一株白及内生真菌3-G2及其应用制造技术

本发明专利技术属于微生物应用技术领域，尤其涉及一株白及内生真菌3‑G2及其应用。一株白及内生真菌3‑G2，分类命名为黑毛壳霉菌(Chaetomium nigricolor)，于2018年06月06日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GDMCC NO.60383。本发明专利技术首次从药用植物白及内部分离筛选到一株内生真菌(Chaetomium nigricolor)3‑G2，该菌株对白及各方面生长具有较强的促生作用，为白及的产量、质量控制带来广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一株白及内生真菌3-G2及其应用
本专利技术属于微生物应用
，尤其涉及一株白及内生真菌3-G2及其应用。
技术介绍
现代农业对植物病害的防治过度依赖于化学农药的使用，大量化学农药的施放不仅对生态环境具有长期的破坏作用，也引起农产品品质下降，农药残留超标、病原菌的耐药性以及对人畜有害等诸多问题。寻找更为安全、有效的病害防治方法具有重大的意义，利用生物的方法来防治植物病害可以有效解决上述问题。白及Bletillastriata(Thunb.)Reichb.F.为兰科白及属多年生草本植物，名白鸡儿、羊角七、军求子、地螺丝等，白及是我国传统的中药材之一，其肉质肥厚且具黏性的块茎可入药，具有止血、保护粘膜、抗肿瘤、抗菌等功效，很少有植物多糖具有收敛的功效，因此素有“必涩而收，入肺止血，生肌治疮，外科最善”之称，为白及糖浆、白及冲剂、胃康灵、快胃片等中成药的主要组方原料。近年来，由于野生白及受到过度开发和自然栖息地的破坏，野生白及资源直线下降，白及药材的产量和质量得不到保证，现已被国家列为重点保护的野生药用植物之一，目前已经濒危。由于白及种子无胚乳，难以直播成苗，且组培苗种植成活率较低。这都使得进行白及大规模种植困难重重。目前，广西地区白及的人工栽培过程中，多采用野生白及分块茎种植，大苗种植三年收获。但种苗质量标准缺乏、品种与质量控制技术研发应用滞后，都是制约白及产业可持续发展的关键问题。因此，为此筛选出能促进白及生长的内生真菌具有重大意义，筛选进而开发利用白及内生真菌也是有效保证白及药材质量的措施之一。公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一株白及内生真菌3-G2，该菌株具有促进白及生长的作用，从而能有效促进白及生长、提高产量，更进一步提高白及的质量。本专利技术提供的技术方案如下：一株白及内生真菌3-G2，分类命名为黑毛壳霉菌(Chaetomiumnigricolor)，于2018年06月06日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GDMCCNO.60383。本专利技术还提供了所述的白及内生真菌3-G2在促进白及生长作用中的应用。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术首次从药用植物白及内部分离筛选到一株内生真菌黑毛壳霉菌(Chaetomiumnigricolor)3-G2，该菌株对白及各方面生长具有较强的促生作用，为白及的产量、质量控制带来广阔的应用前景。附图说明图1为本专利技术的白及内生真菌3-G2菌落形态图；图2为本专利技术的白及内生真菌3-G2菌株基于ITS序列的聚类图系统进化树；图3为部分共生菌苗生长状态；图4为本专利技术的白及内生真菌3-G2与白及无菌苗共生培养生长状态；图5为本专利技术的白及内生真菌3-G2菌株IAA合成能力检测；图6为本专利技术的白及内生真菌铁载体合成能力检测。保藏信息说明Chaetomiumnigricolor，其保藏编号为GDMCCNO.60383，保藏日期为2018年06月06日，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心(简称GDMCC，地址：中国广州市先烈中路100号省微生物所实验楼五楼，邮政编码：510070)。具体实施方式以下实施例以便更好的理解本专利技术，并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料，如无特殊说明，均为常规生化试剂商店购买得到的。下述实施例中的定量实验，均设置三次重复实验，结果取平均值。实施例1：菌株的分离、筛选与鉴定1.1菌株的分离供试材料：采自广西资源县和环江县地区的野生白及。培养基：1000ml马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基)，PDA培养基含马铃薯300g、葡萄糖20g、琼脂20g和氯霉素0.1g，培养基pH值为6.0±0.2。表面消毒：将长为6-8cm、宽为1-2cm新鲜健康的白及假鳞茎和根用流水冲洗30min以冲干净泥沙，然后将洗净的越南槐根用无菌水漂洗2次，风干表面水分，移到超净工作台，在无菌条件下，将越南槐根用体积浓度为75％乙醇浸泡1min，无菌水漂洗2次，次氯酸钠(有效氯1％)浸泡2min，无菌水洗3次，无菌吸水纸吸干表面备用。菌株的分离、纯化：表面消毒好的白及根和假鳞茎，无菌条件下，用无菌枝剪剪成0.5cm长的组织块，无菌转接至制备好的PDA培养基(含氯霉素)，28℃培养。取最后一次漂洗液涂布在PDA平板上，作为阴性对照。每天观测，待组织周围长出菌丝，挑取单一菌丝，接于无抗生素的PDA培养基。长出的菌落，如果外部形态不一致，继续挑取单一菌丝转接PDA培养基，直至平板上新长出的菌落的外部形态一致。初步依据菌落的颜色、形状和菌丝形状等对菌株进行编号，并拍照，记录其形态特征。于超净工作台上，用接种针挑取菌株的少量孢子或者菌丝(不易产孢的真菌)，置于25％的无菌甘油中，-80℃冷藏保存。1.2筛选采用菌苗共生法对供试白及内生真菌进行菌体促生活性的初筛。在超净工作台上，将白及无菌组培苗取出，用无菌水洗净根部带出的培养基，置于无菌滤纸上吸干水分，然后移入DE培养基中。每瓶接4株，呈“口”字居中排列，转接完成后放入培养室中培养15d，温度25-26℃，每天光照8-12h，光照强度为2000-3000Lux。待白及无菌苗于DE培养基上生长15d后，其生长状态基本稳定。此时，用打孔器从已活化的白及内生真菌母菌落边缘打取直径为0.6cm的菌饼作为接种材料，挑取菌饼接种到4株白及苗的中间，每个组培瓶内接种一块，重复3次，对照组接入无菌的PDA琼脂块。接种完成后封口，放于培养室中培养，温度25-26℃，每天光照8-12h，光照强度为2000-3000Lux。定期观察真菌及白及组培苗的生长状态。共生培养30天后，以菌生长速度适中且白及无菌苗正常生长为标准，挑选出能与白及无菌苗良好共生的真菌。如图3所示，部分真菌在DE培养基上生长速度较快，菌丝覆盖整个培养基表面和组培瓶瓶壁，大量菌丝缠绕植株叶片，被缠绕的叶片慢慢变黄，最后枯死；一些真菌生长速度虽然不快，只有一薄层菌丝覆盖在培养基表面，但是部分接种真菌处理的白及无菌苗叶片逐渐变黄，再者植株的生长状态明显不如对照组；一些真菌生长速度不快，且菌丝体不发达，菌丝长满整个培养基表面，植株根周围有菌丝包裹，叶片上没有菌丝缠绕，且白及无菌苗叶色正长，有明显的新根和新芽长出，新生芽和新生根生长状态良好。将初筛得到的菌株，以相同的方法，重新接种于DE培养基中，每瓶3株无菌苗，以接入相同大小的无菌琼脂块作为对照。相同的培养条件，共生培养60d后，分别取出对照苗和共生苗，洗净根部残留培养基，用滤纸吸干表面水分。测定其株高、新生根数、新生芽数、块茎直径大小。表1白及内生真菌菌株3-G2的促生效应菌株株高(cm)块茎直径(nm)新生芽数新生根数CK5.98±0.79BAb3.31±0.34Bb0.2±0.13Bb0.8±0.33Ab103-G23.28±0.54Aa4.761±0.32Aa1.1±0.10Aa2±0.36BAa注：不同的小写字母表示均值差的显著性水平为0.05，不同的大写字母表示均值差的显著性水平为0.01。如图4和表1所示，结果共得到5株本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株白及内生真菌3‑G2，其特征在于，分类命名为黑毛壳霉菌(Chaetomium nigricolor)，于2018年06月06日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GDMCC NO.60383。

【技术特征摘要】
1.一株白及内生真菌3-G2，其特征在于，分类命名为黑毛壳霉菌(Chaetomiumnigricolor)，于2018年06月06日保藏...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄荣韶，田佩雯，李良波，
申请(专利权)人：广西大学，
类型：发明
国别省市：广西,45