鉴定梯棱羊肚菌的特异性引物、试剂盒、方法及其应用技术

技术编号：20885685 阅读：36 留言：0更新日期：2019-04-17 13:36

本发明专利技术提供了一种鉴定梯棱羊肚菌的特异性引物、试剂盒、方法及其应用。本发明专利技术提供的特异性引物对通过PCR技术可以快速、准确、灵敏地实现上述应用，且引物特异性强，PCR扩增反应时间短，引物的耐用性好。

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【技术实现步骤摘要】
鉴定梯棱羊肚菌的特异性引物、试剂盒、方法及其应用
本专利技术属于生物学
，具体涉及鉴定梯棱羊肚菌的特异性引物、试剂盒、方法及其应用。本专利技术技术适用于检测或辅助检测待测样品中是否含有或候选含有梯棱羊肚菌；鉴定或辅助鉴定待测样品是否为或候选为梯棱羊肚菌；鉴定或辅助鉴定市售梯棱羊肚菌的真伪性。
技术介绍
羊肚菌(Morchella)隶属于真菌界，子囊菌亚门(Ascomycotina)，盘菌纲(Discomycetes)，盘菌目(Pezizales)，羊肚菌科(Morchellaceae)，是一种珍贵的食药用菌。羊肚菌的野生产量少，采集困难，栽培技术不成熟，价格昂贵，近年来研究人员大力发展羊肚菌的人工培植技术。据文献报道，羊肚菌属有三个支系、30个品种如尖顶羊肚菌、黑脉羊肚菌、六妹羊肚菌、梯棱羊肚菌等，外观及其相似，目前对其鉴别研究较少。仅有几篇文献使用真菌通用引物ITS扩增后测序比对确定品种，如王波等人,对人工栽培的梯纹羊肚菌进行了形态特征描述和ITSrDNA序列分析，建立发育树.(人工栽培羊肚菌的鉴定[J].西南农业学报,2013,26(5):1988-1991.)；陈吉岳等人对15个羊肚菌菌株和1个子实体对照进行了RAPD分析.(国产羊肚菌菌株的RAPD鉴别[J].植物分类与资源学报,2004,26(4):434-438.)。众所周知，采用ITS序列进行DNA测序来鉴别品种，时间比较长，且还需进行序列分析。目前未见报道通过羊肚菌特异性对羊肚菌物种进行鉴别。
技术实现思路
为弥补现有技术的空白，解决现有技术的缺陷，本专利技术提供了鉴定梯棱羊肚菌的特异性引...

【技术保护点】
1.一种梯棱羊肚菌特异性引物，其特征在于，其序列如下：MI‑4F：5’‑GTTATGATTCTGACGTCGGC‑3’；MI‑4R：5’‑CACCAGGGCTAGTAGCTTTAC‑3’。

【技术特征摘要】
1.一种梯棱羊肚菌特异性引物，其特征在于，其序列如下：MI-4F：5’-GTTATGATTCTGACGTCGGC-3’；MI-4R：5’-CACCAGGGCTAGTAGCTTTAC-3’。2.一种鉴定梯棱羊肚菌的试剂盒，其特征在于，包含以下引物：MI-4F：5’-GTTATGATTCTGACGTCGGC-3’；MI-4R：5’-CACCAGGGCTAGTAGCTTTAC-3’。3.一种鉴定梯棱羊肚菌的方法，其特征在于，包括使用权利要求1所述的引物或权利要求2所述的试剂盒。4.一种鉴定梯棱羊肚菌的方法，其特征在于，包括步骤：a)提取待测样品的基因组DNA；b)利用权利要求1所述的引物或权利要求2所述的试剂盒对步骤a)中的基因组DNA进行PCR扩增，获得扩增产物；c)利用步骤b)中获得的扩增产物鉴定所述待测样品。5.根据权利要求4所述的鉴定梯棱羊肚菌的方法，其特征在于，PCR扩增条件为：98℃预变性1min；98℃变性15sec，68℃退火10sec-15sec，72℃延伸10sec-15sec，30-35个循环；72℃延伸5min；任选的，PCR扩增条件为：98℃预变性1min；98℃变性15sec，68℃退火10sec，72℃延伸10sec，30个循环；72℃延伸5min；任选的，PCR扩增条件为：98℃预变性1min；98℃变性15sec，68℃退火15sec，72℃延伸15sec，35个循环；72℃延伸5min；任选的，PCR扩增条件为：98℃预变性1min；98℃变性15sec，68℃退火15sec，72℃延伸10sec，35个循环；72℃延伸5min。6.根据权利要求4所述的鉴定梯棱羊肚菌的方法，其特征在于，PCR扩增体系：2xPrimeSTARMaxpremix12.5μL或PfuMix12.5μL或PCRMix12.5μL，10μM/L的MI-4F/MI-4R引物各1μL，浓度大于0.01ng/μL的DNA模板1μL...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱正明，沈千汇，金李玲，张霁，李文佳，李春红，
申请(专利权)人：广东东阳光药业有限公司，乳源南岭好山好水冬虫夏草有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44

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