一种抗14-3-3η蛋白单克隆抗体及其用途制造技术

本发明专利技术提供了一种抗14‑3‑3η蛋白单克隆抗体及其用途，具体地本发明专利技术人在研究过程中成功获得一株特异性抗14‑3‑3η蛋白的单克隆抗体，实验结果表明，该单克隆抗体能够特异地结合14‑3‑3η蛋白，亲和力强、灵敏度高。该抗体不仅能够用于检测血浆、新鲜组织中的14‑3‑3η蛋白，还可用于石蜡包埋的临床组织样本切片的检测。对于实验室研究以及临床中研究均有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种抗14-3-3η蛋白单克隆抗体及其用途
本专利技术属于生物医学领域，具体地说，本专利技术涉及一种抗14-3-3η蛋白单克隆抗体及其用途。
技术介绍
14-3-3是一类磷酸丝氨酸/苏氨酸结合蛋白家族，包括α/β、γ、ε、σ、ξ、θ/τ和η七个亚型。已有研究表明：5种14-3-3蛋白亚型(α/β、γ、ε、σ和ξ)参与了肿瘤进程。肿瘤(tumor)是指细胞在致瘤因素作用下失去对其生长的正常调控，导致异常增生而产生的疾病。肿瘤可分为良性和恶性肿瘤两大类。前者生长缓慢，与周围组织界限清楚，不发生转移，对人体健康危害不大。后者生长迅速，可转移到身体其它部位，还会产生有害物质，破坏正常器官结构，使机体功能失调，威胁生命。恶性肿瘤也叫癌症(cancer)是目前危害人类健康最严重的一类疾病。在美国，恶性肿瘤的死亡率仅次于心血管疾病而居第二位。癌症的早期诊断在癌症的治疗中具有巨大的意义。另外，在癌症的治疗中，需要通过对肿瘤标志性蛋白进行检测，进而对癌症的分子类型进行评估，来制定更为合理的治疗方案。因此，本领域技术人员致力于开发检测效果更为准确，灵敏度更高，且使用更为方便的肿瘤标志性蛋白的检测技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种抗14-3-3η蛋白单克隆抗体及其用途。本专利技术的第一方面，提供了一种抗14-3-3η蛋白单克隆抗体，本专利技术的第一方面，提供了一种抗体，所述抗体具有：(1)重链可变区；和/或(2)轻链可变区；其中，所述重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：SEQIDNO.:1所示的CDR1，SEQIDNO.:2所示的CDR2，和SEQIDNO.:3所示的CDR3；所述轻链可变区包括以下三个互补决定区CDR：SEQIDNO.:5所示的CDR1'，SEQIDNO.:6所示的CDR2'，和SEQIDNO.:7所示的CDR3'。在另一优选例中，所述重链可变区具有SEQIDNO.:4所示的氨基酸序列。在另一优选例中，所述轻链可变区具有SEQIDNO.:8所示的氨基酸序列。在另一优选例中，所述抗体还包括重链恒定区。在另一优选例中，所述的重链恒定区为人源、鼠源、或兔源。在另一优选例中，所述抗体还包括轻链恒定区。在另一优选例中，所述的轻链恒定区为人源、鼠源、或兔源。在另一优选例中，所述的抗体为特异性抗14-3-3η蛋白的抗体。在另一优选例中，所述的抗体包括：单链抗体、双链抗体、单克隆抗体、嵌合抗体(如人鼠嵌合抗体)、鼠源抗体、兔源抗体或人源化抗体。本专利技术的第二方面，提供了一种多核苷酸，它编码如本专利技术第一方面所述的抗体。本专利技术的第三方面，提供了一种载体，它含有本专利技术第二方面所述的多核苷酸。在另一优选例中，所述的载体包括：细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒、或其他载体。本专利技术的第四方面，提供了一种遗传工程化的宿主细胞，它含有本专利技术第三方面所述的载体或基因组中整合有本专利技术第二方面所述的多核苷酸。本专利技术的第五方面，提供了一种免疫偶联物，该免疫偶联物含有：(a)如本专利技术第一方面所述的抗体；和(b)选自下组的偶联部分：可检测标记物、药物、毒素、细胞因子、放射性核素、或酶。在另一优选例中，所述偶联物选自：荧光或发光标记物、放射性标记物、MRI(磁共振成像)或CT(电子计算机X射线断层扫描技术)造影剂、或能够产生可检测产物的酶、放射性核素、生物毒素、细胞因子(如IL-2等)、抗体、抗体Fc片段、抗体scFv片段、金纳米颗粒/纳米棒、病毒颗粒、脂质体、纳米磁粒、前药激活酶(例如，DT-心肌黄酶(DTD)或联苯基水解酶-样蛋白质(BPHL))、化疗剂(例如，顺铂)或任何形式的纳米颗粒等。本专利技术的第六方面，提供了一种药物组合物，其特征在于，它含有：(i)如本专利技术第一方面所述的抗体、如本专利技术第五方面所述的免疫偶联物；以及(ii)药学上可接受的载体。在另一优选例中，所述的药物组合物为注射剂型。在另一优选例中，所述的药物组合物用于制备治疗肿瘤的药物，所述的肿瘤选自下组：肝癌、胃癌、白血病、肾脏肿瘤、肺癌、小肠癌、骨癌、前列腺癌、结直肠癌、乳腺癌、大肠癌、宫颈癌、子宫内膜癌、阴茎癌、肾上腺肿瘤、或膀胱肿瘤。本专利技术的第七方面，提供了如本专利技术第一方面所述的抗体、如本专利技术第五方面所述的免疫偶联物的用途，用于制备药剂、试剂、检测板或试剂盒；所述试剂、检测板或试剂盒用于：(1)检测样品中14-3-3η蛋白；和/或(2)检测肿瘤细胞中内源性的14-3-3η蛋白；和/或(3)检测表达14-3-3η蛋白的肿瘤细胞；所述药剂用于治疗或预防表达14-3-3η蛋白的肿瘤。在另一优选例中，所述肿瘤包括：胃癌、肝癌、白血病、肾脏肿瘤、肺癌、小肠癌、骨癌、前列腺癌、结直肠癌、乳腺癌、大肠癌、宫颈癌、子宫内膜癌、阴茎癌、小细胞肺癌、黑色素瘤或头颈肿瘤、或肾上腺肿瘤。在另一优选例中，所述的试剂包括芯片、包被抗体的免疫微粒。本专利技术的第八方面，提供了一种检测样品中14-3-3η蛋白的方法，所述方法包括步骤：(1)将样品与本专利技术第一方面所述的抗体接触；(2)检测是否形成抗原-抗体复合物，其中形成复合物就表示样品中存在14-3-3η蛋白。在另一优选例中，在步骤(2)中通过ELISA法进行检测。在另一优选例中，所述样品包括：人或动物组织样品、肿瘤切除样品、脱落细胞样品。在另一优选例中，所述方法用于非诊断性的目的。本专利技术的第九方面，提供了一种试剂盒，所述试剂盒中包括：第一容器，所述第一容器中含有本专利技术第一方面所述的抗体。在另一优选例中，所述试剂盒中还包括：第二容器，所述第二容器中含有细胞裂解试剂。在另一优选例中，所述第一容器中的抗体带有可检测标记。本专利技术的第十方面，提供了一种制备重组多肽的制备方法，该方法包含：(a)在适合表达的条件下，培养本专利技术第四方面所述的宿主细胞；(b)从培养物中分离出重组多肽，所述的重组多肽是本专利技术第一方面所述的抗体。应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附图说明图1显示了108A5H11单克隆抗体在肝癌组织细胞中的染色结果。图2显示了108A5H11单克隆抗体在正常肝细胞中的染色结果。图3显示了108A5H11单克隆抗体在正常肝细胞中的染色结果。图4显示了108A5H11单克隆抗体在正常肝细胞中的染色结果。图5显示了WB检测肝癌病人肝脏样本14-3-3η的电泳结果。图6显示了WB检测肝癌病人肝脏样本14-3-3η的电泳结果。具体实施方式本专利技术人通过深入的研究，经过大量筛选，成功获得一株特异性抗14-3-3η蛋白的单克隆抗体，实验结果表明，该单克隆抗体能够特异地结合14-3-3η蛋白，亲和力强、灵敏度高。该抗体不仅能够用于检测新鲜组织中的14-3-3η蛋白，还可用于福尔马林固定、石蜡包埋的临床组织样本切片的检测。在此基础上，完成了本专利技术。14-3-3是一类磷酸丝氨酸/苏氨酸结合蛋白家族，包括α/β、γ、ε、σ、ξ、θ/τ和η七个亚型。已有研究表明：5种14-3-3蛋白亚型(α/β、γ、ε、σ和ξ)参与了肝癌进程。本专利技术人研究发现：相较于已报道亚型，14-3-3η在肝癌组织中的肿瘤细胞和血管内皮本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗14‑3‑3η蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述抗体具有：(1)重链可变区；和/或(2)轻链可变区；其中，所述重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：SEQ ID NO.:1所示的CDR1，SEQ ID NO.:2所示的CDR2，和SEQ ID NO.:3所示的CDR3；所述轻链可变区包括以下三个互补决定区CDR：SEQ ID NO.:5所示的CDR1'，SEQ ID NO.:6所示的CDR2'，和SEQ ID NO.:7所示的CDR3'。

【技术特征摘要】
1.一种抗14-3-3η蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述抗体具有：(1)重链可变区；和/或(2)轻链可变区；其中，所述重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：SEQIDNO.:1所示的CDR1，SEQIDNO.:2所示的CDR2，和SEQIDNO.:3所示的CDR3；所述轻链可变区包括以下三个互补决定区CDR：SEQIDNO.:5所示的CDR1'，SEQIDNO.:6所示的CDR2'，和SEQIDNO.:7所示的CDR3'。2.一种多核苷酸，其特征在于，它编码如权利要求1所述的抗体。3.一种载体，其特征在于，它含有权利要求2所述的多核苷酸。4.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求3所述的载体或基因组中整合有权利要求2所述的多核苷酸。5.一种免疫偶联物，其特征在于，该免疫偶联物含有：(a)如权利要求1所述的抗体；和(b)选自下组的偶联部分：可检测标记物、药物、毒素、细胞因子、放射性核素、或酶。6.一种药物组合物，其特征在于，它含有：(i)如权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：李远，汤黎明，金铭，仇咏欣，戴易，杨叶，沈健，张建平，宋振云，
申请(专利权)人：南京医科大学，上海卓立生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32