一种RXRβ基因及其siRNA的应用制造技术

技术编号:20884402 阅读:22 留言:0更新日期:2019-04-17 13:30
本发明专利技术公开了一种RXRβ基因及其siRNA在影响PRRSV复制中的应用,本发明专利技术利用siRNA特异性敲低RXRβ,然后通过qRT‑PCR、TCID50以及western blot方法检测了RXRβ对PRRSV感染宿主细胞的影响,并发现此宿主因子RXRβ被特异性敲低后具有显著抑制PRRSV复制和增殖的作用,该宿主因子RXRβ的特异性siRNA可以开发为预防和治疗PRRSV的药物,其对应基因RXRβ可用于研究抗PRRSV转基因猪。

【技术实现步骤摘要】
一种RXRβ基因及其siRNA的应用
本专利技术涉及抗病毒研究
,更具体的说是涉及一种RXRβ基因及其siRNA在影响PRRSV复制中的应用。
技术介绍
猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的,是严重影响全球养猪业的重要的病毒性传染病之一。20世纪80年代后期,北美和欧洲几乎同时爆发了PRRS,当时称之为“猪神秘病”。PRRS最普遍的临床特征是母猪和后代母猪出现严重的繁殖障碍以及各年龄段猪出现非特异性淋巴细胞性间质性肺炎相关的呼吸系统疾病。PRRS导致怀孕母猪胎盘部分移位,导致流产、死胎或木乃伊胎。感染后30%的怀孕母猪会发生晚期流产,其中死胎率高达100%。产前感染的仔猪通常很弱,并且伴随严重的呼吸道症状,其中高达80%的仔猪在断奶前一周死亡。感染仔猪通常表现腹泻和由肺部病变引起的严重的呼吸系统疾病。仔猪可通过感染母猪的乳腺分泌物感染,死亡率高达80%。断奶后仔猪死亡率降低,但生长缓慢,日增重及饲料利用率降低导致持续的经济损失。据统计,美国每年仅因该病造成的经济损失超过6.5亿美元。2006年我国爆发的以高热,高发病率(50%~100%),高死亡率(20%~100%)为特征的高致病性PRRS(HP-PRRS)对我国养猪业造成了严重的打击,并随后快速传播到老挝越南等东南亚临近的国家和地区。维甲酸X受体(RXR)是核激素受体(NHRs)超家族的独特成员,其涉及从细胞增殖,分化,代谢和凋亡到脂质代谢的多种细胞过程,并且在激素和维生素的信号转导中发挥重要作用。这些多效性作用不仅由于RXRs能够与不同的核受体二聚化从而对细胞生物学的特定方面进行转录控制,还因为RXR与配偶体结合形成异源二聚体可以激活RXR配偶体受体的转录。这种信号网络由于不同性质RXR亚型的存在从而使RXR异源二聚体转录活性的调节变得更加复杂。在脊椎动物中有三种RXR亚型,RXRα(NR2B1),RXRβ(NR2B2)和RXRγ(NR2B3),它们由不同的基因编码,表达水平随细胞类型和分化状态的不同而不同,这些同种型中的每一种又通过可变剪接产生几种异构体。其中,RXRβ突变导致精原细胞脂质代谢异常,表明RXRβ与控制脂质代谢功能的其他核受体相互作用。而RXRβ突变是否影响PRRSV的复制和增殖,目前没有相关报道。因此,提供一种能够影响PRRSV复制和增殖的siRNA是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
有鉴于此,本专利技术提供了一种RXRβ基因及其siRNA在影响PRRSV复制中的应用。为了实现上述目的,本专利技术采用如下技术方案:一种靶向RXRβ的siRNA,所述siRNA的序列如下:正义链:UCUGUCUUGUCCAUCCUCA;SEQIDNO.1;反义链:UGAGGAUGGACAAGACAGA;SEQIDNO.2。进一步,所述靶向RXRβ的siRNA在抑制宿主因子RXRβ表达中的应用。进一步,所述靶向RXRβ的siRNA在制备预防和治疗PRRSV药物中的应用。进一步,一种宿主因子RXRβ在抑制PRRSV复制和增殖中的应用,特异性敲低RXRβ的siRNA转染PAMs细胞后,能够有效抑制RXRβ的表达,从而抑制PRRSV在PAMs细胞中的复制和增殖。进一步,一种宿主因子RXRβ在开发抗PRRSV转基因猪中的应用。宿主因子RXRβ的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。经由上述的技术方案可知,与现有技术相比,本专利技术公开提供了一种RXRβ基因及其siRNA在影响PRRSV复制中的应用,本专利技术利用siRNA特异性敲低RXRβ,然后通过qRT-PCR、TCID50以及westernblot方法检测了RXRβ对PRRSV感染宿主细胞的影响,并发现此宿主因子RXRβ被特异性敲低后具有显著抑制PRRSV复制和增殖的作用,该宿主因子RXRβ的特异性siRNA可以开发为预防和治疗PRRSV的药物,其对应基因RXRβ可用于研究抗PRRSV转基因猪。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据提供的附图获得其他的附图。图1附图为本专利技术感染HP-PRRSVGD-HD毒株时,PAMs中RXRβmRNA的相对表达量;图2附图为本专利技术感染HP-PRRSVGD-HD毒株时,PRRSVORF7mRNA的相对表达量;图3附图为本专利技术感染HP-PRRSVGD-HD毒株时,PRRSVN蛋白的westernblot检测;图4附图为本专利技术感染HP-PRRSVGD-HD毒株时,PAMs细胞培养上清液中PRRSV基因组拷贝数;图5附图为本专利技术感染HP-PRRSVGD-HD毒株时,PAMs细胞培养上清液中的病毒滴度;图1-图5中,RXRβ-siRNA:在PAMs中转染针对RXRβ的siRNA后感染HP-PRRSVGD-HD毒株;对照siRNA组:PAMs中转染无关siRNA后感染HP-PRRSVGD-HD;正常细胞对照:PAMs感染HP-PRRSVGD-HD;空白对照:PAMs中加入转染试剂后感染HP-PRRSVGD-HD;图6附图为本专利技术感染N-PRRSV毒株时,PAMs中RXRβmRNA的相对表达量;图7附图为本专利技术感染N-PRRSV毒株时,PRRSVORF7mRNA的相对表达量;图8附图为本专利技术感染N-PRRSV毒株时,PAMs细胞培养上清液中PRRSV基因组拷贝数;图9附图为本专利技术感染N-PRRSV毒株时,PAMs细胞培养上清液中的病毒滴度;图6-图9中,RXRβ-siRNA:在PAMs中转染针对RXRβ的siRNA后感染N-PRRSV毒株;对照siRNA组:PAMs中转染无关siRNA后感染N-PRRSV;正常细胞对照:PAMs感染N-PRRSV;空白对照:PAMs中加入转染试剂后感染N-PRRSV。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图,对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本专利技术保护的范围。DMEM培养基、Opti-MEM培养基、RPMI-1640培养基以及siRNA转染试剂均购于LifeTech公司;胰蛋白酶和胎牛血清购于BI公司;siRNA序列及引物由上海Invitrogen公司合成;FastStartUniversalSYBRGreenMaster试剂购于Roche公司;HS酶,RNA提取试剂(RNAisoPlus),反转录试剂盒(PrimeScriptTMRTReagentKit)购于Takara公司;PAMs细胞为(猪肺泡巨噬细胞)分离于6周仔猪的肺脏组织;MARC-145细胞(恒河猴肾细胞MA-104的衍生细胞系),高致病性PRRSV毒株GD-HD(GenBankID:KP793736.1)和低致病性PRRSV毒株CH1a(GenBankID:AY032626.1)由西北本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种靶向RXRβ的siRNA,其特征在于,所述siRNA的序列如下:正义链:UCUGUCUUGUCCAUCCUCA;SEQ ID NO.1;反义链:UGAGGAUGGACAAGACAGA;SEQ ID NO.2。

【技术特征摘要】
1.一种靶向RXRβ的siRNA,其特征在于,所述siRNA的序列如下:正义链:UCUGUCUUGUCCAUCCUCA;SEQIDNO.1;反义链:UGAGGAUGGACAAGACAGA;SEQIDNO.2。2.根据权利要求1所述的一种靶向RXRβ的siRNA,其特征在于,所述siRNA在抑制宿主因子RXRβ表达中的应用。3.根据权利要求1所述的一...

【专利技术属性】
技术研发人员:李爽肖书奇张晓彬闫云欢
申请(专利权)人:西北农林科技大学
类型:发明
国别省市:陕西,61

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