本发明专利技术涉及葡萄球菌核酸酶（staphylococcal nuclease,SNase)在制备预防或治疗炎症性肠病药物中的应用。本发明专利技术的目的是提供SNase在抗炎症性肠病作用中的新用途。结果显示SNase可以明显缓解C57BL/6J小鼠的结肠炎症，能够较好地控制C57BL/6J小鼠的体重，结肠长度，粪便潜血以及炎症浸润等，并且显著提高C57BL/6J小鼠的生存率。由此可知，SNase可以明显缓解C57BL/6J小鼠肠道炎症，可用于预防和治疗炎症性肠病药物的开发。
【技术实现步骤摘要】
SNase在制备治疗炎症性肠病药物中的应用
本专利技术涉及一种具有抗炎症性肠病作用的核酸酶SNase，以及含有该核酸酶的衍生物和类似的药物制剂，本专利技术涉及药学及医学相关领域。
技术介绍
炎症性肠病(inflammatoryboweldisease,IBD)是一组病因未明的慢性肠道疾病，包括炎症性肠病(UlcerativeColitis,UC)和克罗恩病(Crohn’sdisease,CD)。在西方国家常见，欧洲和北美国家患病率高达120-200/100000，是消化领域常见的疾病。随着生活方式的变化和生活水平的提高，IBD发病率在我国呈现逐年上升的趋势，己经成为我国消化系统的常见疾病和慢性腹泻、便血的主要病因。UC和CD发病部位存在差异，UC是一种慢性非特异结肠炎症，病变主要累及结肠黏膜和黏膜下层，范围多自远端结肠开始，可逆行向近端发展，甚至累及全结肠和末段回肠，呈连续性分布；临床主要表现为腹泻、腹痛和粘液脓血便。CD为一种慢性肉芽肿性炎症，病变可累及胃肠道各部位，以末段回肠及其邻近结肠为主，呈穿壁性炎症，多为节段性、非对称性分布；临床主要表现为腹痛、腹泻、瘘管、肛门病变等。IBD通常被认为是一种以遗传为基础的，多因素共同参与的，器官特异性自身免疫疾病。目前，对于IBD的治疗上市的传统药物，如氨基水杨酸类主要包括柳氮磺胺吡啶等，但是其不能根除疾病，且存在着较高的复发率，而糖皮质激素类不良反应较多，使用不当易引发休克，目前常见生物制剂有抗TNF单克隆抗体如英夫利昔、阿达木单抗和细胞因子抑制剂，但生物制剂的价钱昂贵，也有一定程度的不良反应，故国内目前应用生物制剂的治疗不多，且大多数给药方式为非口服给药，患者的依从性较差。因此说明IBD是一个复杂、多因素引起自身免疫疾病，仅仅免疫抑制并不能起到良好效果，故找到新靶点，研究新的治疗方法势在必行。本专利技术首次发现SNase口服制剂具有缓解炎症性肠病肠道炎症的作用，并且通过海藻酸钙固定SNase可以口服，克服了核酸酶不能口服等难题。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术的目的是提供SNase新用途技术方案：SNase在制备预防或治疗炎症性肠病药物中的应用。所述的SNase由原核表达系统表达获得。本实施例中所使用的SNase参照文献所述方法制备(洪流,郎君超,贺冬梅,刘坤锋,吴洁.葡萄球菌核酸酶的制备及性质研究[J].中国药科大学学报,2017,(第2期)。所述的SNase与药学常用赋形剂制备而成注射剂、缓释剂、皮下埋植剂、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊或者口服液。所述的赋形剂包括海藻酸钙等。有益效果：1、本专利技术采用葡萄球菌核酸酶(SNase)首次发现其具有缓解炎症性肠病结肠炎症的作用。并且可以口服给药，本专利技术涉及其新用途。2、现有技术表明诸多如TNF单克隆抗体之类的蛋白可用于炎症性肠病的防治，工程菌对于此类蛋白的表达打破了其难以大批量生产的桎梏，且诱导表达的效率较高，SNase具有较大的pH耐受范围，在pH4-10之间均能稳定存在且保持酶活，同时也具有在135℃不失活的特性，因此可以避免工程菌在纯化过程中存在的问题，例如在分离纯化过程中融合蛋白的降解，调控操作条件严格，纯化效率过低等。此专利技术巧妙地规避了蛋白降解，节约了生产成本，对于大规模的生产以用于炎症性肠病的防治和治疗具有重要意义。3、传统药物一般是通过皮下注射的方式进行给药，但是皮下注射对病患而言过于痛苦，所以难以被接受，另外，这种给药方式还存在严重的安全性问题。而本专利所涉及的SNase可通过口服给药，克服了上述的种种局限，易于为病患接受。海藻酸钙固定化SNase并通过超声分散制备混悬液用于口服给药。海藻酸钠是存在于海带、马尾藻等褐藻类中的天然多糖,外观呈白色或淡黄色粉末,无臭、无味,几乎不溶于乙醇、乙醚等有机溶剂,海藻酸钙对酸耐受，在胃酸的酸性环境下不会被降解，可到达结肠病灶部位释放该核酸酶，保护SNase免受胃酸的降解，同时生物利用率有大幅度提高，其生物相溶性好、可生物降解的天然高分子材料,具有较好的成膜和成型性,广泛应用于药物载体领域。所述的SNase为金黄色葡萄球菌分泌的一类非特异核糖核酸酶，成熟形式的SNase由149个氨基酸残基组成(见SeqNO.1)，其中同源序列SNc含有135个氨基酸残基，催化位点含有67个氨基酸残基，能够非特异性地降解DNA和RNA，并释放出3’-磷酸单核苷酸和二核苷酸，它同时具有外切酶和内切酶活性，另外与其他DNase相比还具有分子量小、热稳定性好、pH活性范围广(pH4-10)等优点。附图说明图1SNase口服制剂对C57BL/6J小鼠体重变化的影响对照组小鼠体重在实验周期过程中保持着略微的增长，造模组小鼠第八天体重下降为15.37g，较之前下降了22.3％，说明造模成功，SNase给药组小鼠体重也比造模前有所下降，但下降幅度低于造模组，尽管没有显著性差异，但展现出有缓解体重急剧下降的趋势。图2SNase口服制剂对C57BL/6J小鼠结肠长度的影响图3SNase口服制剂对C57BL/6J小鼠脾脏重量的影响图4SNase口服制剂对C57BL/6J小鼠结肠上清MPO水平的影响具体实施方式参考该文献(洪流,郎君超,贺冬梅,刘坤锋,吴洁.葡萄球菌核酸酶的制备及性质研究[J].中国药科大学学报,2017,(第2期))制备获得SNase.如下实施例中涉及固体溶液为质量体积百分比。实施例1：SNase口服制剂的制备将57mlspan85和22.8ml无水乙醇的混合后加入圆底烧瓶，40℃水浴磁力搅拌10min，然后逐滴加0.25％海藻酸钠溶液(载药量5mgSNase)8ml,继续搅拌10min后,减压抽去水分至澄清，倾注加入1ml的氯化钙乙醇溶液(0.1％),继续抽气搅拌30min固化纳米粒至无气泡。将混合液于8000rpm离心30min,收集沉淀,用石油醚洗涤二次,收集沉淀,用蒸馏水对沉淀重悬，用超声波细胞粉碎机超声分散,400W,50次/分钟分散，得SNase纳米粒混悬液。实施例2：SNase口服制剂抗炎症性肠病药效学评价。将21只8周龄雌性C57BL/6J小鼠(购自南京市江宁区青龙山动物繁殖厂，许可证号：SCXK(苏)2017-0001)随机分为3组，分别是空白组和造模组以及海藻酸钙固定化SNase组(即实施例1制备获得纳米粒混悬液)，每组7只，适应性喂养三天，空白组小鼠自由饮用生理盐水，造模组将以生理盐水溶剂制成3％DSS(硫酸葡聚糖钠)，使得小鼠自由饮水，实施例1获得SNase纳米粒混悬液SNase(2.5mg/ml)组于造模当天开始灌胃给药，每只小鼠灌胃200ul，造模7天，每天灌胃一次，第八天颈椎脱臼处死小鼠，进行药效学评分。(1)SNase口服制剂对C57BL/6J小鼠体重变化的影响从实验开始起，每天使用电子天平对各组实验小鼠进行体重称量。造模结束后小鼠体重下降，粪便潜血等可以作为造模成功的一个标志，结果如图1所示。(2)SNase口服制剂对C57BL/6J小鼠结肠长度的影响实验结束时，采用颈椎脱臼法处死小鼠并对小鼠进行解剖，取其结肠组织，测量结肠长度，并对其进行拍照，实验结果如图2所示。(3)SNase口服制剂对C57BL/6J小鼠脾脏重量的影响脾脏作为小鼠重要的免疫器官，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.SNase在制备预防或治疗炎症性肠病药物中的应用，其特征在于：所述的SNase的氨基酸序列为SEQ NO.1。
【技术特征摘要】
1.SNase在制备预防或治疗炎症性肠病药物中的应用，其特征在于：所述的SNase的氨基酸序列为SEQNO.1。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的SNase与药学常用赋形剂制备而成注射剂、缓释剂、皮下埋植剂、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊或者口服液。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的口服液为...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴洁，董万法，张婷婷，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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