一种基于HPLC、UV-Vis技术的荆芥药材质量综合检测鉴别方法技术

技术编号:20653993 阅读:29 留言:0更新日期:2019-03-23 06:07
一种基于HPLC、UV‑Vis技术的荆芥药材质量综合检测鉴别方法,涉及中药材的检测与鉴别技术领域,该方法是运用层次分析法将HPLC指纹图谱和UV‑Vis含量测定等技术进行综合分析,进行综合分数评价,获得更加可靠的实验数据,为荆芥综合开发利用提供理论参考。

【技术实现步骤摘要】
一种基于HPLC、UV-Vis技术的荆芥药材质量综合检测鉴别方法
本专利技术涉及中药材的指纹图谱
,尤其是荆芥药材指纹图谱的建立方法及其指纹图谱。
技术介绍
荆芥是唇形科荆芥属草本植物,又名假苏、姜芥、四棱杆蒿。据相关文献报道,荆芥的化学成分主要包括挥发油类化合物、黄酮及其苷类、绿原酸、亚麻酸等化学成分,具有镇静、镇痛、解热、抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、止血、抗氧化、抗微生物等作用,具有较高的药用价值。荆芥药性味辛,微温。归肺、肝经。用于感冒,头痛,麻疹,风疹,疮疡初起等,《中国药典》2015年版有记载荆芥饮片具有解表散风,透疹,消疮。等功效。据研究,荆芥中有效成分具有多方面活性。荆芥全草可入药,但是不同部位的荆芥其有效药用成分含量不一样。但目前《中国药典》2015年版只检测胡薄荷酮一种成分的含量,对荆芥药材质量的控制就显得非常薄弱,缺乏完善的质量评价体系,难以达到对荆芥质量的有效控制。其中,指纹图谱质控技术在中药领域被提出并得到广泛认可,其在中药材质控中的应用也越来越多;中药材指纹图谱是指中药材经过适当处理后,采用一定的分析手段和检测仪器得到的,能够标示该中药材特性的图谱,它是现阶段可以较全面地反映中药材内在质量的最有效的手段之一,也得到了国际社会的认可。现代药理研究表明荆芥的有效成分主要包括皂苷类、黄酮类和脂肪油类等,为了全面客观地反映不同产地荆芥的质量,本实验以咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮、黄酮、多糖为指标成分,采用层次分析法及多指标综合评价不同产地荆芥品质情况。
技术实现思路
本专利技术所要解决的问题是提供一种基于HPLC、UV技术的荆芥药材质量综合检测方法,利用该方法可监控荆芥药材不同年限不同药用部位的主要成分的相对含量,并用以鉴别其质量及真伪。为了解决上述技术问题,本专利技术所采用的技术方案是:1.1荆芥药材指纹图谱的建立方法包括如下步骤:(1)供试品溶液的制备:精密称取荆芥粉末(过65目筛)2.0g,置于50ml锥形瓶,精密加入75%甲醇溶液25mL,称定重量,超声提取20min,取出,冷却至室温,再称定重量,用75%甲醇补足减失重量,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液。(2)高效液相色谱检测:吸取上述步骤(1)所得供试品溶液,注入高效液相色谱仪中进行高效液相色谱检测,记录65min内的指纹图谱:其中,指纹色谱条件为:采用AmethystHC-C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.2%磷酸溶液(B),梯度洗脱(0~15min,10%~14%A;15~40min,14%~26%A;40~55min,26%~60%A;55~60min,60%~85%A;60~65min,85%A);检测波长:235nm;流速:1.0mL/min;柱温:30℃。本荆芥药材指纹图谱,由16个共有指纹峰构成,所述指纹图谱的16个共有指纹峰的相对保留时间范围及相对标准偏差如下:表1中药材荆芥中16个共有指纹峰信息其中,从16个主要峰中探明了8个成分,分别为咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮,其中咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮分别对应指纹峰的编号1、2、3、4、8、10、11、14。并分别进行咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮峰面积和量的标准曲线测定,例如可见下表2,然后分别测得荆芥药材中的咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮的含量,mg/g;表2其中确定的8种化学成分的线性关系及线性范围1.2总黄酮及总多糖检测方法的建立,包括如下步骤:(1)总黄酮的含量测定供试品溶液的制备:精确称取不同产地脱脂荆芥药材粉末2g,置100ml锥形瓶中,按料液比1∶40,单位g:ml,加入质量百分比浓度60%乙醇25ml,60℃下提取45min,冷却并过滤(滤渣备用),再将提取液定容于100ml容量瓶中,即得供试品溶液。紫外分光光度计检测:分别定量精密移取供试品溶液,置25mL量瓶中,加5%亚硝酸钠溶液0.75ml摇匀,放置5min后,精确加入质量百分比浓度10%硝酸铝溶液0.75ml摇匀,放置5min。再精确加入1mol/L氢氧化钠溶液10ml,用质量百分比浓度60%乙醇稀释至刻度。于510nm波长下测定吸光度A,从吸光度和浓度的标准曲线中读出浓度,计算出总黄酮含量mg/g;采用芦丁制备吸光度A和浓度的标准曲线;(2)总多糖含量测定供试品溶液的制备:精确称取上述脱黄酮后的滤渣2g,置100ml锥形瓶中,按料液比1∶20,单位g:m1,加入蒸馏水25ml,60℃下提取50min,冷却并过滤,定容于25ml容量瓶,再取适量定容于25m1容量瓶中,即得供试品溶液。紫外分光光度计检测:精密移取供试品溶液适量,置25mL容量瓶中,分别加入质量百分比浓度5%苯酚溶液1mL,迅速摇匀,加入浓硫酸50mL,放10mn,置90℃水浴中保温15min,于490nm波长下测定吸光度A,从吸光度和浓度的标准曲线中读出浓度,计算出总多糖含量mg/g;采用葡萄糖制备吸光度A和浓度的标准曲线;(3)基于层次分析法的中药材荆芥的综合分析层次分析法(AnalyticHierarchyProcess,简称AHP法)是美国运筹学专家T.L.Saaty教授提出的一种将定性与定量分析相结合,多指标决策的分析方法。其基本思路是分析复杂问题所包含的因素及其相互关系,将问题分解为多个层次和多个要素,并在每一层次按照一定准则对该层元素进行比较,再按标度定量化形成判断矩阵。通过计算判断矩阵的最大特征值以及相对应的正交化特征向量,得出该元素对该准则的权重。按照层次分析法原理,计算公式为初始权重系数(wl)=(ai1ai2…aim)1/m归一化权重系数CI=(λmax-m)/(m-1)最大特征根CR=CI/RIi为判断优先矩阵中的列,j为判断优先矩阵中的行,m为指标的个数,RI为判断矩阵的平均随机一致性指标,查相关表可知RI=0.90。其中aij为表2中优先矩阵的数据。采用1~9标度法对10项指标(咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮、总黄酮、总多糖)进行两两比较评判重要性,见表1,各指标的判断优先矩阵见表2。表1目标树各层次评分标准表2指标成对比较的判断优先矩阵计算咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮、总黄酮和多糖的权重系数,分别为0.0496、0.0495、0.0495、0.0495、0.0701、0.0805、0.0925、0.1470、0.1831和0.2281。对求得的各个权重系数进行一致性检验,得一致性指标(CI)=0.0624≠0,计算随机一致性比率(CR)进一步采用加权评分法,对不同产地或/和来源的荆芥进行比较、鉴别和检测,获取品质最佳的荆芥,根据AHP法计算的结果,分别给予咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮、总黄酮和多糖的加权系数,求出综合评分(Fb),根据综合评分,得到效果优劣。b=1,2,3,……,n,代表的是本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于HPLC、UV‑Vis技术的荆芥药材质量综合检测鉴别方法,其特征在于,包括以下步骤:1.1荆芥药材指纹图谱的建立方法包括如下步骤:(1)供试品溶液的制备:精密称取过65目筛荆芥粉末2.0g,置于50ml锥形瓶,精密加入75%甲醇溶液25mL,称定重量,超声提取20min,取出,冷却至室温,再称定重量,用75%甲醇补足减失重量,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液;(2)高效液相色谱检测:吸取上述步骤(1)所得供试品溶液,注入高效液相色谱仪中进行高效液相色谱检测,记录65min内的指纹图谱:其中,指纹色谱条件为:采用Amethyst HC‑C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈(A)‑0.2%磷酸溶液(B),梯度洗脱(0~15min,10%~14%A;15~40min,14%~26%A;40~55min,26%~60%A;55~60min,60%~85%A;60~65min,85%A);检测波长:235nm;流速:1.0mL/min;柱温:30℃;本荆芥药材指纹图谱,由16个共有指纹峰构成,所述指纹图谱的16个共有指纹峰的相对保留时间范围及相对标准偏差如下:表1中药材荆芥中16个共有指纹峰信息...

【技术特征摘要】
1.一种基于HPLC、UV-Vis技术的荆芥药材质量综合检测鉴别方法,其特征在于,包括以下步骤:1.1荆芥药材指纹图谱的建立方法包括如下步骤:(1)供试品溶液的制备:精密称取过65目筛荆芥粉末2.0g,置于50ml锥形瓶,精密加入75%甲醇溶液25mL,称定重量,超声提取20min,取出,冷却至室温,再称定重量,用75%甲醇补足减失重量,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液;(2)高效液相色谱检测:吸取上述步骤(1)所得供试品溶液,注入高效液相色谱仪中进行高效液相色谱检测,记录65min内的指纹图谱:其中,指纹色谱条件为:采用AmethystHC-C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.2%磷酸溶液(B),梯度洗脱(0~15min,10%~14%A;15~40min,14%~26%A;40~55min,26%~60%A;55~60min,60%~85%A;60~65min,85%A);检测波长:235nm;流速:1.0mL/min;柱温:30℃;本荆芥药材指纹图谱,由16个共有指纹峰构成,所述指纹图谱的16个共有指纹峰的相对保留时间范围及相对标准偏差如下:表1中药材荆芥中16个共有指纹峰信息其中,从16个主要峰中探明了8个成分,分别为咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮,其中咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮分别对应指纹峰的编号1、2、3、4、8、10、11、14,并分别进行咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮峰面积和量的标准曲线测定,然后分别测得荆芥药材中的咖啡酸、木犀草苷、槲皮苷、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素、香叶木素、胡薄荷酮的含量,mg/g;1.2总黄酮及总多糖检测方法的建立,包括如下步骤:(1)总黄酮的含量测定供试品溶液的制备:精确称取不同产地脱脂荆芥药材粉末2g,置100ml锥形瓶中,按料液比1∶40,单位g:ml,加入质量百分比浓度60%乙醇25ml,60℃下提取45min,冷却并过滤(滤渣备用),再将提取液定容于100ml容量瓶中,即得供试品溶液。紫外分光光度计检测:分别定量精密移取供试品溶液,置25mL量瓶中,加5%亚硝酸钠溶液0.75ml摇匀,放置5min后,精确加入质量百分比浓度10%硝酸铝溶液0.75ml摇匀,放置5min。再精确加入1mol/L氢氧化钠溶液10ml,用质量百分比浓度60%乙醇稀释至刻度...

【专利技术属性】
技术研发人员:郑玉光马东来温子帅李菁刘露露
申请(专利权)人:河北中医学院
类型:发明
国别省市:河北,13

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