一种益母草多糖的制备方法及其用途技术

技术编号:20811615 阅读:30 留言:0更新日期:2019-04-10 04:15
本发明专利技术涉及从益母草中提取分离得到的益母草均一多糖LAP‑1和方法,其特征在于多糖含量90%以上,酸性糖含量在20%以上,相对分子质量为10KDa左右;单糖组成包括甘露糖,核糖,鼠李糖,葡萄糖醛酸,半乳糖醛酸,葡萄糖,半乳糖,木糖,阿拉伯糖,岩藻糖;糖苷键型有→4,6‑β‑甘露糖‑(1→,α‑GalpA‑(1→,→4‑α‑半乳糖醛酸‑(1→,→4‑α‑葡萄糖‑(1→,→4,6‑α‑葡萄糖‑(1→,→4,6‑α‑半乳糖‑(1→,T‑β‑半乳糖,α‑葡萄糖醛酸‑(1→,β‑葡萄糖‑(1→,α‑阿拉伯糖‑(1→,→3‑α‑阿拉伯糖‑(1→,→5‑α‑阿拉伯糖‑(1→,α‑鼠李糖‑(1→,→2‑α‑鼠李糖‑(1→,→2,4‑α‑鼠李糖‑(1→。本发明专利技术还提供了益母草均一多糖LAP‑1在制备抗凝血及其他药物中的应用。

【技术实现步骤摘要】
一种益母草多糖的制备方法及其用途
本专利技术涉及了一种益母草均一多糖-LAP-1、其制备方法及用途,属于医药

技术介绍
益母草为唇形科植物益母草Leonurusartemisia(Laur.)S.Y.HuF的新鲜或干燥地上全草,始载于《神农本草经》,具有活血调经、利尿消肿、清热解毒的功效,为临床上治疗月经不调、痛经、经闭、恶露不尽、水肿尿少、急性肾炎水肿的常用中药,由于疗效确切,被民间称为“血家圣药”、“经产良药”。益母草在国内分布范围广,易于栽培,已开发出多种剂型,涉及药品、保健品、食品、化妆品等行业,包括益母草片、复方益母草胶囊、益母草颗粒、益母草注射液等多种产品。益母草药材的药效物质基础研究前期主要集中在已经发现的小分子化学成分上,如益母草碱,水苏碱,前益母草素等,但已有的研究成果尚未全面阐释益母草多种活性作用的科学内涵。目前有学者开始关注益母草中的大分子类物质,如多糖类成分,但是,也仅限于提取分离益母草水溶性粗多糖,且提取分离得到的水溶性粗多糖的组成复杂,多糖含量较低,难以体现益母草多糖的药理作用。近年来,多种新的提取技术被应用于多糖的提取制备工艺研究中,有效地提高了其提取效率。已有研究表明超声波在多糖提取过程中利用其空化作用和机械效应破坏生物细胞壁,加速浸提物的溶出,能提高多糖的得率。益母草具有很好的活血祛瘀作用。已有文献报道,益母草水提物可降低血浆抗凝血酶III的活性、减少血浆凝血酶原片段1+2的含量,扩张肠系膜一级微静脉、一级微动脉口径,改善微血流的流态,降低流态的积分值,明显增强纤维蛋白溶解活性。抗凝血药是通过影响凝血过程中的某些凝血因子阻止凝血过程的药物,可用于防治血管内栓塞或血栓形成的疾病,预防中风或其它血栓性疾病。正常人由于有完整的血液凝固系统和抗凝及纤溶系统,所以血液在血管内既不凝固也不出血,始终自由流动完成其功能,但当机体处于高凝状态或抗凝及纤溶减弱时,则发生血栓栓塞性疾病。血栓的形成常常会引起血管系统的局部血液凝固,通常导致严重损害健康的相关疾病,如心脏病发作、中风。引起血栓形成的危险因素由异常高脂血症、高血糖症、血浆纤维蛋白原升高、血压升高和癌症等,这些血栓性疾病已成为死亡的主要原因,因此迫切需要安全、有效的抗凝血药物。本专利技术采用超声波辅助提取法和多种柱层析分离、纯化方法,从益母草药材中获得了纯度较高的均一多糖-LAP-1,采用色谱学,光谱学,波谱学等技术和方法,全面解析了LAP-1的结构特征,在此基础上,进一步探讨了LAP-1的抗凝血活性,揭示了LAP-1是益母草药材发挥活血祛瘀作用的有效成分之一,可以应用于与凝血相关及其他疾病的治疗,迄今为止尚未发现有关该均一多糖的分离制备及用途的文献报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是如何从益母草水提物中超声提取获得益母草多糖粗品的方法以及从益母草多糖粗品中分离纯化得到益母草均一多糖LAP-1的方法。本专利技术要解决的技术问题还包括研究并阐述益母草均一多糖LAP-1的结构特征,及研究其在抗凝血药物中的应用。所述的获得益母草多糖粗品的方法,其特征是,包括以下步骤:第一步,将益母草全草干燥品粉碎后加入乙醇,回流脱脂,将脱脂后的原料加入去离子水,加热超声提取,将提取液浓缩,加入石油醚完全去除脂质后,加入Sevage试剂,完全去除蛋白,乙醇沉淀,真空干燥得到本专利技术所述的益母草水提物。第二步,将益母草水提物溶解于去离子水,加入大孔树脂,去除溶液中的色素和蛋白质,保留脱色液,将脱色液过滤,然后浓缩,加入乙醇沉淀出益母草多糖,真空干燥后得到本专利技术的益母草多糖粗品(LAP),其多糖含量占总固体重量的50%以上。所述的分离纯化得到益母草均一多糖的方法,其特征是,包括以下步骤:第一步,将上述方法获得的益母草多糖粗品(LAP)溶解于去离子水,用离子交换柱进行分离纯化,以去离子水洗脱,用硫酸苯酚比色法跟踪检测。第二步,去离子水洗脱后,以氯化钠溶液进行洗脱,用硫酸苯酚比色法跟踪检测,收集均一组分,再采用分子筛柱层析,以去离子水洗脱,用硫酸苯酚比色法跟踪检测,收集益母草多糖均一组分,冷冻干燥,即得到本专利技术所述的益母草均一多糖(LAP-1),其多糖含量占总固体的90%以上。利用上述的提取分离纯化方法制备得到的益母草均一多糖(LAP-1)及其结构特征。上述的抗凝血益母草多糖在制备抗凝血药物方面的应用。所述方法中,超声提取是在超声仪中完成,超声功率为100~250W。所述方法中,超声提取温度在20~70℃。所述方法中,超声提取时间为20~70分钟。所述方法中,提取所用的料液比为20~70。所述方法中,大孔树脂为阴离子交换树脂。所述方法中,大孔树脂脱色时间为1~3小时。所述方法中,离子交换树脂为二乙胺基乙基纤维素(DEAE-52)。所述方法中,分子筛凝胶填料为SephacrylS-400。所述的本专利技术的多糖在制备抗凝血药物方面的应用,其特征是,将上述方法获得的益母草多糖粗品(LAP),益母草均一多糖(LAP-1)应用于人体血浆中对活化部分凝血活酶时间(APTT),对凝血酶原时间(PT),对凝血酶时间(TT)均具有一定的抗凝血作用,因此可应用于制备抗凝血药物。所述方法中,益母草多糖粗品(LAP)多糖含量在50%以上。所述方法中,益母草均一多糖(LAP-1)多糖含量在90%以上,酸性糖含量在20%以上,分子量为10KDa左右。所述方法中,益母草均一多糖(LAP-1)含有甘露糖,核糖,鼠李糖,葡萄糖醛酸,半乳糖醛酸,葡萄糖,半乳糖,木糖,阿拉伯糖,岩藻糖,摩尔比为7.93∶1.04∶6.58∶1∶9.08∶5.08∶4.29∶6.88∶5.45∶3.15。主要糖苷键键型有→4,6-β-甘露糖-(1→,α-GalpA-(1→,→4-α-半乳糖醛酸-(1→,→4-α-葡萄糖-(1→,→4,6-α-葡萄糖-(1→,→4,6-α-半乳糖-(1→,T-β-半乳糖,α-葡萄糖醛酸-(1→,β-葡萄糖-(1→,α-阿拉伯糖-(1→,→3-α-阿拉伯糖-(1→,→5-α-阿拉伯糖-(1→,α-鼠李糖-(1→,→2-α-鼠李糖-(1→,→2,4-α-鼠李糖-(1→。有益效果本专利技术采用超声提取分离方法从益母草中分离得到益母草粗多糖(LAP),并对该粗多糖进行了纯化获得益母草均一多糖(LAP-1),对益母草均一多糖(LAP-1)的结构进行了解析;并对益母草粗多糖(LAP),益母草均一多糖(LAP-1)的体外凝血效果进行考察,结果表明两种多糖均具有良好的凝血效果,且益母草均一多糖(LAP-1)优于益母草粗多糖(LAP),两者均可用于制备抗凝血药物的用途;通过以上技术进行有效集成,显著提高了益母草粗多糖(LAP)和益母草均一多糖(LAP-1)的提取率、缩短了提取时间,降低了提取成本,促进了益母草资源的综合利用,由于益母草多糖具有可食性,用于制备药物安全无毒害,因此可以将益母草均一多糖(LAP-1)应用于制备抗凝血的药物或者保健食品,拥有广阔的应用前景,具有良好的社会效益和经济效益。附图说明图1为本专利技术中益母草多糖粗品(LAP)提取条件单因素分析。图2为本专利技术中益母草多糖粗品(LAP)提取条件响应面分析。图3为本专利技术中益母草均一多糖(LAP-1)高效分子排阻色谱。图4为本专利技术中益本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.益母草均一多糖LAP‑1,其特征在于多糖含量90%以上,酸性糖含量在20%以上,相对分子质量为10KDa左右;单糖组成包括甘露糖,核糖,鼠李糖,葡萄糖醛酸,半乳糖醛酸,葡萄糖,半乳糖,木糖,阿拉伯糖,岩藻糖;糖苷键型有→4,6‑β‑甘露糖‑(1→,α‑GalpA‑(1→,→4‑α‑半乳糖醛酸‑(1→,→4‑α‑葡萄糖‑(1→,→4,6‑α‑葡萄糖‑(1→,→4,6‑α‑半乳糖‑(1→,T‑β‑半乳糖,α‑葡萄糖醛酸‑(1→,β‑葡萄糖‑(1→,α‑阿拉伯糖‑(1→,→3‑α‑阿拉伯糖‑(1→,→5‑α‑阿拉伯糖‑(1→,α‑鼠李糖‑(1→,→2‑α‑鼠李糖‑(1→,→2,4‑α‑鼠李糖‑(1→。

【技术特征摘要】
1.益母草均一多糖LAP-1,其特征在于多糖含量90%以上,酸性糖含量在20%以上,相对分子质量为10KDa左右;单糖组成包括甘露糖,核糖,鼠李糖,葡萄糖醛酸,半乳糖醛酸,葡萄糖,半乳糖,木糖,阿拉伯糖,岩藻糖;糖苷键型有→4,6-β-甘露糖-(1→,α-GalpA-(1→,→4-α-半乳糖醛酸-(1→,→4-α-葡萄糖-(1→,→4,6-α-葡萄糖-(1→,→4,6-α-半乳糖-(1→,T-β-半乳糖,α-葡萄糖醛酸-(1→,β-葡萄糖-(1→,α-阿拉伯糖-(1→,→3-α-阿拉伯糖-(1→,→5-α-阿拉伯糖-(1→,α-鼠李糖-(1→,→2-α-鼠李糖-(1→,→2,4-α-鼠李糖-(1→。2.一种益母草均一多糖LAP-1的制备方法,其特征在于,通过以下方法制备:将益母草粉碎后,加入有机试剂脱脂,响应面优化实验条件后超声热水提取,得到益母草粗糖LAP后,采用有机试剂和树脂纯化后得LAP-1。3.根据权利要求2所述的益母草粗多糖LAP-1的制备方法,其特征是:提取时料液比20~70mL/g加入去离子水,提取时间为20~70min,提取温度为20~70℃,超声功率为100~250W;提取结束后过滤得提取液。4.根据权利要求2所述的益母草粗多糖LAP-1的制备方法,其特征是:其特征是提取时料液比为53mL/g,超声功率为240W,提取温度为60℃,提取时间为60min。5.根据权利2所述的益母草均一多糖LAP-1的制备方法,其具体特征是由下列步骤组成,步骤一:称取粉碎后过80目筛的益母草全草药材于提取容器中,加入5倍体积乙醇,回流脱脂3小时,纱布除去上清后将样品烘干。将烘干后样品至于反应容器中,加入去离子水200~700ml,辅以超声波法提取。所述超声波法提取具体为:按料液比20~70mL/g加入去离子水,提取时间为20~70m...

【专利技术属性】
技术研发人员:刘丽芳胡成辛贵忠王露懿
申请(专利权)人:中国药科大学
类型:发明
国别省市:江苏,32

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