本发明专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种TSNAX基因抑制剂及其在肿瘤中的应用。所述的TSNAX基因的靶向抑制剂，该靶向抑制剂的基因序列为5’‑GGTTTCTAAGAAGCTGTATAC‑3’（SEQ ID No.1），或者与SEQ ID No.1所示的DNA序列具有90%同源性且具有相同或相近功能的DNA序列。TSNAX基因的抑制剂用于制备抗肿瘤药物中的用途，所述肿瘤为脑胶质瘤。通过其在脑胶质瘤中的应用，可以抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭，诱导胶质瘤细胞凋亡，具有针对性的预防和提高胶质瘤治疗效果的优点。
【技术实现步骤摘要】
一种TSNAX基因抑制剂及其在肿瘤中的应用
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种TSNAX基因抑制剂及其在肿瘤中的应用。
技术介绍
脑胶质瘤是恶性程度很高的原发性颅内肿瘤，约占中枢神经系统肿瘤的60%。由于胶质瘤的高增殖率和高侵袭性，导致脑胶质瘤患者预后差，死亡率高，即使经过手术、术后正规的放化疗治疗，仍不能有效延长患者的生存期，通常生存期仅为12-14个月，5年存活率更是低于15%。近年来，随着基因分子水平研究的不断深入，国内外医学界对胶质瘤的发病机制有了新的认识和理解，越来越多的与胶质瘤发生发展密切相关的特定基因被发现，大量临床研究表明，这些特定基因的表达与化疗药物的有效性密切相关。因此，确定胶质瘤的特异性基因，明确其表达状态，并针对该基因研制和开发药物制剂，能够有效的提高胶质瘤的治疗效率，减少药物的毒副作用，具有非常广阔的应用前景。TSNAX(TranslinassociatedfactorX)，是一种与Translin蛋白结合的转录因子。TSNAX位于1q42.2，含有6个外显子。TSNAX参与调控细胞的多种生物学行为，如细胞生长，精子形成，神经元发生，染色质稳定以及肿瘤发生等。TSNAX与Translin结合后可发挥转录促进作用。研究报道TSNAX在子宫内膜癌中高表达，发挥促癌基因作用。目前尚未发现TSNAX在恶性脑胶质瘤中的表达并参与胶质瘤细胞生物学行为的调控。前期，我们应用real-timePCR法检测了TSNAX的表达水平。结果显示，在脑胶质细胞中TSNAX的表达水平显著高于正常星型胶质细胞组，这一结果提示TSNAX可能参与对胶质瘤的发生与发展的功能调控。RNA干扰技术的原理是利用Dicer酶切割RNA分子，形成RNA沉默复合体，靶向结合目标RNA分子进而降解RNA分子的过程。本专利技术希望利用RNA干扰技术研制TSNAX基因的抑制剂，在胶质瘤基因治疗领域发挥作用。目前，TSNAX在胶质瘤发生发展中的作用以及相关机制还未见报道，关于TSNAX在胶质瘤基因治疗方面的应用目前还一片空白。因此，研制一种TSNAX相关的药物成为目前亟待解决的问题。
技术实现思路
鉴于现有技术存在的缺陷，本专利技术提供一种在脑胶质瘤中高表达的特异性TSNAX基因抑制剂，通过其在脑胶质瘤中的应用，可以抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭，诱导胶质瘤细胞凋亡，具有针对性的预防和提高胶质瘤治疗效果的优点。为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案。一种TSNAX基因的靶向抑制剂，该靶向抑制剂的基因序列为5’-GGTTTCTAAGAAGCTGTATAC-3’（SEQIDNo.1），或者与SEQIDNo.1所示的DNA序列具有90%同源性且具有相同或相近功能的DNA序列也在本专利技术的保护范围内。本专利技术进一步提供了该靶向抑制剂能够抑制TSNAX基因表达的shRNA序列，所述shRNA模板序列包括正义链和反义链，所述正义链和反义链分别为。正义链。5’-CACCGGTTTCTAAGAAGCTGTATACTTCAAGAGAGTATACAGCTTCTTAGAAACCTTTTTTG-3’（SEQIDNo.2）。反义链。5’-GATCCAAAAAAGGTTTCTAAGAAGCTGTATACTCTCTTGAAGTATACAGCTTCTTAGAAACC-3’（SEQIDNo.3）。进一步地，本专利技术提供了一种转录上述的shRNA的转录产物，序列为。5’-GGTTTCTAAGAAGCTGTATACTTCAAGAGAGTATACAGCTTCTTAGAAACC-3’（SEQIDNo.4）。一种TSNAX基因的抑制剂用于制备抗肿瘤药物中的用途，所述肿瘤为脑胶质瘤。进一步的，所述抗肿瘤药物为含有治疗量的TSNAX基因的抑制剂和药学上的载体或者赋形剂组成的药物组合物。所述抗肿瘤药物为药学上可接受的剂型，优选注射剂。与现有技术相比，本专利技术有如下有益效果。1）转录因子作为一种具有特殊结构，行使调控基因表达功能的蛋白质分子，在肿瘤发生、发展、浸润和转移中起重要作用，有望成为新型抗肿瘤药物的作用靶点。2）现有技术中虽然已有多个针对转录因子的抗肿瘤先导化合物，但迄今为止成功应用于临床治疗的实例极为少见，目前仅有NF-κB的抑制剂正在进行临床试验，并且其抑制活性的结果多为体外实验结果。转录因子TSNAX是脑胶质瘤特异性高表达的基因，在正常脑组织中表达极低，因此TSNAX基因抑制剂能够达到靶向治疗，减少副作用的目的。3）由于宿主细胞基因在治疗过程中不易产生突变，有效针对宿主基因的靶标，抑制其表达，或长期发挥作用，TSNAX基因具有上述特点，因此针对TSNAX基因制备抑制剂，其使用有望实现长期发挥作用的目的。4）TSNAX基因抑制剂的制备和应用不但能够填补转录因子作为抗肿瘤药物靶点的不足，促进转录因子作为抗肿瘤药物靶点的应用，而且能够实现基因抑制剂的靶向治疗和长期发挥作用的目的。附图说明图1为Real-timePCR方法检测TSNAX在正常脑组织标本和各级别胶质瘤组织标本中的表达情况。与正常脑组织标本相比，TSNAX在胶质瘤组织中表达显著增高，差异有统计学意义（n=5，**P<0.01vs.正常脑组织；##P<0.01vs.I级胶质瘤；△△P<0.01vs.II级胶质瘤；ΨΨP<0.01vs.III级胶质瘤）。图2为Real-timePCR方法检测，应用TSNAX基因抑制剂后，TSNAX在人脑胶质瘤U87和U251细胞中的表达情况。与空白对照组相比，TSNAX在抑制剂组中表达显著下调，差异有统计学意义（n=3，**P<0.01vs.空白对照组）。图3为Transwell检测应用TSNAX基因抑制剂后，人脑胶质瘤U87细胞迁移能力的变化。（n=3，**P<0.01vs.空白对照组）。图4为Transwell检测应用TSNAX基因抑制剂后，人脑胶质瘤U87细胞侵袭能力的变化。（n=3，**P<0.01vs.空白对照组）。图5为流式细胞仪检测应用TSNAX基因抑制剂后，人脑胶质瘤U87细胞凋亡能力的变化。具体实施方式下面结合附图和实施例详细描述本专利技术抗肿瘤物质的制备方法。1.实时定量PCR检测TSNAX的表达。1.1Trizol法提取组织和细胞中的总RNA。1.1.1用冷PBS洗涤收集的细胞（液氮冻存组织应用组织匀浆机以5000rpm转速在0℃粉碎30秒），加入1mlTrizol试剂吹打数次，镜下观察细胞成油滴状（充分裂解），后移入1.5mlEP管中，静置5分钟，使其充分裂解。1.1.2向样品中加入0.2ml氯仿，手动剧烈震荡室温下静置3分钟。1.1.3于4℃12000g离心15分钟，取上层水相到新的EP管中，再加入0.5ml异丙醇，上下颠倒混匀，室温下静置10分钟。1.1.44℃12000g离心15分钟后弃上清，加入1ml75%乙醇。1.1.54℃7500g离心5分钟，室温干燥15分钟后加入40μlDEPC水，样品可冻存于-80℃冰箱。1.2一步染料法qRT-PCR检测TSNAX的表达。应用Trizol提取总RNA：将Trizol直接加在细胞上吹打。室温放置5分钟后，向管中加入0.2ml氯仿，剧烈震荡15秒，室温下放置2-3分钟。4℃，120本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种TSNAX基因的靶向抑制剂，其特征在于，该靶向抑制剂的基因序列为： SEQ ID No.1：5’‑GGTTTCTAAGAAGCTGTATAC‑3’，或者为与SEQ ID No.1所示的DNA序列具有90%同源性且具有相同或相近功能的DNA序列。
【技术特征摘要】
1.一种TSNAX基因的靶向抑制剂，其特征在于，该靶向抑制剂的基因序列为：SEQIDNo.1：5’-GGTTTCTAAGAAGCTGTATAC-3’，或者为与SEQIDNo.1所示的DNA序列具有90%同源性且具有相同或相近功能的DNA序列。2.如权利要求1所述的TSNAX基因的靶向抑制剂，其特征在于，能够抑制抑制TSNAX基因表达的shRNA序列，shRNA模板序列包括正义链和反义链，所述正义链和反义链分别为：正义链：5’-CACCGGTTTCTAAGAAGCTGTATACTTCAAGAGAGTATACAGCTTCTTAGAAACCTTTTTTG-3’；反义链：5’-G...
【专利技术属性】
技术研发人员：薛一雪，刘云会，蔡恒，刘啸白，郑健，刘丽波，王振华，
申请(专利权)人：中国医科大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21
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