一株猪丹毒丝菌及其应用制造技术

技术编号:20857413 阅读:22 留言:0更新日期:2019-04-13 11:17
本发明专利技术公开了一株1a型猪丹毒丝菌及其应用。该猪丹毒丝菌的保藏编号为CGMCC NO:16808,记名为猪丹毒丝菌HN1573。该菌株分离自发生急性败血症死亡的育肥猪的心血,在TSA固体培养基上分离时无其它细菌生长,只有猪丹毒丝菌生长,在TSB液体培养基中增殖滴度高,达10

【技术实现步骤摘要】
一株猪丹毒丝菌及其应用
:本专利技术属于兽医生物制品
,具体涉及一株猪丹毒丝菌及其应用。
技术介绍
:猪丹毒丝菌(Erysipelothrixrhusiopathiae)是一种小型、细长、直杆状的革兰氏阳性细菌,可引起猪和许多其他动物出现丹毒。猪丹毒通常表现为急性或亚急性败血症和慢性增殖性病变。心脏是主要的靶器官,通常表现为明显的损伤。猪丹毒这种疾病发生在世界各地,在欧洲、亚洲、澳大利亚和美洲具有重要的经济意义。猪丹毒丝菌也是人类的一种人畜共患病病原体,是皮肤病-类丹毒的病因。减毒活疫苗和细菌早就被用来控制猪丹毒。然而,弱毒疫苗的失败经常发生,注射后常引起剧烈的反应或死亡。猪丹毒的高发仍然是世界范围内猪肉产业关注的问题。此外,疫苗接种产生的抗体很难与野生株丹毒丝菌感染引起的抗体区分开来。因此,需要开发新的、更有效的疫苗。丹毒丝菌血清型众多,迄今已确认的有26个血清型(即1a、1b、2-24、N),不同血清型丹毒丝菌菌株的毒力存在明显差异,1a、1b型的致病力最强,源自败血症病例的菌株多为1a型,源自疹块型病例的菌株多为2型。由于1a型多引起中大猪的急性败血死亡,所以一旦发生此病将很难控制,从而给养殖户造成重大经济财产损失,给我国养猪业的发展带来巨大的困难。在先研发的很多药物对猪丹毒丝菌病都能起到很好的治疗效果,但是随着养殖规模发展,大量抗菌药物的使用,休药期药物的不合理使用,都造成病原菌的耐药现象越来越严重,越来越不利于临床疾病的预防和治疗。因此亟需研发一种新的具有较好免疫原性的菌株制备的疫苗。
技术实现思路
:针对目前猪丹毒病治疗存在的问题,本专利技术提供一株1a型猪丹毒菌及其应用。本专利技术解决其技术问题所采用的方案是:一种猪丹毒丝菌,所述的猪丹毒丝菌为猪丹毒丝菌(Erysipelothrixrhusiopathiae)HN1573,保藏编号:CGMCCNO:16808,保藏日期:2018年11月09日,保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号。上述的一种猪丹毒丝菌,所述猪丹毒丝菌为1a型猪丹毒丝菌。本专利技术还提供一种猪丹毒丝菌在制备防控猪丹毒病的药物中的应用。上述的一种猪丹毒丝菌在制备防控猪丹毒病的药物中的应用,所述药物为疫苗。一种猪丹毒丝菌灭活疫苗,该疫苗是由猪丹毒丝菌血清型抗原和佐剂制成,所述猪丹毒丝菌血清型抗原为已灭活的猪丹毒丝菌HN1573株抗原。上述的一种猪丹毒丝菌灭活疫苗,所述佐剂为氢氧化铝佐剂。上述的一种猪丹毒丝菌灭活疫苗,所述猪丹毒丝菌菌量为1×109CFU/mL。上述任一种猪丹毒丝菌灭活疫苗的制备方法为:将猪丹毒丝菌接种到TSB液体培养基,置于37℃摇床中培养,18h后收取培养物,测定浓度,调整培养物中的菌数为2×109CFU/mL,加入甲醛至终浓度为0.2%,于37℃灭活12h;灭活后的菌液按体积比9:1加入氢氧化铝佐剂,混合制得猪丹毒丝菌灭活疫苗。本专利技术的有益效果:1、本专利技术中的菌株HN1573分离自发生急性败血症死亡的育肥猪的心血,在TSA固体培养基上分离时无其它细菌生长,只有猪丹毒丝菌生长,在TSB液体培养基中增殖滴度高,达109CFU/mL以上。2、本专利技术中的菌株HN1573对保育猪具有较强的致病力,引起保育猪发病死亡,具有良好的免疫原性。3、根据本专利技术中的菌株HN1573制备的疫苗对猪的猪丹毒丝菌病具有较好的保护效果。附图说明:图1为菌株HN1573菌落形态。图2为菌株HN1573菌体革兰氏染色100×显微镜下形态。图3为菌株HN1573的PCR鉴定结果,图中的Marker为DL2000bp,从上到下依次为2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp,100bp;泳道1为引物P1、P2扩增HN1573株16SrRNA基因结果;泳道2为引物P1、P2扩增疫苗株G4T10株16SrRNA基因结果;泳道3为引物P1、P2扩增沙门氏菌C500株16SrRNA基因结果。图4为菌株HN1573的血清型PCR鉴定结果,图中的Marker为DL2000bp,从上到下依次为2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp,100bp;泳道1为引物P3、P4扩增HN1573株glycerol-3-phosphatecytidylyltransferase基因结果;泳道2为引物P3、P4扩增疫苗株G4T10株glycerol-3-phosphatecytidylyltransferase基因结果;泳道3为引物P3、P4扩增沙门氏菌C500株结果。具体实施方式:下面结合附图和实施例对本专利技术进一步详细说明。本专利技术所述猪丹毒丝菌的病料来自于2018年8月在河南省原阳县某大型养猪场采集的发生急性败血症死亡的6月龄育肥猪的心血。实施例1:菌株HN1573的分离和鉴定1.1培养基的制备TSB液体培养基:将TSB肉汤粉(TrypticSoybroth,胰蛋白胨大豆肉汤)30g,溶于1000mL超纯水中,115℃灭菌15min,加胎牛血清50mL;TSA固体培养基:将TSA琼脂粉(TrypticSoyAgar,胰蛋白胨大豆琼脂)40g,溶于1000mL超纯水中,115℃灭菌15min,加胎牛血清50mL;于4℃保存备用。1.2菌株的分离培养无菌采集病猪的心血接种于TSA固体培养基上,37℃恒温培养箱中培养24-36h,长出一致的针尖状大小、无色透明,圆形、光滑、边缘整齐菌落(见图1)。纯化接种后,进行革兰氏染色,该菌为革兰氏阳性菌,直或稍弯曲的细杆菌,链状排列或成长丝(见图2)。从菌株的形态学与生化特性结果初步判定为猪丹毒丝菌属,命名为菌株HN1573。1.3菌株的鉴定1.3.1引物设计根据猪丹毒丝菌根据丹毒丝菌16SrRNA基因(NO.M23728)序列,设计一对通用引物,用于猪丹毒丝菌的扩增,引物序列如下:P1:5’-AGATGCCATAGAAACTGGTA-3’(SEQIDNO.1)P2:5’-CTGTATCCGCCATAACTA-3’(SEQIDNO.2)扩增片段大小为407bp。根据猪丹毒丝菌glycerol-3-phosphatecytidylyltransferase基因的序列设计一对猪丹毒丝菌1a型的特异性引物,用于猪丹毒丝菌1a型的扩增,引物序列如下:P3:5’-CTCCTAACGCTTTAGCACGC-3’(SEQIDNO.3)P4:5’-TGATCCTTTGCCACTAATGC-3’(SEQIDNO.4)扩增片段大小为356bp。1.3.2PCR鉴定按照DNA提取试剂盒的操作步骤提取出菌株HN1573的DNA,分光光度计测定浓度为100ug/mL,进行PCR鉴定。PCR扩增反应体系为25μL:10×缓冲液2.5μL,2.5mMdNTPs0.5μL,10μM/L通用引物P1,P2各1μL,5U/μLrTaq1μL,100ug/mLDNA模板1μL,加入ddH2O至25μL。疫苗株G4T10株为阳性对照,沙门氏菌C500株为阴性对照。反应条件:95℃预变性2min,进入循环:94℃30s,60℃30s,68℃1min,共35个循环,最后72℃延伸10min,PCR产物4℃保存。扩增产物分别进行电泳,本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株猪丹毒丝菌,其特征在于:所述的猪丹毒丝菌为猪丹毒丝菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)HN1573,保藏编号:CGMCC NO:16808,保藏日期:2018年11月09日,保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

【技术特征摘要】
1.一株猪丹毒丝菌,其特征在于:所述的猪丹毒丝菌为猪丹毒丝菌(Erysipelothrixrhusiopathiae)HN1573,保藏编号:CGMCCNO:16808,保藏日期:2018年11月09日,保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号。2.根据权利要求1所述的一株猪丹毒丝菌,其特征在于,所述猪丹毒丝菌为1a型猪丹毒丝菌。3.一株猪丹毒丝菌在制备防控猪丹毒病的药物中的应用。4.根据权利要求3所述的一株猪丹毒丝菌在制备防控猪丹毒病的药物中的应用,其特征在于,所述药物为疫苗。5.一种猪丹毒丝菌灭活疫苗,其特征在于,该疫苗是由猪丹毒丝菌血...

【专利技术属性】
技术研发人员:徐引弟王治方张青娴朱文豪许峰李海利郎利敏焦文强张立宪游一王克领
申请(专利权)人:河南省农业科学院畜牧兽医研究所
类型:发明
国别省市:河南,41

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