连翘花黄色素在制备抗氧化应激损伤药物或食品中的应用制造技术

本发明专利技术提供了连翘花黄色素在制备抗氧化应激损伤药物中的应用。所述黄色素的制备步骤：将干燥连翘花粉末，按照料液比1：100加入95％乙醇，水浴温度为50℃，热回流法提取；抽滤分离，重复提取2次后收集提取液旋转蒸发浓缩后进行冷冻干燥，收集干粉即可；该黄色素中含有：芦丁，连翘脂苷A，松脂素，连翘苷等。该黄色素能够通过上调DAF‑16和SKN‑1靶基因的表达，有效清除秀丽隐杆线虫体内的ROS自由基，同时增加线虫体内抗氧化酶活性，降低线虫体内自由基含量，减弱了胡桃醌对线虫体内的氧化应激损伤，并能够显著延长野生型线虫N2和daf‑16突变体线虫在氧化应激下的寿命，从而提高线虫对氧化应激的抵抗力。该黄色素还可在制备抗氧化应激损伤功能食品中应用。

【技术实现步骤摘要】
连翘花黄色素在制备抗氧化应激损伤药物或食品中的应用
本专利技术涉及天然药用植物有效部位的用途，特别涉及一种来源于连翘花的黄色素在制备抗氧化应激损伤药物或功能食品中的应用。
技术介绍
氧化应激被认为是导致机体衰老、组织损伤和疾病发生的一个重要因素。氧化应激的产生是由于机体受到内源性或外源性的伤害后，产生过多的自由基，释放出大量的活性氧簇(ROS)等氧化物质，而机体自身抗氧化的能力下降，不能清除蓄积过多的ROS，机体的氧化反应远远超出抗氧化的清除能力，致使氧化与抗氧化能力的失衡。氧化应激引起的ROS积累可引起血管内皮功能障碍，血管收缩功能紊乱，影响血流调节，血压随之升高；ROS可刺激胰岛素受体和胰岛素受体底物的丝氨酸磷酸化，从而导致胰岛素信号传导受阻，使血糖升高；中枢神经的氧化可引起多种心血管疾病，如动脉粥样硬化和心力衰竭等；ROS还可诱导组织纤维化。氧化应激的增强还会引起线粒体DNA、线粒体蛋白及脂质损伤，导致线粒体功能障碍，促进机体衰老，引起一系列疾病，如肥胖症、癌症、神经退行性疾病阿尔兹海默症等。植物或植物源中草药中存在着较多的抗氧化活性物质，可以通过降低体内自由基水平来发挥抗衰老和抗应激功能。连翘(Forsythiasuspense(Thunb.)Vahl)，别名连壳、黄花条、黄链条花,是木犀科连翘属植物,其果实是一种使用广泛的传统中药。具有清热解毒、消肿散结、清肝利胆、除湿退黄、通调三焦、畅达血脉、保肝护心等功效。主产于我国山西、陕西、河南、山东等地。每年3-4月份先叶开花，花期长、花量大，花色鲜黄且长久不褪，是一种极具开发潜力的天然色素来源。关于连翘花黄色素的提取和稳定性研究已有一些报道，但未见其在模式生物线虫(Caenorhabditiselegans,C.elegans)中的抗氧化应激活性，以及能延长线虫在氧化应激损伤下寿命的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供连翘花黄色素在制备抗氧化应激损伤药物和功能食品中的应用。本专利技术提供的连翘花黄色素在制备抗氧化应激损伤药物中的应用，所述的连翘花黄色素的制备步骤：将已干燥的连翘花研磨成粉末，按照料液比1：100加入95％乙醇，水浴温度为50℃，热回流法提取；抽滤分离，重复提取2次后收集提取液旋转蒸发浓缩后进行冷冻干燥，收集干粉即为该黄色素；经高压液相色谱鉴定连翘花黄色素中主要含有：芦丁，连翘脂苷A，松脂素，连翘苷。所述的连翘花黄色素也可在制备抗氧化应激损伤功能食品中应用。本专利技术的有益效果：本专利技术首次发现连翘花黄色素可延长秀丽隐杆线虫在氧化应激状态下的寿命，可明显增强线虫体内抗氧化酶活性和清除线虫体内活性氧自由基，提高线虫对氧化应激损伤的抵抗力，可以作为活性物质，单独使用或与其它药物组成复方使用，用于预防和治疗氧化应激损伤；还可以作为膳食补充剂，用于制备抗氧化应激损伤食品。适合健康人群抗衰老或心血管疾病、糖尿病、癌症等氧化应激损伤相关疾病患者食用，因其来源于纯天然中草药植物，加之分离提取工艺简单，具有安全无毒、原料来源广泛、成本低廉等优势，因此有较大的开发前景和应用价值。这一发现为开发连翘花高附加值产品以及连翘资源的深度开发和有效利用提供了新的思路和依据。附图说明图1是连翘花黄色素对线虫体内活性氧ROS的影响图图2是连翘花黄色素对野生型N2线虫氧化应激下寿命的影响图具体实施方式实施例1连翘花黄色素制备：取干燥的连翘花20g研磨成粉末，加入95％乙醇2000mL，水浴温度为50℃，热回流法提取；抽滤分离，重复提取2次后收集提取液旋转蒸发浓缩后进行冷冻干燥，收集干粉即为该黄色素；经高压液相色谱鉴定连翘花黄色素成分主要含有：芦丁(236.09mg/g,质量分数为23.61％)，连翘脂苷A(116.95mg/g,质量分数为11.69％)，松脂素(82.51mg/g,质量分数为8.25％)，连翘苷(18.23mg/g,质量分数为1.83％)。实施例2连翘花黄色素对线虫体内ROS的影响将同步化生长至L4期线虫，转移至不含和含有该黄色素的NGM培养基上，20℃恒温培养箱内培养2d，用M9缓冲液清洗收集虫体，在冰上用匀浆器进行研磨，12000r/m离心取上清。取一部分用BCA试剂盒测量蛋白浓度。在黑色96孔板中加入一定量上述上清，并用M9缓冲液稀释，使每孔中蛋白浓度一致，加入DCFH-DA荧光探针，使其终浓度为25μM。每孔体积为200μL，每组设置三个复孔。20℃下孵育30min。多功能酶标仪在激发波长485nm，发射波长528nm下检测荧光强度。ROS产生于线粒体电子反应链，是引起细胞内氧化应激的主要自由基。在连翘花黄色素作用线虫两天后检测线虫体内ROS的含量。结果如图1所示，黄色素作用后的线虫体内荧光强度比对照组降低了82％，(P<0.01)两组数据有极显著差异。这说明，40μg/mL的该黄色素能显著抑制线虫体内ROS的产生。在黄色素作用线虫两天后检测线虫体内几个抗氧化相关指标SOD，CAT酶活性和GSH的含量。结果表明该黄色素显著增加两种抗氧化酶SOD(P<0.01)和CAT(P<0.01)的活力，SOD酶活力增强了192.89％，CAT酶活性增强了82.60％。同时，该黄色素还显著增加了线虫体内GSH含量，增长率达82％。实施例3连翘花黄色素对野生型线虫氧化应激抵抗力的影响配制含500μM胡桃醌的NGM培养基，将同步化至L4期的野生型N2线虫挑至不含和含有该黄色素的板中，每板30只。每一小时计数线虫存活个数，并计算生存率，直至线虫全部死亡。实验结果如图2所示，对照组线虫平均寿命为2.05h；20μg/mL的黄色素作用后线虫平均寿命为3.25h，与对照相比有统计学差异(P<0.05)；40μg/mL的黄色素作用于线虫后平均寿命延长到7.25h，与对照组相比有极显著差异(P<0.01)；80μg/mL的黄色素作用于线虫后平均寿命为4.65h，与对照相比有极显著差异(P<0.01)。可见，该黄色素可以延长野生型线虫在氧化应激下的寿命，即可延长秀丽隐杆线虫在压力应激状态下寿命的黄色素可以增强野生型线虫对氧化应激的抵抗力。实施例4连翘花黄色素提高线虫对氧化应激抵抗力依赖于SKN-1和DAF-16本实验使用了两种突变体线虫，研究连翘花黄色素对这两种突变体线虫在500μM胡桃醌下寿命的影响。连翘花黄色素作用于SKN-1突变体线虫，对照组线虫平均寿命为1.6±0.32h，实验组平均寿命为1.4±0.30h，两组相比没有统计学差异，说明连翘花黄色素并不能提高SKN-1突变体线虫的氧化应激抵抗力。连翘花黄色素作用于DAF-16突变体线虫，对照组线虫平均寿命为30±0.43min，实验组平均寿命为46±0.86min，两组相比有显著差异，平均寿命延长率为53.33％，低于野生型线虫寿命延长率。说明连翘花黄色素提高线虫氧化应激抵抗力依赖于SKN-1和DAF-16的相互作用。实施例5连翘花黄色素提高了SKN-1和DAF-16靶基因的转录活性为进一步检测连翘花黄色素对线虫体内与氧化应激和寿命密切相关的转录因子的影响，将同步化生长至L4期的N2线虫，转移至含有和不含连翘花黄色素的NGM培养基上，20℃恒温培养箱内培养2d。收集线虫，Triz本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.连翘花黄色素在制备抗氧化应激损伤药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.连翘花黄色素在制备抗氧化应激损伤药物中的应用。2.如权利要求1所述的连翘花黄色素在制备抗氧化应激损伤药物中的应用，所述的连翘花黄色素，其制备步骤：将已干燥的连翘花研磨成粉末，按照料液比1：100加入95％乙醇，水浴温度为50℃，热回流法提取；抽滤分离，重复提取2次后收集提取液旋转蒸发浓缩后进行冷冻干燥，收集干粉即为该黄色素；所述的连翘花黄色素含有芦丁，连翘脂苷A，松脂素，连翘苷。3....

【专利技术属性】
技术研发人员：李玉英，张立伟，张东丹，
申请(专利权)人：山西大学，
类型：发明
国别省市：山西,14