【技术实现步骤摘要】
Gd:Fe3O4@RA纳米粒子诱导神经干细胞定向分化为神经元细胞的方法
本专利技术涉及涉及医用生物材料与组织工程
,更具体地涉及一种纳米医用生物材料诱导人干细胞定向分化为神经细胞用于人中枢神经损伤修复的材料和方法。
技术介绍
中枢神经系统是指神经系统的主要部分,包括位于椎管内的脊髓和位于颅腔内的脑。中枢神经损伤所引发的疾病严重影响着人类的健康,且患者众多,主要包括脊髓损伤,创伤性脑损伤,脑中风及帕金森病。期中脊髓损伤的发生率为千分之一,我国目前有约130万脊髓损伤者,且以每年5至7万的速度增长,患者数量呈逐年上升的趋势。脊髓损伤是公认的重度肢体残障群体中最痛苦的一个群体,90%的脊髓损伤者是源自于外伤,高发年龄为20至30岁,多因交通事故、跌落、暴力行为(含自杀)及脊髓疾病而发病。脊髓损伤是一种严重的中枢神经系统损伤,致双下肢或四肢瘫痪,伴随数十种并发症。其治疗一直是世界性难题,目前尚无有效治疗方式。创伤性脑损伤同样是一种外伤性疾病,每年新增大约150万的外伤性脑损伤,因为脑损伤具有多种不同的明确的类型,病灶和基本的损伤范围,而且不同的病理学机制、不同条件二次损伤机制,故到目前为止,外伤性脑损伤还没有针对性的有效治疗手段。脑中风可以分为出血性脑中风,缺血性脑中风和局部血栓等,是世界上第二致死病因,6%的死亡是由于脑中风引起的。期中80%的脑中风为缺血性脑中风,到目前为止缺血性脑中风仍然没有行之有效的治疗方案,目前的治疗方案仅限于血栓溶解和神经保护,但研究表明这些方案只是针对极少的患者才会具有一点效果。帕金森是一类神经退行性疾病,是65岁以上老年人常见 ...
【技术保护点】
1.一种Gd:Fe3O4@RA纳米粒子诱导神经干细胞定向分化为神经元细胞的实验方法,包括以下步骤:在培养板中放入预先用多聚赖氨酸处理的盖玻片,将来源于大鼠胚胎脑海马的原代和传代神经干细胞以1×107L‑1分别接种到培养孔中,神经干细胞完全培养液中去除碱性成纤维细胞生长因子,并添加1.0ml,浓度为1mg/ml的Gd:Fe3O4@RA复合纳米离子和体积分数为5%的胎牛血清促进神经干细胞分化,培养6天后,继续在含有体积分数为5%胎牛血清的神经干细胞培养基中培养6天,待细胞形态发育成熟后取出盖玻片;将载有常规贴壁分化培养和Gd:Fe3O4@RA复合纳米离子诱导分化培养的细胞的盖玻片各分为2组,分别神经元标志物标记的β‑微管蛋白(TUJ1)的免疫组化;随机选取N张片子作为样本,每个样本系统随机取N个视野,N为自然数,以荧光标记为阳性,按照下列公式计算出各个片子神经干细胞分化为神经元细胞的百分率:神经元细胞百分率=(荧光标记阳性细胞数/细胞总数)×100%;将Gd:Fe3O4@RA复合纳米离子分化培养的神经干细胞与常规贴壁分化培养的神经干细胞比较。
【技术特征摘要】
1.一种Gd:Fe3O4@RA纳米粒子诱导神经干细胞定向分化为神经元细胞的实验方法,包括以下步骤:在培养板中放入预先用多聚赖氨酸处理的盖玻片,将来源于大鼠胚胎脑海马的原代和传代神经干细胞以1×107L-1分别接种到培养孔中,神经干细胞完全培养液中去除碱性成纤维细胞生长因子,并添加1.0ml,浓度为1mg/ml的Gd:Fe3O4@RA复合纳米离子和体积分数为5%的胎牛血清促进神经干细胞分化,培养6天后,继续在含有体积分数为5%胎牛血清的神经干细胞培养基中培养6天,待细胞形态发育成熟后取出盖玻片;将载有常规贴壁分化培养和Gd:Fe3O4@RA复合纳米离子诱导分化培养的细胞的盖玻片各分为2组,分别神经元标志物标记的β-微管蛋白(TUJ1)的免疫组化;随机选取N张片子作为样本,每个样本系统随机取N个视野,N为自然数,以荧光标记为阳性,按照下列公式计算出各个片子神经干细胞分化为神经元细胞的百分率:神经元细胞百分率=(荧光标记阳性细胞数/细胞总数)×100%;将Gd:Fe3O4@RA复合纳米离子分化培养的神经干细胞与常规贴壁分化培养的神经干细胞比较。2.根据权利要求1所述的Gd:Fe3O4@RA纳米粒子诱导神经干细胞定向分化为神经元细胞的实验方法,其特征在于:所述Gd:Fe3O4@RA复合纳米离子制备方法如下:首先、将1.88g苯甲酸钠溶液加入100ml蒸馏水中,然后加入含有0.5gFeCl2.4H2O和0.46gGdCl3.2H2O的水溶液中,将25毫升乙腈加入到该溶液中;反应混合物在室温下搅拌至少12小时,得到浅棕色沉淀物;该浅棕色沉淀物为Fe/Gd单源前驱体,经过滤后用乙醚洗涤,真空泵干燥,获得Fe/Gd干燥前驱体;其次、接下...
【专利技术属性】
技术研发人员:王冠男,金丽,代晨,谭文彬,
申请(专利权)人:济宁医学院,
类型:发明
国别省市:山东,37
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