用于制作α-羟丁酸脱氢酶测定用干化学试纸的反应液及干化学试纸制造技术

本发明专利技术公开了一种用于制作α‑羟丁酸脱氢酶测定用干化学试纸的反应液及干化学试纸。该干化学试纸包括反应显色层，该反应显色层含有α‑羟丁酸、辅酶I、黄递酶和在黄递酶催化下能够与NADH起显色反应的显色剂。本发明专利技术制作的干化学试纸与小型仪器联用，只需采集微量血液便可在短时间内测出α‑羟丁酸脱氢酶含量，操作便捷，无需专业人员操作，且显色的强度高、均匀度好、污染小，检测过程不依赖大型生化分析仪，能够满足特殊条件下的市场需求，尤其是急诊应用，较之传统的通过液体生化试剂进行检测的方法，该干化学试纸可以为急诊科、基层医院、家庭和小型诊所等提供一种能够方便快速测量α‑羟丁酸脱氢酶活性的方法。

【技术实现步骤摘要】
用于制作α-羟丁酸脱氢酶测定用干化学试纸的反应液及干化学试纸
本专利技术涉及体外诊断产品领域，尤其是涉及一种用于制作α-羟丁酸脱氢酶测定用干化学试纸的反应液及干化学试纸。
技术介绍
α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH，EC1.1.1.30)主要来源于心肌、肾和红细胞，心肌中较多，肝中较少。α-羟丁酸脱氢酶不是一个独立的特异酶，而是含有H亚基的乳酸脱氢酶同工酶LDH1和LDH2的总称，普遍存在于人的体内，人体正常参考范围是(33℃)：90-220U/L(酶速率法)。α-羟丁酸脱氢酶升高主要见于心肌梗死，另外恶性贫血、溶血性贫血、肾梗死、心肌损伤、心肌病、营养不良、叶酸和维生素B12缺乏时，α-羟丁酸脱氢酶活性亦可升高。心肌梗塞时血清α-羟丁酸脱氢酶活力增高，其活力可持续2周或更长时间，是诊断心肌梗塞的重要指标。α-羟丁酸脱氢酶又可用于鉴别肝病和心脏疾病，因肝病和心脏疾病均能引起乳酸脱氢酶(LDH)升高，但肝病时α-羟丁酸脱氢酶变化不明显，而心脏疾病则明显增高，同时心包炎、胆囊炎均不会引起α-羟丁酸脱氢酶增高。α-羟丁酸脱氢酶降低的情况诸如使用免疫抑制剂或抗癌剂(LDA也降低)等，另外遗传性变异的LDH-H亚型欠缺症也会导致LDH/α-HBDH比值下降。α-羟丁酸脱氢酶的活性与LDH的活性变化基本一致，但更能反映LDH1的活性变化，与LDH、AST、CK及CK-MB构成心肌酶谱，对诊断心肌梗死更有意义。一般需要检测α-羟丁酸脱氢酶的人群：腹胀、腹痛、心肌梗死、贫血、白血病及肝硬化等患者。目前临床上主要采用液体生化试剂进行α-羟丁酸脱氢酶的活性测定，测定的原理如下：α-羟丁酸脱氢酶催化α-酮丁酸还原成α-羟丁酸，同时使还原型辅酶Ⅰ(NADH)氧化成氧化型辅酶Ⅰ(NAD+)，其氧化速率与样本中α-羟丁酸脱氢酶的活性成正比，通过测定340nm波长处NADH下降的速率，即可求出样本中α-羟丁酸脱氢酶的活性。液体生化试剂以液体形态加工，储存和运输都不太方便，使用时需要配备大型生化仪器进行测定，价格昂贵，并且需要配备专业人员才能操作，一般只适用于大型医院大样本量的集中检测，而在急诊、病房、基层社区医院、乡镇医院等往往缺乏大型设备和专业人员的情况下，使用非常不便。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种用于制作α-羟丁酸脱氢酶测定用干化学试纸的反应液及干化学试纸，以解决传统的α-羟丁酸脱氢酶的液体生化试剂使用不便的问题。一种用于制作α-羟丁酸脱氢酶测定用干化学试纸的反应液，包括如下浓度的各组分：在其中一个实施例中，所述缓冲盐类的溶液选用pH为8.0～9.0的Good’s缓冲液或Tris-HCl的磷酸盐缓冲液。在其中一个实施例中，所述保护剂为糖类。在其中一个实施例中，所述稳定剂选自牛血清白蛋白、海藻胶及羧甲基纤维素中的至少一种。在其中一个实施例中，所述反应液还包括激活剂，所述激活剂为K+和Na+中的一种或两种，浓度为5mM～10mM。一种α-羟丁酸脱氢酶测定用干化学试纸，包括反应显色层，所述反应显色层中含有α-羟丁酸、辅酶I、黄递酶以及在黄递酶催化下能够与NADH起显色反应的显色剂。在其中一个实施例中，所述反应显色层包括试剂层和位于所述试剂层一侧的显色层，所述α-羟丁酸、所述辅酶I、所述黄递酶以及所述显色剂中的一种、两种或三种试剂位于所述试剂层，其余试剂位于所述显色层。在其中一个实施例中，所述试剂层与所述显色层中的一层含有所述α-羟丁酸、所述辅酶I和所述黄递酶，另一层含有所述显色剂。在其中一个实施例中，所述试剂层与所述显色层中的一层是将上述任一实施例所述的用于制作α-羟丁酸脱氢酶测定用干化学试纸的反应液在相应层的载体上经干燥后得到的，另一层是将含有所述显色剂的溶液在相应层的载体上经干燥后得到的。在其中一个实施例中，所述显色剂为四唑盐类。在其中一个实施例中，所述α-羟丁酸脱氢酶测定用干化学试纸包括下支持层以及至少在所述下支持层的测试区的上方依次层叠设置的所述反应显色层、扩散层以及上支持层；在所述测试区，所述上支持层对应所述反应显色层设有加样孔且所述下支持层对应所述反应显色层设有检测孔。在其中一个实施例中，所述α-羟丁酸脱氢酶测定用干化学试纸还包括设置在所述扩散层与所述反应显色层之间的用于过滤层。在其中一个实施例中，所述过滤层的材质选自玻璃纤维或微孔膜，其微孔的孔径大小在0.15μm～10μm之间；所述下支持层与所述上支持层的材质选自聚乙烯、聚氯乙烯、聚苯乙烯或聚酯纤维；所述扩散层的材质选自滤纸、玻璃纤维、无纺布、网布或合成纤维；所述反应显色层的载体的材质选自滤纸、玻璃纤维、无纺布或合成膜。上述α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)测定用干化学试纸或通过上述用于制作α-羟丁酸脱氢酶测定用干化学试纸的反应液制作的干化学试纸，在α-羟丁酸脱氢酶含量测定时，可先将适量样本加入到干化学试纸的加样孔后，样本可均匀渗透到反应显色层中反应，样本血清中的α-羟丁酸脱氢酶催化α-羟丁酸和辅酶I(NAD+)转化为乙酸乙酯和NADH，产物NADH和显色剂在黄递酶的催化下转化成有色物质(指示剂)和NAD+，有色物质的颜色变化速率与α-羟丁酸脱氢酶的活性成正比，在530-530nm波长处检测光学信号即可定量得到α-羟丁酸脱氢酶的活性浓度。具体的检测原理如下：本专利技术制作的干化学试纸与小型仪器联用，在加样孔的一侧加样，在相反检测孔的另一侧测定，只需采集微量血液便可在短时间内测出α-羟丁酸脱氢酶含量，操作便捷，无需专业人员操作，且显色的强度高、均匀度好、污染小，检测过程不依赖大型生化分析仪，一般只要配备一台小型反射式分光光度计即可读数定量测定，能够满足特殊条件下的市场需求，尤其是急诊应用，较之传统的通过液体生化试剂进行检测的方法，通过本专利技术制作的干化学试纸可以为急诊科、基层医院、家庭和小型诊所等提供一种能够方便快速测量α-羟丁酸脱氢酶浓度的方法。附图说明图1为本专利技术一实施方式的α-羟丁酸脱氢酶测定用干化学试纸的分解结构示意图。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将参照相关附图对本专利技术进行更全面的描述。附图中给出了本专利技术的较佳实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。如图1所示，本专利技术一实施方式的α-羟丁酸脱氢酶测定用干化学试纸100包括下支持层110、反应显色层120、扩散层130以及上支持层140。其中，下支持层110具有测试区，反应显色层120、扩散层130以及上支持层140至少设在下支持层110的测试区，并在该测试区上依次层叠设置。下支持层110的另外的区域可以为但不限于手持区。上支持层140对应下方的扩散层130开设有用于滴加样品的加样孔142。下支持层110对应上方的反应显色层120设有用于观察测试区颜色变化和测定光密度的检测孔112。该α-羟丁酸脱氢酶测定用干化学试纸100整体上呈长条形，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于制作α‑羟丁酸脱氢酶测定用干化学试纸的反应液，其特征在于，包括如下浓度的各组分：

【技术特征摘要】
1.一种用于制作α-羟丁酸脱氢酶测定用干化学试纸的反应液，其特征在于，包括如下浓度的各组分：2.如权利要求1所述的用于制作α-羟丁酸脱氢酶测定用干化学试纸的反应液，其特征在于，所述缓冲盐类的溶液选用pH为8.0～9.0的Good’s缓冲液或Tris-HCl的磷酸盐缓冲液。3.如权利要求1所述的用于制作α-羟丁酸脱氢酶测定用干化学试纸的反应液，其特征在于，所述保护剂为糖类。4.如权利要求1所述的用于制作α-羟丁酸脱氢酶测定用干化学试纸的反应液，其特征在于，所述稳定剂选自牛血清白蛋白、海藻胶及羧甲基纤维素中的至少一种。5.如权利要求1所述的用于制作α-羟丁酸脱氢酶测定用干化学试纸的反应液，其特征在于，还包括激活剂，所述激活剂为K+和Na+中的一种或两种，浓度为5mM～10mM。6.一种α-羟丁酸脱氢酶测定用干化学试纸，其特征在于，包括反应显色层，所述反应显色层中含有α-羟丁酸、辅酶I、黄递酶以及在黄递酶催化下能够与NADH起显色反应的显色剂。7.如权利要求6所述的α-羟丁酸脱氢酶测定用干化学试纸，其特征在于，所述反应显色层包括试剂层和位于所述试剂层一侧的显色层，所述α-羟丁酸、所述辅酶I、所述黄递酶以及所述显色剂中的一种、两种或三种试剂位于所述试剂层，其余试剂位于所述显色层。8.如权利要求7所述的α-羟丁酸脱氢酶测定用干化学试纸，其特征在于，所述试剂层与所述显色层中的一层含有所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱世成，何翠云，陈飞，王继华，
申请(专利权)人：广州万孚生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44