用于快速检测罗非鱼湖病毒的RPA检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了用于快速检测罗非鱼湖病毒的RPA检测试剂盒，包括：一侧设有至少一个试纸条储存部件和RPA反应部件，另一侧设有至少一个裂解液反应管、RPA‑LFD反应管和取样针套件，中部设有反应试管架和血液收集装置，底部设有置冰容器；上述试剂盒用于检测罗非鱼湖病毒快速、便捷且可靠。

RPA Kit for Rapid Detection of Tilapia Lake Virus

The utility model discloses a RPA detection kit for rapid detection of Tilapia Lake virus, which comprises at least one test strip storage component and RPA reaction component on one side, at least one pyrolysis solution reaction tube, RPA LFD reaction tube and sampling needle kit on the other side, a reaction tube rack and a blood collection device in the middle, and an ice container at the bottom. Detection of tilapia Lake virus is rapid, convenient and reliable.

【技术实现步骤摘要】
用于快速检测罗非鱼湖病毒的RPA检测试剂盒
本技术涉及检测试剂盒，具体涉及用于快速检测罗非鱼湖病毒的RPA检测试剂盒。
技术介绍
罗非鱼是全球重要的淡水养殖经济鱼种之一，罗非鱼湖病毒病又称为罗非鱼合胞体肝炎(syncyticalhepatitisoftilapia，SHT)，病原为罗非鱼湖病毒(TilapiaLakeVirus，TiLV)，是近年新发现的RNA病毒，该病毒突变性大，传染性强，致死率高，目前在病毒的细胞培养、组织病理学、PCR、原位杂交等检测技术方面已有研究，并建立了相应的检测方法。但是传统方法大多数特异性差、敏感性低、操作不方便且需要精密的仪器、耗时长，在兽医临床现场检测方面非常不方便，建立一种快速简便快捷的检测方法对病原更好的诊断和检测有重要意义。重组聚合酶扩增技术(RecombinasePolymeraseAmplification，RPA)是一种新型的核酸扩增方式，改进了传统的PCR扩增技术，它在常温下利用重组酶和单链结合蛋白协同实现引物与模板的特异结合，代替了传统PCR热循环中的变性和复性的过程，实现恒温体外核酸扩增，在37℃恒温条件下10min之内反应即可完成，结合侧向流动免疫层析技术(LFD)可得到肉眼可判读的结果，检测方便，便于携带。该技术利用羧基荧光素(FAM)标记的特异探针与生物素(Biotin)标记的核酸扩增产物特异性结合，在试纸条上与胶体金标记的抗FAM的抗体结合，就会形成三元复合物，利用检测液的扩散，当三元复合物被生物素配体捕获，即形成带有颜色的检测线，目前还没有将上述RPA技术用于罗非鱼湖病毒检测的装置。
技术实现思路
为克服现有技术的上述缺陷，本技术的目的在于提供一种用于快速检测罗非鱼湖病毒的RPA检测试剂盒，快速、便捷且可靠。本技术的上述目的通过以下技术方案实现：用于快速检测罗非鱼湖病毒的RPA检测试剂盒，包括：一侧设有至少一个试纸条储存部件和RPA反应部件，另一侧设有至少一个裂解液反应管、RPA-LFD反应管和取样针套件，中部设有反应试管架和血液收集装置，底部设有置冰容器；其中，所述取样针套件包括针筒和针头，且所述针筒和针头顶端均带有螺纹；所述裂解液反应管包括裂解液反应管体和与所述裂解液反应管体顶部可螺纹连接的反应管盖；所述裂解液反应管体底部为带螺纹的橡胶软底，与所述针头螺旋连接，且所述针头可戳破所述橡胶软底；所述裂解液反应管体顶部带有螺纹，与所述针筒螺旋连接。进一步地，所述试纸条储存部件内置有若干个长条状且中间带有侧向流动免疫层析试纸的试纸条。进一步地，所述RPA反应部件包括RPA反应液管、阳性对照管和阴性对照管，其中，所述RPA反应液管内装有正向引物、反向引物、酶、水化缓冲液(Rehydrationbuffer)、醋酸镁、双蒸水(ddH2O)和专用探针；所述阳性对照管内装有阳性对照物为罗非鱼湖病毒质粒(TilapiaLakeVirus，简称TiLV质粒)；所述阴性对照管内装有阴性对照物无菌ddH2O。进一步地，所述RPA检测试剂盒还包括盒盖和包装盒。与现有技术相比，本技术具有如下有益效果：(1)反应时间短，速度更快，效率更高。(2)敏感性强，特异性高，适用于早期检测。(3)37℃恒温即可反应，设备依赖性弱，携带方便。(4)利用针筒装置实现取样、反应、检测一体化，避免污染使结果更准确，操作更轻便快捷。(5)本试剂盒底部留空，可以放置冰袋，便于样品及时保存。附图说明图1为本技术的结构示意图；图2为本技术中试纸条的结构示意图；图3为本技术中反应试管架的结构示意图；图4为本技术中血液收集装置的结构示意图；图5为本技术中针头的结构示意图；图6为本技术中裂解液反应管的结构示意图；图7为本技术中RPA-LFD反应管的结构示意图；其中：1-盒盖，2-试纸条，3-RPA反应液管，4-阳性对照管，5-阴性对照管，6-置冰容器，7-反应试管架，8-血液收集装置，9-针头，10-裂解液反应管，11-RPA-LFD反应管，12-包装盒，13-裂解液反应管体，14裂解液反应管盖。具体实施方式下述结合附图对本技术进一步描述。参见附图1-7，用于快速检测罗非鱼湖病毒的RPA检测试剂盒，包括：一侧设有两个试纸条储存部件和置于两个试纸条储存部件中间的RPA反应部件，其中，RPA反应部件包括RPA反应液管3、阳性对照管4和阴性对照管5，RPA反应液管3内装有正向引物、反向引物、酶、Rehydrationbuffer、醋酸镁、ddH2O和专用探针，阳性对照管4内装有阳性对照物为TiLV质粒，阴性对照管5内装有阴性对照物无菌ddH2O。另一侧设有若干个裂解液反应管10、RPA-LFD反应管和取样针套件，取样针套件包括针筒和针头9，且针筒和针头9顶端均带有螺纹；裂解液反应管10包括裂解液反应管体13和与裂解液反应管体13顶部可螺纹连接的反应管盖14，裂解液反应管体13底部为带螺纹的橡胶软底，与针头9螺旋连接，且针头9可戳破橡胶软底取液，裂解液反应管体13顶部带有螺纹，与针筒螺旋连接。中部设有反应试管架7和血液收集装置8，底部设有置冰容器6用来低温储存，试纸条储存部件内置有若干个长条状且中间带有侧向流动免疫层析试纸的试纸条2；此外还包括盒盖1和包装盒13。用于快速检测罗非鱼湖病毒的RPA检测试剂盒使用时，先将针头9插入罗非鱼病变组织内吸取适量血液到裂解液反应管10中，反复吸吹充分混合振荡，获得裂解产物即模板，先加入148ulRPA反应液至RPA-LFD反应管11中再加入2ul裂解产物，37℃加热10min，再将试纸条2的反应区放入RPA-LFD反应管11中插入液面下，5min之后即可观察结果。当试纸条出现两条条带，一条位于质控区内，一条位于检测区，则结果为阳性，表明样本中含有TiLV病毒；当试纸条只有质控区出现一条条带，检测区没有条带，则结果是阴性，表明样本中不含有TiLV病毒。本技术的结构中，裂解液反应管10底部和顶部均带有螺纹，且分别与针头和针筒连接，裂解液反应管10底部为橡胶软底，连接针头9时可以戳破软底吸入样品，裂解液反应管10内存放有裂解液，通过针头取样之后直接在裂解液反应管10内反应，制得RPA反应模板，并且通过针筒装置可直接将所制得的模板打入RPA-LFD反应管11中，与RPA反应液反应后可直接将试纸条2插入检测，以此判定所测样品是否含有TiLV病毒，反应过程连接紧凑，操作方便快捷，检测结果可靠，试剂盒实用性强。本技术不局限于上述具体实施方式公开的内容，凡是不脱离本技术所公开的精神下完成的等效或修改，都落入本技术保护的范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于快速检测罗非鱼湖病毒的RPA检测试剂盒，其特征在于，包括：一侧设有至少一个试纸条储存部件和RPA反应部件，另一侧设有至少一个裂解液反应管(10)、RPA‑LFD反应管和取样针套件，中部设有反应试管架(7)和血液收集装置(8)，底部设有置冰容器(6)；其中，所述取样针套件包括针筒和针头(9)，且所述针筒和针头顶端均带有螺纹；所述裂解液反应管(10)包括裂解液反应管体(13)和与所述裂解液反应管体(13)顶部可螺纹连接的反应管盖(14)；所述裂解液反应管体(13)底部为带螺纹的橡胶软底，与所述针头(9)螺旋连接，且所述针头(9)可戳破所述橡胶软底；所述裂解液反应管体(13)顶部带有螺纹，与所述针筒螺旋连接。

【技术特征摘要】
1.用于快速检测罗非鱼湖病毒的RPA检测试剂盒，其特征在于，包括：一侧设有至少一个试纸条储存部件和RPA反应部件，另一侧设有至少一个裂解液反应管(10)、RPA-LFD反应管和取样针套件，中部设有反应试管架(7)和血液收集装置(8)，底部设有置冰容器(6)；其中，所述取样针套件包括针筒和针头(9)，且所述针筒和针头顶端均带有螺纹；所述裂解液反应管(10)包括裂解液反应管体(13)和与所述裂解液反应管体(13)顶部可螺纹连接的反应管盖(14)；所述裂解液反应管体(13)底部为带螺纹的橡胶软底，与所述针头(9)螺旋连接，且所述针头(9)可戳破所述橡胶软底；所述裂解液反应管体(13)顶部带有螺纹，与所述针筒螺旋连接。2.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：王浩，许烨琦，汝高盟，唐睿哲，郭亚男，孙萌，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：新型
国别省市：上海,31