一种降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法技术

本发明专利技术公开了一种降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法，包括：母株处理：外植体采集前7‑40天，向室内盆栽月季母株喷施杀菌剂和杀虫剂；从处理后的母株上取茎段为外植体；外植体消毒：将外植体清洗后分别用浓度为0.05～0.1％多菌灵、50‑150mg/L链霉素和酒精处理后，再用氯化汞进行消毒处理。本发明专利技术通过采用适当的杀菌剂、杀虫剂对室内盆栽月季母株进行消毒，再对外植体进行接种前消毒处理，通过双重处理可有效的提高发芽率，降低污染率，污染率可低至10％，发芽率可高达85％以上，污染率低，发芽效果明显且操作简便，苗木健壮，生长状况良好。

【技术实现步骤摘要】
一种降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法
本专利技术涉及组织培养，尤其涉及一种降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法。
技术介绍
月季(RosachinensisJacq.)，别名月月红、斗春红等，多为蔷薇科蔷薇属常绿或半常绿直立灌木，每年可多次开花。月季是我国十大名花之一，被誉为“花中皇后”。月季类型多样，品种繁多，花型各异，色彩丰富，香气浓淡相宜，而且分布极其广泛，适应性强。月季的常规繁殖途径是扦插或嫁接，月季组织培养技术的发展可以快速大量繁殖的新品种，加速品种更新换代，促进月季产业的发展。由于目前很多月季优良品种为温室内盆栽，而温室内由于温度高、湿度大、通风不良等原因，很容易发生菌类污染和病虫害的发生，月季栽培过程中尤其容易发生病菌感染和害虫危害，一旦感病，便全株受到侵染，传统的繁殖方法，如扦插、嫁接等，即使苗木成活也很难改变携带有病菌的现象，因此，成活苗的品质也受到一定影响。而组织培养最重要的一个环节之一就是对外植体的消毒灭菌，成活的组培苗均为无菌苗，再加上组织培养可以给苗木提供适宜的温度、湿度、光照和植物所需的激素及碳水化合物，并进行快速大量繁殖，在保证苗的品质的同时还有较高的繁殖速度。对于月季的外植体组培：周庆华(2011)等用不同激素的情况下对外植体的发芽率影响进行了研究和报道；王正加等(2003)报道了月季组织培养过程中的影响因素，重点介绍了植物生长调节剂、外植体、培养基和培养条件等对月季试管苗生长的影响。刘会超等(2007)从月季腋芽萌发、器官发生、体细胞胚胎发生三个方面综述了品种、外植体、基本培养基成分、激素浓度及配比、培养条件及不同的外植体处理方法等影响因素对月季组培体系的影响进行报道。此外，还有一些月季组培的简单报道。综上所述，目前对于月季的组织培养方法的研究报道较多，但专门开展降低室内盆栽月季污染率的研究较少。
技术实现思路
技术问题：为解决月季组培易污染的问题，本专利技术提供了一种降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法。技术方案：一种降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法，包括：(1)母株处理：外植体采集前7-40天，向室内盆栽月季母株喷施杀菌剂和杀虫剂；(2)从处理后的母株上取茎段为外植体；(3)外植体消毒：将外植体清洗后分别用浓度为0.05～0.1％多菌灵、50-150mg/L链霉素和酒精处理后，再用氯化汞进行消毒处理。步骤(1)中，所述杀菌剂为多菌灵，所述杀虫剂为阿维菌素、吡虫啉中的至少一种。具体的，步骤(1)中，于外植体采集前7-10天，喷施一次多菌灵；于外植体采集前30-40天，每隔7-10天喷施一次阿维菌素，于外植体采集前7-10天，喷施一次吡虫啉。进一步，喷施50％的多菌灵的1000-1500倍液，每株月季喷施100-150ml，喷施2％的阿维菌素的1500-2000倍液，每株月季喷施100-150ml，喷施10％的吡虫啉的4000-6000倍液，每株月季喷施100-150ml。母株处理结束后，选择当年生健壮饱满的枝条上新萌出的的幼嫩茎段为外植体，进行消毒处理，消毒处理时，依次用多菌灵、链霉素、酒精和氯化汞进行消毒。步骤(3)中，所述多菌灵的浓度优选为0.05-0.08％，所述链霉素的浓度优选为50-100mg/L。所述多菌灵的处理时间为10-15min，所述链霉素的处理时间为10-15min。所述酒精的质量分数为70-75％，处理时间为30-60s。所述氯化汞的质量分数为0.1-0.2％，消毒时间为2-8min，优选为3-5min。有益效果：本专利技术通过采用适当的杀菌剂、杀虫剂对室内盆栽月季母株进行消毒，再对外植体进行接种前消毒处理，通过双重处理可有效的提高发芽率，降低污染率，且专利技术人发现，仅采用单一的母株处理或者外植体消毒处理均无法有效控制污染率，单一的母株处理，由于处理母株生长环境无法做到无菌，所以处理后的材料不可以直接接种，单一的外植体消毒处理，由于外植体带菌严重，污染率高达60％-80％。除此之外，在对外植体进行接种前消毒处理时，通过常规的酒精和氯化汞消毒的效果较差，因此，专利技术人对其进行改进，采用多菌灵、链霉素、酒精和氯化汞进行消毒可提升消毒效果。本专利技术的污染率可低至10％，发芽率可高达85％以上，污染率低，发芽效果明显且操作简便，苗木健壮，生长状况良好。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐明本专利技术，应理解这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围，在阅读了本专利技术之后，本领域技术人员对本专利技术的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。本实施例所用部分药剂如下：50％的多菌灵：50％多菌灵可湿性粉剂，活性成分多菌灵的质量分数为50％；2％的阿维菌素：2％阿维菌素乳油，活性成分阿维菌素的质量分数为2％；10％的吡虫啉：10％吡虫啉可湿性粉剂，活性成分吡虫啉的质量分数为10％；文中如无特殊说明，配制各药剂时均采用水为溶剂。实施例11、母株的处理室内盆栽母株很容易感染黑斑病、灰霉病等，盆栽过程中一旦发现发病必须及时利用药剂和人工等方法处理；为了降低外植体的污染率，即使未见明显病症，仍需在外植体采集前一周喷洒50％的多菌灵的1000倍液(抑菌剂),每株月季母株每次喷洒100ml药液，并剪除病斑、萎蔫叶片及花蕾，同时放置在较强的光照条件(光照强度20000-100000lx)下晒苗。危害月季的害虫种类较多，常见的主要有：蚜虫、蓟马、红蜘蛛等。温室内一年四季均可发生，尤其在春季发生严重，而春季又是组织培养最适宜的时期。害虫危害植物的同时，最重要的影响是传播病害，因为必须对害虫进行处理，再取组培外植体。处理方法为取材前一个月每隔10d喷洒一次2％的阿维菌素的1500倍液，每株喷洒100ml，取材前7d左右，喷洒1次10％的吡虫啉4000-6000倍液，每株喷洒100ml，能有效的预防红蜘蛛、蚜虫等害虫。2、外植体的选取于药剂处理月季室内盆栽植株后，选择当年生健壮饱满的枝条上新萌出的幼嫩茎段，放在清水中，防止失水干枯，并及时带回实验室，当天采集的材料必须当天处理。3、外植体的预处理及清洗将外植体的叶片和表皮上的刺去除，注意皮刺去除时不能伤及茎段表皮。然后将茎段剪成2-3cm小段，每段至少保留2个腋芽，用洗衣液清洗干净后，放置于烧杯中，用纱布封住烧杯杯口，放置于自来水下，用流水冲洗2h。4、外植体消毒将清洗好的茎段，用滤纸吸干，将其修剪成1-1.5cm左右的单芽茎段。在超净工作台上，将其转入无菌空瓶，放在50％多菌灵可湿性粉剂的800-1000倍液中15min，用无菌水冲洗2遍，放入50-150mg/L链霉素溶液中浸泡15min，取出后用无菌水冲洗3遍；多菌灵和链霉素的组合采用单因素试验设计并设置对照，试验设计见表1。然后将链霉素处理完的茎段放入75％(质量分数)的酒精中消毒30s，然后分成3组分别放入质量分数0.1％氯化汞中消毒3、5、8min，无菌水冲洗5遍。表1多菌灵与链霉素的组合设计序号50％的多菌灵(倍液)链霉素(mg/L)接种数100602800506038001006048001506051000506061000100607100015060结果统计见表2。表2外植体消毒结果统计从表中数据分析得出，使用多菌灵和链霉素处理外植体能有效的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法，其特征在于，包括：(1)母株处理：外植体采集前7‑40天，向室内盆栽月季母株喷施杀菌剂和杀虫剂；(2)从处理后的母株上取茎段为外植体；(3)外植体消毒：将外植体清洗后分别用浓度为0.05～0.1％多菌灵、50‑150mg/L链霉素和酒精处理后，再用氯化汞进行消毒处理。

【技术特征摘要】
1.一种降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法，其特征在于，包括：(1)母株处理：外植体采集前7-40天，向室内盆栽月季母株喷施杀菌剂和杀虫剂；(2)从处理后的母株上取茎段为外植体；(3)外植体消毒：将外植体清洗后分别用浓度为0.05～0.1％多菌灵、50-150mg/L链霉素和酒精处理后，再用氯化汞进行消毒处理。2.根据权利要求1所述的降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述杀菌剂为多菌灵，所述杀虫剂为阿维菌素、吡虫啉中的至少一种。3.根据权利要求2所述的降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法，其特征在于，步骤(1)中，于外植体采集前7-10天，喷施一次多菌灵；于外植体采集前30-40天，每隔7-10天喷施一次阿维菌素，于外植体采集前7-10天，喷施一次吡虫啉。4.根据权利要求3所述的降低室内盆栽月季组培外植体污染的方法，其特征在于，步骤(1)中，喷施50％的多菌灵的1000-1500倍液，每株月季喷施100-150ml，喷施2％的阿维菌素的1500...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓桠，王红梅，刘春风，
申请(专利权)人：江苏农林职业技术学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32