一种超深渊来源抗菌肽hydramacin及其制备方法技术

一种超深渊来源抗菌肽hydramacin及其制备方法，涉及Peniagone sp.抗菌肽hydramacin基因的核苷酸序列以及其所编码的氨基酸序列。根据获得的序列信息，通过基因合成hydramacin基因的核苷酸序列，在pET‑HIS载体构建了适用于原核表达的重组质粒，在大肠杆菌BL21(DE3)PLySs中进行重组蛋白表达，经纯化后的蛋白纯度高，为该蛋白的实际应用提供了基础。通过异源重组表达的hydramacin，可以克服原料来源难以获取，分离纯化过程复杂繁琐、产量低等不足，为该蛋白能广泛应用于临床医学、食品、禽畜、水产养殖业等领域奠定基础。

【技术实现步骤摘要】
一种超深渊来源抗菌肽hydramacin及其制备方法
本专利技术涉及一种超深渊来源的海参Peniagonesp.抗菌肽hydramacin，尤其是涉及一种Peniagonesp.抗菌肽hydramacin及其制备方法。技术背景在生物体免疫过程中，由特定基因编码产生一类具有抗菌活性的小分子蛋白，称为抗菌肽(1、HancockREW,ChappleDS.PeptideAntibiotics[J].Lancet,1999,349(9049):418.)。抗菌肽具有分子量小、抑菌谱广、在自然环境中广泛且稳定存在等特点。抗菌肽一般由10～60个氨基酸组成，广泛存在于细菌、真菌、病毒、植物、昆虫、两栖类动物、水生动物、哺乳动物体内(2、HeJ,AndersonM,ShiW,etal.Designandactivityofa‘dual-targeted’antimicrobialpeptide[J].InternationalJournalofAntimicrobialAgents,2009,33(6):532-537.)，能够强选择性地抑制、杀灭细菌或真菌(3、ParkCB,KimHS,KimSC.MechanismofactionoftheantimicrobialpeptidebuforinII:buforinIIkillsmicroorganismsbypenetratingthecellmembraneandinhibitingcellularfunctions.[J].Biochemical&BiophysicalResearchCommunications,1998,244(1):253-257.)，还具有抗病毒(4、JrRW,McdougallB,TranD,etal.Anti-HIV-1activityofindolicidin,anantimicrobialpeptidefromneutrophils[J].JournalofLeukocyteBiology,1998,63(1):94-100.)、抑制肿瘤细胞生长(5、LiuS,YangH,CaiH,etal.[Enhancementofcytotoxicityofcantionicantimicrobialpeptideintumorcellsbyconjugationtocell-penetratingpeptide].[J].JournalofBiomedicalEngineering,2011,28(1):110.)、促进细胞愈合和免疫调节等作用。现如今，抗菌肽在多个领域都具有应用价值，具有极大的研究意义。抗菌肽不仅具有广谱抗菌性，能杀灭细菌、真菌和病毒，而且具抑制肿瘤细胞生长、促进细胞愈合、免疫调节等作用，对人体及其它动物、植物生理损害作用很小，在先天性获得免疫方面还发挥着重要作用，易被蛋白酶水解，在生物体内的半衰期较短。最重要的是，抗菌肽对细菌的作用机制多样，作用靶点不特定不单一，不易产生耐受性，在临床医学中，是极具潜力的抗生素替代药物(6、HancockR.Thetherapeuticpotentialofcationicpeptides.[J].ExpertOpiniononInvestigationalDrugs,1998,7(2):167-74.)。目前抗菌肽在临床上己有多方面的应用：(1)发挥消炎抗感染的功效，例如多黏菌素B(polymyxinB)和短杆菌肽S(gramicidinS)已成功在临床上用于治疗皮肤烧伤感染、手术伤口感染及眼睛表面感染等(7、LedsonMJ,GallagherMJ,CowperthwaiteC,etal.Fouryears'experienceofintravenouscolomycininanadultcysticfibrosisunit.[J].EuropeanRespiratoryJournal,1998,12(3):592-594.)；(2)昆虫抗菌肽pyrrochoricm作为免疫调节剂发挥作用，pyrrochoricm及其衍生物具有运载抗原依赖性疫苗的潜力(8、JrOL,CudicM,ChuaBY,etal.Aninsectantibacterialpeptide-baseddrugdeliverysystem.[J].MolecularPharmaceutics,2015,1(1):220-232.)；(3)治疗恶性肿瘤，例如由抗菌肽magainin开发的药品MA1278已在临床上显示出对肿瘤细胞有良好的杀伤效果(9、胡荣贵,李改瑞,陆家海.抗菌肽在抗肿瘤方面的研究进展[J].实用肿瘤杂志,2010,25(2):227-230.)。抗菌肽由于其天然来源、安全无毒、抗菌性强、抗菌谱广、水溶性好、耐热耐酸碱性强等特点，在食品防腐保鲜领域被作为天然防腐剂的一类得到关注和开发。例如由乳酸链球菌分泌的乳酸链球菌素(nisin)，能够抑制葡萄球菌属、链球菌属、芽孢杆菌属等革兰氏阳性菌的生长，直接添加于猪、牛、羊、禽类等肉制品中可以有效地延长保质期(10、李增利.Nisin抗菌作用机制及抑菌效力[J].食品科技,2004(10):59-62.)。抗菌肽具有广谱抗菌性，当抗菌肽替代抗生素作为饲料添加剂时，不仅可以促进禽畜、水产类动物的生长，还可以提高它们对外源病原菌的免疫力，且在动物体内无毒副作用、无残留、不易产生耐药性(11、姜珊,王宝杰,刘梅,等.饲料中添加重组抗菌肽对吉富罗非鱼生长性能及免疫力的影响[J].中国水产科学,2011,18(6):1308-1314.)。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是提供Peniagonesp.抗菌肽hydramacin基因序列。本专利技术的第二个目的是提供Peniagonesp.抗菌肽hydramacin蛋白序列。本专利技术的第三个目的是提供Peniagonesp.抗菌肽hydramacin的制备方法。本专利技术所述Peniagonesp.抗菌肽hydramacin基因，其编码Peniagonesp.抗菌肽hydramacin的核苷酸序列，记作hydramacin。所述Peniagonesp.抗菌肽hydramacin基因的分子类型为DNA，序列特征：长度为249bp，类型为核酸，链性为双链，拓扑结构为线性，所述Peniagonesp.抗菌肽hydramacin基因的序列如下所示，记为SEQIDNo.1：本专利技术所述Peniagonesp.抗菌肽hydramacin基因，其核苷酸序列采用以下方法获得，首先根据序列信息人工合成hydramacin的核苷酸序列，序列分析知1～66bp为信号肽序列；切除信号肽后序列为SEQIDNo.2：随后以人工合成的hydramacin为模板，以合成序列SEQIDNo.4，SEQIDNo.5作为引物，经PCR扩增获得hydramacin基因核苷酸序列SEQIDNo.2(去除信号肽)。然后通过原核重组表达hydramacin基因，纯化hydramacin基因的表达产物；所述合成序列SEQIDNo.4：CGGGATCCGGTATCGGCGATTGTTGGGC；(下划线为核酸内切酶，酶切位点BamHⅠ)所述合成序列SEQIDN本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.Peniagone sp.抗菌肽hydramacin基因，其特征在于编码Peniagone sp.抗菌肽hydramacin的核苷酸序列。

【技术特征摘要】
1.Peniagonesp.抗菌肽hydramacin基因，其特征在于编码Peniagonesp.抗菌肽hydramacin的核苷酸序列。2.如权利要求1所述Peniagonesp.抗菌肽hydramacin基因，其特征在于所述Peniagonesp.抗菌肽hydramacin基因的分子类型为DNA，序列特征：长度为249bp，类型为核酸，链性为双链，拓扑结构为线性，所述Peniagonesp.抗菌肽hydramacin基因的序列如下所示，记为SEQIDNo.1：3.如权利要求1所述Peniagonesp.抗菌肽hydramacin基因，其特征在于核苷酸序列采用以下方法获得：根据获得的序列信息人工合成得到SEQIDNo.1的序列，序列分析知1～66bp为信号肽序列，切除信号肽后序列为SEQIDNo.2：之后以合成序列SEQIDNo.4和SEQIDNo.5为引物扩增，获得切除信号肽后的hydramacin基因，然后通过原核重组表达hydramacin基因，纯化hydramacin基因的表达产物；所述合成序列SEQIDNo.4：CGGGATCCGGTATCGGCGATTGTTGGGC；所述合成序列SEQIDNo.5：CGGAATTCTCAGTA...

【专利技术属性】
技术研发人员：阮灵伟，陈丹，施泓，
申请(专利权)人：自然资源部第三海洋研究所，
类型：发明
国别省市：福建,35