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一种提高灵芝中灵芝三萜含量的方法技术

技术编号:20863647 阅读:31 留言:0更新日期:2019-04-17 08:52
本发明专利技术涉及灵芝栽培领域,具体是在指一种提高灵芝中灵芝三萜含量的方法,包括菌种活化、原种制作、载培种制作、段木发菌、出芝管理,得到成熟的灵芝子实体,将成熟的灵芝子实体置于氧浓度为25‑85%的高浓度氧环境中保持1‑5天。本发明专利技术提供一种提高灵芝中灵芝三萜含量的方法,在灵芝子实体成熟期采用高浓度氧来诱导灵芝产生更多的灵芝三萜,工艺简单,适合大规模应用。所使用的氧安全性高、容易制取并且价格低廉,可显著提高灵芝子实体中灵芝三萜的含量。

【技术实现步骤摘要】
一种提高灵芝中灵芝三萜含量的方法
本专利技术涉及灵芝栽培领域,具体是在指一种提高灵芝中灵芝三萜含量的方法。
技术介绍
灵芝(Ganodermalucidun)是我国传统名贵中药,早在东汉时期就被《神农本草经》列为上品,是滋补强壮、扶正培本,有久服轻身延年之功效的珍贵药品。现代药理学研究表明灵芝三萜类化合物是灵芝的主要活性成分,目前从子实体、菌丝体和发酵液中分离获得灵芝酸A、灵芝酸B、灵芝烯酸B、灵芝酸C等150多种灵芝三萜单体化合物,基本结构为羊毛甾烷四环三萜,具有杀灭肿瘤细胞、抗氧化、降血糖、保护肝脏、抗HIV-1病毒等多种生物学活性。灵芝三萜是通过甲羟戊酸-异戊烯途径合成,乙酰辅酶A经过3-羟基3-甲基戊二酰CoA合成酶(HMGS)、3-羟基3-甲基戊二酰CoA还原酶(HMGR)、法尼基二磷酸合成酶(FPS)等酶的催化形成法尼基二磷酸,再经角鲨烯合成酶(SQS)催化生成2,3-氧化角鲨烯,在环氧角鲨烯环化酶(OSC)的催化下形成羊毛甾醇,再通过侧链修饰产生不同结构的灵芝三萜单体化合物。为了提高三萜类化合物的含量,专利CN105505800公开了“一种灵芝酸高产工程菌株kmust-FPS”,选用灵芝强启动子P-gpd过表达编码法尼基焦磷酸合成酶FPS基因,得到高产灵芝酸灵芝工程菌;专利CN101353689公开了“一种提高灵芝发酵液中灵芝三萜产量的方法”,通过补加棕榈酸1.5-3.0g/L,提高灵芝液体发酵生产灵芝三萜的含量;专利CN101892282公开了“一种利用稀土元素提高灵芝三萜产量的液体发酵方法”,在灵芝液体发酵培养基中补加稀土元素镨Pr3+、钕Nd3+或镧La3+,提高灵芝三萜的产量;专利CN104017852公开了“一种提高灵芝液体深层发酵菌丝体中灵芝三萜含量的方法”,在发酵培养过程中,添加1vol%-5vol%的油酸,提高灵芝菌丝体中灵芝三萜的含量;专利CN105506049公开了“一种提高灵芝菌丝体液体发酵的胞内灵芝三萜含量的方法”,在灵芝液体发酵扩大培养阶段,按照质量比例0.01-5%向培养液中添加木材降解物,培养时间1-6天,提高灵芝菌丝体液体发酵的胞内灵芝三萜含量,以上专利技术都是针对灵芝液体发酵过程中提高灵芝菌丝体合成灵芝三萜的水平。在灵芝固体栽培方面,专利CN106431698公开了“提高灵芝三萜含量的培养基”,在灵芝栽培培养基中添加中药成分,包括胡荽25~45份、浮萍20~40份、芦根15~35份、椿皮10~20份、山豆根8~16份、海桐皮6~14份,能够显著提高灵芝三萜含量。灵芝三萜作为灵芝中的关键活性成分,提高其生物合成及在灵芝子实体中的含量已成为灵芝研究的重要内容,但目前的研究多是针对灵芝液体发酵诱导物的添加、培养条件的优化及工程菌的构建,而液体发酵需要专门的装备、工艺复杂、无法获得灵芝子实体;在灵芝栽培方面主要也是通过在培养基质中添加中药等刺激物来提高三萜的含量,而且栽培时间较长,容易受到温度、湿度、光照等栽培环境条件的影响。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足,而提供一种提高灵芝中灵芝三萜含量的方法。本专利技术所采取的技术方案如下:一种提高灵芝中灵芝三萜含量的方法,将菌种经过菌种活化、原种制作、载培种制作、段木发菌、出芝管理,培养栽培得到成熟的灵芝子实体,将灵芝子实体置于氧浓度为25-85%的高浓度氧环境中保持1-5天。本专利技术采用中国普通微生物菌种保藏管理委员会保藏的灵芝属Ganodermalucidum菌种,菌株保藏号为CGMCC5.616。菌种的有关性质可以参阅中国普通微生物菌种保藏管理委员会(CGMCC)菌种目录。通常情况下,空气中的氧浓度为21%,本专利技术将成熟期的灵芝子实体置于氧浓度为25-85%的高浓度氧环境中保持1-5天,通过高浓度氧的作用,可以诱导灵芝子实体合成灵芝三萜,显著提高灵芝三萜的含量。优选地,将成熟期的灵芝子实体采用40-60%的高浓度氧处理2-4天。更优选地:将成熟期的灵芝子实体采用60%的高浓度氧处理3天。通过本专利技术的技术方案与现有技术相比,能够取得下列有益效果:本专利技术提供一种提高灵芝中灵芝三萜含量的方法,在灵芝子实体成熟期采用高浓度氧来诱导灵芝产生更多的灵芝三萜,工艺简单,适合大规模应用。所使用的氧安全性高、容易制取并且价格低廉,可显著提高灵芝子实体中灵芝三萜的含量。具体实施方式实施例1将成熟期的灵芝子实体,置于容器中,容器内通入浓度为40%的氧气,保持容器中氧气含量为40%,处理3天,取处理后的灵芝子实体测定,每克新鲜灵芝子实体中灵芝三萜的含量为4.03mg,灵芝酸A的含量为1.12mg,灵芝烯酸B含量为0.18mg、灵芝酸C2含量为0.17mg。实施例2将成熟期的灵芝子实体,置于容器中,容器内通入浓度为60%的氧气,保持容器中氧气含量为60%,处理3天,取处理后的灵芝子实体测定,每克新鲜灵芝子实体中灵芝三萜的含量为5.62mg,灵芝酸A的含量为1.77mg,灵芝烯酸B含量为0.41mg、灵芝酸C2含量为0.21mg。实施例3将成熟期的灵芝子实体,置于容器中,容器内通入浓度为80%的氧气,保持容器中氧气含量为80%,处理3天,取处理后的灵芝子实体测定,每克新鲜灵芝子实体中灵芝三萜的含量为3.89mg,灵芝酸A的含量为1.09mg,灵芝烯酸B含量为0.33mg、灵芝酸C2含量为0.16mg。实施例4将成熟期的灵芝子实体,置于容器中,容器内通入浓度为60%的氧气,保持容器中氧气含量为60%,处理4天,取处理后的灵芝子实体测定,每克新鲜灵芝子实体中灵芝三萜的含量为4.09mg,灵芝酸A的含量为1.22mg,灵芝烯酸B含量为0.22mg、灵芝酸C2含量为0.16mg。实施例5将成熟期的灵芝子实体,置于容器中,容器内通入浓度为60%的氧气,保持容器中氧气含量为60%,处理5天,取处理后的灵芝子实体测定,每克新鲜灵芝子实体中灵芝三萜的含量为2.51mg,灵芝酸A的含量为0.59mg,灵芝烯酸B含量为0.27mg、灵芝酸C2含量为0.15mg。对比例1将成熟期的灵芝子实体直接置于空气中放置3天,取样测定,每克新鲜灵芝子实体中灵芝三萜的含量为2.02mg,灵芝酸A的含量为0.64mg,灵芝烯酸B含量为0.16mg、灵芝酸C2含量为0.09mg。对比例2将成熟期的灵芝子实体,置于容器中,容器内通入压缩空气,保持容器中氧气含量为21%,处理3天,取处理后的灵芝子实体测定,每克新鲜灵芝子实体中灵芝三萜的含量为2.41mg,灵芝酸A的含量为0.64mg,灵芝烯酸B含量为0.16mg、灵芝酸C2含量为0.14mg。由上述实施例和对比例的对比分析,可以得出以下结论:①高浓度氧气处理灵芝子实体可以显著提高灵芝三萜的含量;②氧气浓度和处理时间也会影响灵芝三萜的含量,最优为氧气含量为60%以及处理3天,相比在空气中放置的对比例1,灵芝三萜含量提高178.2%,效果显著,而再去提高氧气浓度或者增加处理时间则会降低。检测实施例和对比例中灵芝三萜合成关键酶基因的表达情况,结果见表2。由表2可见,适量的高浓度氧气的处理会使灵芝中关键酶基因的表达量提高,故可以提高合成的灵芝三萜含量。60%浓度的氧气处理3天,3-羟基3-甲基戊二酰CoA合成酶(HM本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种提高灵芝中灵芝三萜含量的方法,其特征在于包括以下步骤:采用中国普通微生物菌种保藏管理委员会保藏的灵芝属Ganoderma lucidum菌种,菌株保藏号为CGMCC5.616,将菌种培养栽培得到成熟的灵芝子实体,将灵芝子实体置于氧浓度为25‑85%的高浓度氧环境中保持1‑5天。

【技术特征摘要】
1.一种提高灵芝中灵芝三萜含量的方法,其特征在于包括以下步骤:采用中国普通微生物菌种保藏管理委员会保藏的灵芝属Ganodermalucidum菌种,菌株保藏号为CGMCC5.616,将菌种培养栽培得到成熟的灵芝子实体,将灵芝子实体置于氧浓度为25-85%的高浓度...

【专利技术属性】
技术研发人员:杨海龙何杜鹃
申请(专利权)人:温州大学
类型:发明
国别省市:浙江,33

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