用于检测H7以及5个NA亚型AIV的引物组合及其应用制造技术

本发明专利技术公开了用于检测H7以及5个NA亚型AIV的引物组合及其应用。本发明专利技术保护一种引物组合，包括7个引物对(14种引物)，14种引物依次如序列表的序列1至序列14所示。应用本发明专利技术提供的引物组合配套GeXP检测方法鉴定H7亚型、N2亚型、N3亚型、N4亚型、N7亚型或N9亚型，具有高通量、快速、省时省力的优点，为快速鉴别H7亚型、N2亚型、N3亚型、N4亚型、N7亚型或N9亚型AIV提供了有效方法，应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】
用于检测H7以及5个NA亚型AIV的引物组合及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及用于检测H7以及5个NA亚型AIV的引物组合及其应用。
技术介绍
禽流感病毒(AvianInfluenzaviruses,AIVs)是一种有包膜、单股负链、分节段的RNA病毒，病毒基因组由8个分节段负链RNA组成。根据A型流感病毒表面糖蛋白(Hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)的抗原性不同，目前，已在禽类发现16个HA亚型和9个NA亚型，近年，在蝙蝠发现第17、18个HA亚型和10、11个NA亚型。禽流感据其临床症状分为高致病性禽流感(Highlypathogenicavianinfluenza,HPAI)和低致病性禽流感(Lowpathogenicavianinfluenza,LPAI)。H7亚型AIV可引起HPAI，给人类健康造成严重威胁，如自2013年以来爆发的H7N9亚型AIV，从长三角地区发现人感染并致死的病例，逐渐传播至全国大部分省份，给养殖业造成严重的经济损失。国家卫生计生委通报在2018年2月10-14日期间确诊一宗人类感染A型禽流感H7N4个案，这宗是全球首宗人类感染A型禽流感(H7N4)个案。H7N2、H7N3、H7N7亚型AIV均有感染人的报道。目前，已发现H7亚型可组合N2、N3、N4、N7和N9亚型感染人，因此，如果提供在一个反应管同时检测H7、N2、N3、N4、N7和N9亚型的引物组合，用于这些亚型的快速鉴别检测具有重要意义。GeXP系统(GeneExpressionProfilerGeneticAnalysisSystem)多重PCR扩增采用荧光标记通用引物和特异性嵌合引物(即基因特异性引物5’端连接通用引物序列)相结合引发多重体系扩增。PCR反应之初，先由反向特异性嵌合引物与原始模板结合进行逆转录反应，再由正向特异性嵌合引物合成cDNA的第二链，此后，由正、反向嵌合引物的特异性序列以cDNA为模板启动PCR反应，分别扩增出通用引物的互补序列；再由反应体系中占主导地位的荧光标记通用引物，与其互补序列结合，引发后续扩增,通用引物与反应体系中带有荧光标记的碱基序列互补，PCR产物经GeXP毛细管电泳分离，含有荧光标记的PCR产物经GeXP检测窗口检测，依据检测片段与标准分子片段(DNASizeStandard,DSS)迁移时间计算出扩增片段的长度，荧光信号强度代表该分离片段的扩增含量。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于检测H7以及5个NA亚型AIV的引物组合及其应用。本专利技术保护一种引物组合，包括如下7个引物对：引物对AIV-M由正向引物和反向引物组成，正向引物为(a1)、(a2)、(a3)或(a4)，反向引物为(b1)、(b2)、(b3)或(b4)；(a1)序列表的序列1所示；(a2)序列表的序列1第19至38位核苷酸所示；(a3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(a4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(a3)和/或(a4)中，基因特异性引物如序列表的序列1第19至38位核苷酸所示；(b1)序列表的序列2所示；(b2)序列表的序列2第20至39位核苷酸所示；(b3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(b4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(b3)和/或(b4)中，基因特异性引物如序列表的序列2第20至39位核苷酸所示；引物对H7由正向引物和反向引物组成，正向引物为(e1)、(e2)、(e3)或(e4)，反向引物为(f1)、(f2)、(f3)或(f4)；(e1)序列表的序列3所示；(e2)序列表的序列3第19至41位核苷酸所示；(e3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(e4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(e3)和/或(e4)中，基因特异性引物如序列表的序列3第19至41位核苷酸所示；(f1)序列表的序列4所示；(f2)序列表的序列4第20至39位核苷酸所示；(f3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(f4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(f3)和/或(f4)中，基因特异性引物如序列表的序列4第20至39位核苷酸所示；引物对N2由正向引物和反向引物组成，正向引物为(k1)、(k2)、(k3)或(k4)，反向引物为(l1)、(l2)、(l3)或(l4)；(k1)序列表的序列5所示；(k2)序列表的序列5第19至35位核苷酸所示；(k3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(k4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(k3)和/或(k4)中，基因特异性引物如序列表的序列5第19至35位核苷酸所示；(l1)序列表的序列6所示；(l2)序列表的序列6第20至36位核苷酸所示；(l3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(l4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(l3)和/或(l4)中，基因特异性引物如序列表的序列6第20至36位核苷酸所示；引物对N3由正向引物和反向引物组成，正向引物为(m1)、(m2)、(m3)或(m4)，反向引物为(n1)、(n2)、(n3)或(n4)；(m1)序列表的序列7所示；(m2)序列表的序列7第19至41位核苷酸所示；(m3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(m4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(m3)和/或(m4)中，基因特异性引物如序列表的序列7第19至41位核苷酸所示；(n1)序列表的序列8所示；(n2)序列表的序列8第20至41位核苷酸所示；(n3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(n4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(n3)和/或(n4)中，基因特异性引物如序列表的序列8第20至41位核苷酸所示；引物对N4由正向引物和反向引物组成，正向引物为(o1)、(o2)、(o3)或(o4)，反向引物为(p1)、(p2)、(p3)或(p4)；(o1)序列表的序列9所示；(o2)序列表的序列9第19至40位核苷酸所示；(o3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(o4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(o3)和/或(o4)中，基因特异性引物如序列表的序列9第19至40位核苷酸所示；(p1)序列表的序列10所示；(p2)序列表的序列10第20至39位核苷酸所示；(p3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(p4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(p3)和/或(p4)中，基因特异性引物如序列表的序列10第20至39位核苷酸所示；引物对N7由正向引物和反向引物组成，正向引物为(u1)、(u本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.引物组合，包括如下7个引物对：引物对AIV‑M由正向引物和反向引物组成，正向引物为(a1)、(a2)、(a3)或(a4)，反向引物为(b1)、(b2)、(b3)或(b4)；(a1)序列表的序列1所示；(a2)序列表的序列1第19至38位核苷酸所示；(a3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(a4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(a3)和/或(a4)中，基因特异性引物如序列表的序列1第19至38位核苷酸所示；(b1)序列表的序列2所示；(b2)序列表的序列2第20至39位核苷酸所示；(b3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(b4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(b3)和/或(b4)中，基因特异性引物如序列表的序列2第20至39位核苷酸所示；引物对H7由正向引物和反向引物组成，正向引物为(e1)、(e2)、(e3)或(e4)，反向引物为(f1)、(f2)、(f3)或(f4)；(e1)序列表的序列3所示；(e2)序列表的序列3第19至41位核苷酸所示；(e3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(e4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(e3)和/或(e4)中，基因特异性引物如序列表的序列3第19至41位核苷酸所示；(f1)序列表的序列4所示；(f2)序列表的序列4第20至39位核苷酸所示；(f3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(f4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(f3)和/或(f4)中，基因特异性引物如序列表的序列4第20至39位核苷酸所示；引物对N2由正向引物和反向引物组成，正向引物为(k1)、(k2)、(k3)或(k4)，反向引物为(l1)、(l2)、(l3)或(l4)；(k1)序列表的序列5所示；(k2)序列表的序列5第19至35位核苷酸所示；(k3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(k4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(k3)和/或(k4)中，基因特异性引物如序列表的序列5第19至35位核苷酸所示；(l1)序列表的序列6所示；(l2)序列表的序列6第20至36位核苷酸所示；(l3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(l4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(l3)和/或(l4)中，基因特异性引物如序列表的序列6第20至36位核苷酸所示；引物对N3由正向引物和反向引物组成，正向引物为(m1)、(m2)、(m3)或(m4)，反向引物为(n1)、(n2)、(n3)或(n4)；(m1)序列表的序列7所示；(m2)序列表的序列7第19至41位核苷酸所示；(m3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(m4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(m3)和/或(m4)中，基因特异性引物如序列表的序列7第19至41位核苷酸所示；(n1)序列表的序列8所示；(n2)序列表的序列8第20至41位核苷酸所示；(n3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(n4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(n3)和/或(n4)中，基因特异性引物如序列表的序列8第20至41位核苷酸所示；引物对N4由正向引物和反向引物组成，正向引物为(o1)、(o2)、(o3)或(o4)，反向引物为(p1)、(p2)、(p3)或(p4)；(o1)序列表的序列9所示；(o2)序列表的序列9第19至40位核苷酸所示；(o3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(o4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(o3)和/或(o4)中，基因特异性引物如序列表的序列9第19至40位核苷酸所示；(p1)序列表的序列10所示；(p2)序列表的序列10第20至39位核苷酸所示；(p3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(p4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(p3)和/或(p4)中，基因特异性引物如序列表的序列10第20至39位核苷酸所示；引物对N7由正向引物和反向引物组成，正向引物为(u1)、(u2)、(u3)或(u4)，反向引物为(v1)、(v2)、(v3)或(v4)；(u1)序列表的序列11所示；(u2)序列表的序列11第19至38位核苷酸所示；(u3)自上游至下...

【技术特征摘要】
1.引物组合，包括如下7个引物对：引物对AIV-M由正向引物和反向引物组成，正向引物为(a1)、(a2)、(a3)或(a4)，反向引物为(b1)、(b2)、(b3)或(b4)；(a1)序列表的序列1所示；(a2)序列表的序列1第19至38位核苷酸所示；(a3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(a4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(a3)和/或(a4)中，基因特异性引物如序列表的序列1第19至38位核苷酸所示；(b1)序列表的序列2所示；(b2)序列表的序列2第20至39位核苷酸所示；(b3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(b4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(b3)和/或(b4)中，基因特异性引物如序列表的序列2第20至39位核苷酸所示；引物对H7由正向引物和反向引物组成，正向引物为(e1)、(e2)、(e3)或(e4)，反向引物为(f1)、(f2)、(f3)或(f4)；(e1)序列表的序列3所示；(e2)序列表的序列3第19至41位核苷酸所示；(e3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(e4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(e3)和/或(e4)中，基因特异性引物如序列表的序列3第19至41位核苷酸所示；(f1)序列表的序列4所示；(f2)序列表的序列4第20至39位核苷酸所示；(f3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(f4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(f3)和/或(f4)中，基因特异性引物如序列表的序列4第20至39位核苷酸所示；引物对N2由正向引物和反向引物组成，正向引物为(k1)、(k2)、(k3)或(k4)，反向引物为(l1)、(l2)、(l3)或(l4)；(k1)序列表的序列5所示；(k2)序列表的序列5第19至35位核苷酸所示；(k3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(k4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(k3)和/或(k4)中，基因特异性引物如序列表的序列5第19至35位核苷酸所示；(l1)序列表的序列6所示；(l2)序列表的序列6第20至36位核苷酸所示；(l3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(l4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(l3)和/或(l4)中，基因特异性引物如序列表的序列6第20至36位核苷酸所示；引物对N3由正向引物和反向引物组成，正向引物为(m1)、(m2)、(m3)或(m4)，反向引物为(n1)、(n2)、(n3)或(n4)；(m1)序列表的序列7所示；(m2)序列表的序列7第19至41位核苷酸所示；(m3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(m4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(m3)和/或(m4)中，基因特异性引物如序列表的序列7第19至41位核苷酸所示；(n1)序列表的序列8所示；(n2)序列表的序列8第20至41位核苷酸所示；(n3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(n4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(n3)和/或(n4)中，基因特异性引物如序列表的序列8第20至41位核苷酸所示；引物对N4由正向引物和反向引物组成，正向引物为(o1)、(o2)、(o3)或(o4)，反向引物为(p1)、(p2)、(p3)或(p4)；(o1)序列表的序列9所示；(o2)序列表的序列9第19至40位核苷酸所示；(o3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(o4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(o3)和/或(o4)中，基因特异性引物如序列表的序列9第19至40位核苷酸所示；(p1)序列表的序列10所示；(p2)序列表的序列10第20至39位核苷酸所示；(p3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(p4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(p3)和/或(p4)中，基因特异性引物如序列表的序列10第20至39位核苷酸所示；引物对N7由正向引物和反向引物组成，正向引物为(u1)、(u2)、(u3)或(u4)，反向引物为(v1)、(v2)、(v3)或(v4)；(u1)序列表的序列11所示；(u2)序列表的序列11第19至38位核苷酸所示；(u3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(u4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(u3)和/或(u4)中，基因特异性引物如序列表的序列11第19至38位核苷酸所示；(v1)序列表的序列12所示；(v2)序列表的序列12第20至39位核苷酸所示；(v3)自上游至下游依次包括如下区段：GeXP通用引物和基因特异性引物；(v4)自上游至下游依次由如下区段组成：GeXP通用引物和基因特异性引物；(v3)和/或(v4)中，基因特异性引物如序列表的序列12第20至39位核苷酸所示；引物对N9由正向引...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢芝勋，罗思思，黄娇玲，谢志勤，谢丽基，张民秀，李孟，王盛，李丹，曾婷婷，张艳芳，范晴，邓显文，
申请(专利权)人：广西壮族自治区兽医研究所，
类型：发明
国别省市：广西,45