【技术实现步骤摘要】
双重信号增强纸基生物传感器在miRNA检测中的应用
本专利技术涉及成本低、灵敏度高、可视化的生物小分子分析检测
,更具体地说是一种能够检测miRNA的荧光/比色双模式传感器制备,本专利技术还涉及采用了核酸酶切信号放大技术。
技术介绍
miRNA属于内源性小分子非编码RNA,其长度约为19~22个成熟的核苷酸。迄今为止,miRNA在所有动植物中都有发现,约占所有基因组的4%。同时,miRNA已被证明对细胞分裂,生长和凋亡有重要影响,一些常见疾病包括癌症,心脑血管疾病,病毒感染等均与某些特定miRNA的非正常表达密切相关。每个miRNA在特定的器官、组织或细胞中的确切作用和功能仍有待研究。然而,miRNA的一系列特性,如短序列,低含量,易降解以及同家族成员之间相似的序列成为准确检测的限制因素。因此,无论是在组织或细胞水平上,灵敏的miRNA检测方法的发展都将成为miRNA生物学的一个重要里程碑。迄今为止,miRNA检测手段越来越受到人们的重视,各种各样的检测技术已被运用到miRNA的准确表达之中。其中Northern印迹被认为是标准示例法,其他很多关键的检测技术,比如阵列杂交技术,定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),等温指数扩增技术等等都在miRNA的检测中发挥了巨大的实用价值。虽然如此,高灵敏度,高通量,特异性好的检测技术仍然是个挑战。因此,迫切需要开发一个有效的平台,不仅能解决上述问题,而且可以实现可靠且便携的miRNA检测。为了提高miRNA检测的灵敏度,我们在石墨相氮化碳对贵金属纳米团簇的猝灭效应和核酸循环信号放大的基础上建立了一种新型多功能 ...
【技术保护点】
1.双重信号增强纸基生物传感器在miRNA检测中的应用,其特征包括以下步骤:1.1设计纸芯片荧光层和比色层的疏水蜡打印区域和亲水工作区域;1.2在荧光区域和亲水工作区域生长铂纳米粒子(Pt NPs);1.3将类石墨氮化碳纳米片(g‑C3N4 NSs)固定在步骤1.2所得纸芯片的工作区域,随后将DNA修饰的钯纳米链(DNA‑Pd NCs)固定上去,完成荧光猝灭;1.4将待测miRNA链固定在步骤1.3所得纸芯片的工作区域,引入双工特定核酸酶(DSN)进行核酸循环信号放大;1.5将步骤1.4所得纸芯片折叠,在比色层的工作区域滴加显色底物、pH为4~6的缓冲溶液和过氧化氢,进行比色预测定;1.6精确荧光测定:将步骤1.4所得的纸芯片放入荧光设备中,在激发波长380 nm和发射波长460 nm下进行荧光测定。
【技术特征摘要】
1.双重信号增强纸基生物传感器在miRNA检测中的应用,其特征包括以下步骤:1.1设计纸芯片荧光层和比色层的疏水蜡打印区域和亲水工作区域;1.2在荧光区域和亲水工作区域生长铂纳米粒子(PtNPs);1.3将类石墨氮化碳纳米片(g-C3N4NSs)固定在步骤1.2所得纸芯片的工作区域,随后将DNA修饰的钯纳米链(DNA-PdNCs)固定上去,完成荧光猝灭;1.4将待测miRNA链固定在步骤1.3所得纸芯片的工作区域,引入双工特定核酸酶(DSN)进行核酸循环信号放大;1.5将步骤1.4所得纸芯片折叠,在比色层的工作区域滴加显色底物、pH为4~6的缓冲溶液和过氧化氢,进行比色预测定;1.6精确荧光测定:将步骤1.4所得的纸芯片放入荧光设备中,在激发波长380nm和发射波长460nm下进行荧光测定。2.根据权利要求书1所述双重信号增强纸基生物传感器在miRNA检测中的应用,其特征在于,所用纸材料为色谱纸,用AdobeIllustratorCS4软件设计荧光/比色双模式纸芯片图案,该微流控纸芯片制备过程如下:在计算机上设计微流控纸芯片的疏水蜡批量打印图案,该微流控纸芯片包括左侧比色反应区域,中间工作区域,右边荧光反应区域,其中亲水区域直径尺寸为6mm,通道宽度为2mm。3.根据权利要求书1所述双重信号增强纸基生物传感器在miRNA检测中的应用,其特征在于,在荧光区域和工作区域生长PtNPs,制备步骤如下:将新鲜制备的10-100μL氯铂酸(H2PtCl6,浓度为20mM)和10-100μL硼氢化钠(NaBH4,浓度为20mM)快速混合均匀,然后将混合液滴加至纸芯片工作区域并于室温下干燥20min,随后,使用超纯水彻底洗涤上述纸芯片3次,在室温下干燥30min。4.根据权利要求书1所述双重信号增强纸基生物传感器在miRNA检测中的应用,其特征在于,将g-C3N4NSs固定在步骤1.2所得纸芯片的工作区域,随后将DNA-PdNCs固定上去,完成荧光猝灭,制备工艺为:第一步合成g-C3N4NSs:称量适1-5g三聚氰胺粉末置于带有盖子的瓷坩埚中,在通风状态下于600℃下加热2h,其中加热和冷却过程的速率均为3℃/min,合成黄色大块g-C3N4;随后,将g-C3N4研磨至超细粉末,称取10-200mg分散在10-200mL超纯水中,超声18h,超声后得到的悬浮液以8000r/min的速度离心,以除去剩余的未剥离的...
【专利技术属性】
技术研发人员:于京华,殷雪梅,葛慎光,
申请(专利权)人:济南大学,
类型:发明
国别省市:山东,37
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。