来自寨卡病毒E蛋白的中和表位及其应用制造技术

本发明专利技术公开来自寨卡病毒E蛋白的中和表位及其应用，表位肽是来源于寨卡病毒的E蛋白的片段，且至少包含E蛋白的第381‑395位和/或393‑420位氨基酸残基，且所述变体与其所源自的表位肽仅在于氨基酸残基的保守置换，且保留了其所源自的表位肽的生物学功能；所述E蛋白第381‑395位氨基酸残基序列为SEQ ID NO:1，所述E蛋白第393‑420位氨基酸残基序列为SEQ ID NO:2；本发明专利技术提供了针对寨卡病毒E蛋白的中和表位及应用。

【技术实现步骤摘要】
来自寨卡病毒E蛋白的中和表位及其应用
本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及来自寨卡病毒E蛋白的中和表位及其应用。
技术介绍
寨卡病毒(Zikavirus，ZIKV)是一种经蚊媒传播的黄病毒属病毒，于1947年首次从乌干达恒河猴体内分离得到。之后，ZIKV一直沉默数十年，从未发生过大流行，仅偶尔出现个别感染病例，症状轻微，表现为发热、头疼、肌痛、皮疹等类似普通流行性感冒症状。自2007年开始，ZIKV流行不断爆发，给流行地区带来了重大经济负担和严重的健康威胁。2015年底，ZIKV开始出现在巴西地区，之后迅速在全球播散，蔓延至近百个国家和地区。同时，流行地区出现了ZIKV引发的婴儿小头症以及成年人吉兰-巴雷综合征。在巴西，对于感染ZIKV的孕妇，超声检查显示42％的胎儿出现发育不全，最终可能会导致胎儿小头症、胎儿先天性畸形甚至胎儿死亡等严重的临床结果。此次ZIKV传播速度快、流行范围广且引发的症状严重，引发了全球范围的密切关注。除此之外，研究还发现ZIKV感染还会损伤男性生殖系统，可能会导致男性不育。总的来说，ZIKV感染在全球范围内引发了严重的公共卫生健康安全威胁。2016年2月，WHO将ZIKV感染及其所引发的中枢神经系统病变列为国际突发公共卫生事件，并呼吁全球共同努力，携手研发针对ZIKV感染的预防疫苗和治疗药物。WHO统计目前已有45个备选疫苗处于研发中，其中部分已进入临床试验阶段，但还没有ZIKV预防疫苗和治疗药物上市。目前，防蚊灭蚊等消灭传播途径的方法是预防ZIKV传播的主要措施，对症治疗是主要的治疗措施，但疗效并不尽人如意。因此，针对ZIKV有效的预防疫苗和治疗药物急需研发。ZIKV包膜蛋白E蛋白在病毒结合并进入宿主细胞过程中发挥着关键作用，因此E蛋白是ZIKV研发疫苗的重要靶点。E蛋白作为病毒的重要组成部分，具有很强的免疫原性，是激发机体针对病毒发生免疫反应的重要成分。因此，ZIKVE蛋白可能含有许多中和表位，刺激机体产生针对中和表位的中和性抗体。当前，以病毒中和性抗体为基础的的抗体治疗已经应用在许多疾病上。因此，发现ZIKV的中和表位及针对这些表位的有效中和性抗体对治疗ZIKV感染具有重大的意义。同时，在研发中还应该避免黄病毒属病毒可能会出现的抗体依赖性增强感染效应(Antibody-dependentenhancement,ADE)。
技术实现思路
针对上述技术问题，本专利技术提供了针对寨卡病毒E蛋白的中和表位及应用。一种分离的表位肽或其变体，所述表位肽是来源于寨卡病毒的E蛋白的片段，且至少包含E蛋白的第381-395位或393-420位氨基酸残基，且所述变体与其所源自的表位肽仅在于氨基酸残基的保守置换，且保留了其所源自的表位肽的生物学功能；所述E蛋白第381-395位氨基酸残基序列为SEQIDNO:1，所述E蛋白第393-420位氨基酸残基序列为SEQIDNO:2；SEQIDNO:1ProPheGlyAspSerTyrIleValIleGlyValGlyGluLysLys；SEQIDNO:2GluLysLysIleThrHisHisTrpHisArgSerGlySerThrIleGlyLysAlaPheGluAlaThrValArgGlyAlaArgArg。一种表位肽偶联物，包含本专利技术提供的表位肽或其变体和与之偶联的偶联部分。优选地，所述偶联部分为放射性核素、药物、毒素、细胞因子、酶、荧光素、载体、脂类和生物素中的一种或多种组合。优选地，所述偶联部分通过选自下述的偶联方法偶联至表位肽或其变体：MBS法、戊二醛法、活泼酯法、碳二亚胺法、卤代硝基苯法及亚氨酸酯法。一种蛋白疫苗，包括本专利技术所述的表位肽或其变体，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。优选地，所述表位肽可以是单独的或串联的、偶联至其他蛋白的或不偶联至其他蛋白的。优选地，所述蛋白疫苗为检测用组合物，其用于检测寨卡病毒抗体(特别是中和性抗体)的效价。优选地，所述蛋白疫苗为用于制备抗寨卡病毒的抗血清或抗体的组合物。一种多克隆抗体或其抗原结合片段，所述多克隆抗体能够特异性结合本专利技术所述的表位肽或其变体。优选地，所述多克隆抗体为中和性多克隆抗体。一种抗体偶联物，包含本专利技术提供的多克隆抗体或其抗原结合片段，以及与之偶联的偶联部分。优选地，所述偶联部分选自放射性核素、药物、毒素、细胞因子、酶、荧光素、载体、脂类和生物素中的一种或多种；优选地，所述偶联部分通过选自下述的偶联方法偶联至表位肽：MBS法、戊二醛法、活泼酯法、碳二亚胺法、卤代硝基苯法及亚氨酸酯法。本专利技术所述的表位肽或其变体、肽偶联物、蛋白疫苗、多克隆抗体或其抗原结合片段，在制备预防寨卡病毒感染的疫苗组合物中的应用。本专利技术所述的表位肽或其变体、肽偶联物、蛋白疫苗、多克隆抗体或其抗原结合片段，在制备预防和或治疗寨卡病毒感染的药物中的应用。优选地，所述多克隆抗体的使用量不小于12.59μg/mL；进一步优选地，能够特异性结合SEQIDNO:1的多克隆抗体的使用量不小于30.58μg/mL；能够特异性结合SEQIDNO:2的多克隆抗体的使用量不小于23.57μg/mL。一种用于检测寨卡病毒的ELISA试剂盒，包括：用于包被酶标记抗原的检测板、稀释液、洗涤液、显色液、终止液、酶标记抗原；所述酶标记抗原为本专利技术所述的表位肽或其变体。用于在受试者(优选哺乳动物，例如人)中治疗和/或预防ZIKV感染与所述感染相关的一种或多种疾病或病症的方法，其包括，给有此需要的受试者施用治疗和/预防有效量的本专利技术提供的表位肽、表位肽偶联物、多克隆抗体或其抗原结合片段、抗体偶联物。制备抗寨卡病毒的抗血清或抗体的方法，所述方法包括：1)给非人动物施用有效量的权利要求1的表位肽、或权利要求2的表位肽的偶联物，以在所述动物体内诱发抗寨卡病毒的免疫应答；2)从所述动物分离抗寨卡病毒的抗血清3)从所述抗血清中分离抗体。制备抗寨卡病毒的抗血清或抗体的方法，所述方法包括：1)从所述动物分离能够产生抗寨卡病毒抗体的B细胞；2)将所述B细胞与骨髓杂交瘤细胞融合，以产生能够分泌抗寨卡病毒抗体的杂交瘤细胞；3)分离和培养所述杂交瘤细胞；4)从所述杂交瘤细胞的培养物中分离抗寨卡病毒抗体。筛选本专利技术的中和表位的方法为：灭活ZIKV免疫兔子后获得ZIKV免疫后血清，用此血清对ZIKVE蛋白线性多肽库通过ELISA实验进行筛选，得到2个免疫显性表位(优势表位)肽。另外，通过生物信息学对2个优势表位的分析，发现了附近的另一个潜在中和表位。将2个优势表位肽和1个潜在中和表位肽偶联至柱材，从兔ZIKV免疫后血清中提取针对这3个表位肽的多克隆抗体。其中，1个优势表位肽和1个预测的潜在中和表位肽的兔多克隆抗体具有ZIKV中和活性，因此，这两个表位是来自ZIKVE蛋白的线性中和表位。综上所述，本专利技术提供了来自ZIKVE蛋白的2个线性中和性表位，以及获得线性中和性表位的方法；本专利技术提供了针对上述线性中和表位的中和性抗体，以及获得中和性抗体的方法；本专利技术提供了中和性抗体在用于治疗ZIKV感染中的用途；本专利技术还提供了能够特异性结合本专利技术表位肽的多克隆抗体的有效剂量。与现有技术相比，本专利技术的技术方案具有以下优点：本专利技术提供了来自ZIKVE蛋白的中和表位及针对本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的表位肽或其变体，其特征在于，所述表位肽是来源于寨卡病毒的E蛋白的片段，且至少包含E蛋白的第381‑395位和/或393‑420位氨基酸残基，且所述变体与其所源自的表位肽仅在于氨基酸残基的保守置换，且保留了其所源自的表位肽的生物学功能；所述E蛋白第381‑395位氨基酸残基序列为SEQ ID NO:1，所述E蛋白第393‑420位氨基酸残基序列为SEQ ID NO:2。

【技术特征摘要】
1.一种分离的表位肽或其变体，其特征在于，所述表位肽是来源于寨卡病毒的E蛋白的片段，且至少包含E蛋白的第381-395位和/或393-420位氨基酸残基，且所述变体与其所源自的表位肽仅在于氨基酸残基的保守置换，且保留了其所源自的表位肽的生物学功能；所述E蛋白第381-395位氨基酸残基序列为SEQIDNO:1，所述E蛋白第393-420位氨基酸残基序列为SEQIDNO:2。2.一种表位肽偶联物，其特征在于，包含权利要求1所述的表位肽和与之偶联的偶联部分。3.如权利要求2所述的表位肽偶联物，其特征在于，所述偶联部分为放射性核素、药物、毒素、细胞因子、酶、荧光素、载体、脂类和生物素中的一种或多种组合。4.一种蛋白疫苗，其特征在于，包括权利要求1所述的表位肽或其变体，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。5.一种多克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述多克隆抗体能够特异性结合权利要求1所述的表位肽或其变体。6.权利要求1所述的表位肽或其变体、权利要求2或3所述的肽偶联物、权利要求4所述的蛋白疫苗、权利要求5所述的多克隆抗体或其抗原结合片段，在制备预防寨卡病毒感染的疫苗组合物中的应用。7.权利要求1所述的表位肽或其变体、权利要求2或3所述的肽偶联物、权利要求4所述的蛋白疫苗、权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆路，姜世勃，汪小欢，邹鹏，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海,31