一种适用于提取杨树干种子mRNA提取液配方及其用法组成比例

本发明专利技术属于植物分子生物学领域，涉及一种适用于杨树干种子核酸提取的提取液配方及使用方法。其特征是由以下成分及其含量组成(A组分和B组分)：100ml A组分由以下部分组成：丙酮40ml，甘油10ml，0.5M NaAc 40ml，1mM乙二胺四乙酸二钠10ml；100ml B组分由以下部分组成：盐酸胍35ml，2.5M NaCl20ml，0.5mM乙二胺四乙酸二钠5ml，苯酚10ml，2mM Tris‑cl(PH＝8)30ml。本发明专利技术能够从多年储藏的杨树干种子中提取完整的mRNA，同时本发明专利技术对提取烟草及拟南芥等植物干种子mRNA的提取也有很好的效果。

A Formula and Usage of Extraction Solution Suitable for Extracting Poplar Stem Seed RNA

The invention belongs to the field of plant molecular biology, and relates to an extract formula and a use method suitable for nucleic acid extraction from poplar trunk seeds. It is characterized by the following components and their contents (component A and component B): component A of 100ml consists of acetone 40ml, glycerol 10ml, 0.5M NaAc 40ml, 1 mM EDTA disodium 10ml; component B of 100ml consists of the following components: guanidine hydrochloride 35ml, 2.5M NaCl20ml, 0.5mM EDTA disodium 5ml, phenol 10ml, 2mM Tris Cl (PH=8) 30ml. The invention can extract complete RNA from poplar trunk seeds stored for many years, and has good effect on extracting RNA from tobacco, Arabidopsis and other plant dry seeds.

【技术实现步骤摘要】
一种适用于提取杨树干种子mRNA提取液配方及其用法
：本专利技术属于植物分子生物学领域，涉及一种适用于提取杨树干种子mRNA的提取液配方。
技术介绍
：杨树属于被子植物门(Angiosperms)双子叶植物纲(Dicots)杨柳科(Salicaceae)杨属(Populus)，为落叶乔木。我国原产杨树近60种，除热带外几乎皆有分布，是主要绿化造林树种，并具有很大的工业用途和一定的药用价值。且由于杨树基因组已成功测序，基因背景清晰，已成为林木科研领域最重要的模式树种之一。作为林木领域的模式树种，其种子发育过程同样受到人们的关注，但干的杨树种子中脂类、蛋白以及淀粉的大量存在对传统提取mRNA的方法形成了巨大的挑战，并且在现有文献中并无解决该困难的报道。故对干的杨树种子中提取mRNA的方法亟待解决。
技术实现思路
：本专利技术目的是在于提供提取杨树干种子中mRNA的配方，通过此方法可以快速而高效的提取已储存多年的杨树干种子中的mRNA，以供科研需要，在其他种子如拟南芥和烟草等物种中，该方法同样有效。说明书附图表1不同年份杨树干种子mRNA提取总浓度变化。表2不同年份杨树干种子mRNA提取样本中的230，260，280和320nm波长吸光光度值。图1不同年份杨树干种子mRNA提取样本电泳图。图2烟草和拟南芥干种子mRNA电泳图。具体实施方式：1.干种子mRNA提取液配方如下：A组分：100mlA组分由以下部分组成：丙酮40ml，甘油10ml，0.5MNaAc40ml，1mM乙二胺四乙酸二钠10ml，100mlB组分由以下部分组成：盐酸胍35ml，2.5MNaCl20ml，0.5mM乙二胺四乙酸二钠5ml，苯酚10ml，2mMTris-cl(PH＝8)30ml。2.其使用方法如下：将干的杨树种子放入研钵中，倒入液氮研磨至完全粉状样，将粉状物加入至1.5ml离心管中，加入A组分1ml,-20℃静止30min，之后用移液器小心地将上清液吸出，加入0.75mlB组分，55℃水浴加热15min，取出后加入0.5ml氯仿震荡15min。12000rpm离心5min。3.将上清小心转移至另一离心管中，加入等体积氯仿进行震荡。4.4℃13000rpm离心8min，取上清。重复一次上述步骤。5.上清加入用1/10体积NaAc和二倍体积无水乙醇沉淀15min，13000rpm离心10min。75％酒精洗两次,溶于30ul的水(DEPC水)中。6.检测提取结果。实施效果：⑴通过分光光度法对mRNA含量进行检测。结果表明，不同年份杨树干种子mRNA提取总浓度无显著差异，说明该方法对提取储存多年的杨树种子mRNA的效率基本一致(表1)。⑵通过分光光度法对mRNA纯度进行检测。结果表明，不同年份杨树干种子mRNA提取样本中的230，260，280和320nm波长吸光光度值无显著差异(表2)，电泳结果证明未发生RNA降解现象(图1)，图中左起依次为当年样品、第三年样品和第五年样品。⑶用此方法提取烟草和拟南芥干种子，结果证明该方法同样适用于上述2个物种(图2)，图中泳道左起依次为烟草种子、拟南芥种子。表1不同年份杨树干种子mRNA提取总浓度变化表2不同年份杨树干种子mRNA提取样本中的260/280，260/230和320nm波长吸光光度值本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.干种子mRNA提取液配方如下：A组分：100ml A组分由以下部分组成：丙酮40ml，甘油10ml，0.5MNaAc 40ml，1mM乙二胺四乙酸二钠10ml，100ml B组分由以下部分组成：盐酸胍35ml，2.5M NaCl 20ml，0.5mM乙二胺四乙酸二钠5ml，苯酚10ml，2mM Tris‑cl(PH＝8)30ml。

【技术特征摘要】
1.干种子mRNA提取液配方如下：A组分：100mlA组分由以下部分组成：丙酮40ml，甘油10ml，0.5MNaAc40ml，1mM乙二胺四乙酸二钠10ml，100mlB组分由以下部分组成：盐酸胍35ml，2.5MNaCl20ml，0.5mM乙二胺四乙酸二钠5ml，苯酚10ml，2mMTris-cl(PH＝8)30ml。2.根据权利要求1所述的提取液配方，其使用方...

【专利技术属性】
技术研发人员：曲春浦，许志茹，杨成君，胡彦波，刘关君，
申请(专利权)人：东北林业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23