盖子拧紧玻璃试管。然后将玻璃试管放入烘箱，在80℃条件下反应150分钟。冷却后再用缓慢的氮气流吹脱，待溶液全部吹干后，再加入900μL乙酸乙酯，充分混合溶解后，再用移液枪将所得溶液移到2mL的样品进样瓶进行GC-MS分析，测定结果分析如表3所示。测定准确率公式请参见实施例1。表3天然雌激素硫酸结合体的测定结果天然雌激素硫酸结合体测定准确率(％)E1-3S89E2-3S92E3-3S115实施例4为验证分析方法的有效性，将一定量的天然雌激素硫酸结合体分别加入到人体尿液和某瓶装水。首先用固相萃取柱(OasisHLB柱)浓缩，干燥，然后用甲醇溶液将天然雌激素结合体洗脱，收集于干净玻璃管，用匀速氮气吹干。其余分析步骤同实施例1～3。具体反应温度为80℃条件下反应90分钟。测定天然雌激素硫酸结合体在实际样品中的回收率，结果如表4所示，回收率的计算公式同上述实例1～3的测定准确率。由表4结果可知样品添加回收率为45.8％～77.8％。表4天然雌激素硫酸结合体在实际样品中的回收率上述实施例为本专利技术较佳的实施方式，但本专利技术的实施方式并不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本专利技术的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速测定天然雌激素结合体的方法，其特征在于具体步骤如下：将含有天然雌激素硫酸结合体样品经固相萃取柱富集后加入到有机溶剂中混合均匀，然后加入衍生化试剂BSTFA，在60～90℃条件下进行衍生化反应，反应完成后除去有机溶剂，用乙酸乙酯溶解反应产物进行GC‑MS分析。

【技术特征摘要】
1.一种快速测定天然雌激素结合体的方法，其特征在于具体步骤如下：将含有天然雌激素硫酸结合体样品经固相萃取柱富集后加入到有机溶剂中混合均匀，然后加入衍生化试剂BSTFA，在60～90℃条件下进行衍生化反应，反应完成后除去有机溶剂，用乙酸乙酯溶解反应产物进行GC-MS分析。2.根据权利要求1所述的一种快速测定天然雌激素结合体的...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘则华，尹华，党志，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东,44