诱导型调节性T细胞来源的外泌体的应用制造技术

技术编号:20634547 阅读:31 留言:0更新日期:2019-03-23 00:17
本发明专利技术涉及诱导型调节性T细胞来源的外泌体(iTreg exo)的应用,具体为iTreg exo及其制备在治疗类风湿关节炎的药物中的应用,属于生物医药技术领域。本发明专利技术的iTreg exo能够携带miR‑449a‑5p抑制Th1、Th17细胞的增殖和分化,逆转类风湿关节炎小鼠中Treg(抑炎细胞)/Th17(炎症细胞)比例的不平衡,抑制炎症反应,缓解临床症状,可作为治疗类风湿关节炎的新手段,对于进一步认识外泌体在关节炎疾病发生发展以及开发关节炎治疗的新方法起到重要的临床意义。

Application of inducible regulatory T cell-derived exosomes

The invention relates to the application of iTreg exo derived from inducible regulatory T cells, in particular to the application of iTreg exo and its preparation in the treatment of rheumatoid arthritis, and belongs to the field of biomedical technology. The iTreg exo of the invention can inhibit the proliferation and differentiation of Th1 and Th17 cells, reverse the imbalance of Treg (anti-inflammatory cell) / Th17 (inflammatory cell) ratio in rheumatoid arthritis mice, inhibit inflammation response and alleviate clinical symptoms, and can be used as a new method for treating rheumatoid arthritis. It can be used for further understanding the occurrence and development of exosomes in arthritis diseases and for developing the related factors. The new method of arthritis treatment has important clinical significance.

【技术实现步骤摘要】
诱导型调节性T细胞来源的外泌体的应用
本专利技术属于生物医药
,涉及诱导型调节性T细胞来源的外泌体(iTregexo)在制备治疗类风湿关节炎的药物中的应用。
技术介绍
Treg细胞(调节T细胞)是一类调控机体免疫功能的细胞群,能维持免疫系统对自身成分的耐受,使机体保持免疫稳态。这类细胞以表达Foxp3、CD25、CD4为细胞表型特征。在过去20年内,研究已经证实了Treg细胞在感染、肿瘤、器官移植、同种异体胎儿免疫相关疾病方面具有抑制各种途径的病理生理免疫应答的作用。Treg细胞可分为天然产生的自然调节性T细胞(nTregs)和诱导产生的适应性调节性T细胞(aTregs或iTregs)。申请人首次发现TGF-β可诱导外周初始T细胞表达Foxp3,使之分化为诱导型Treg细胞(iTreg)。在表型上,iTreg和nTreg表达相似的分子,比如CD25,CTLA-4,GITR,CCR4,CD62L和Foxp3等。nTreg和iTreg表现出相似的免疫抑制功能。外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的盘状膜囊泡(直径约为50-100nm),主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。最近许多免疫细胞和非免疫细胞释放的外泌体被证明有一系列的免疫系统生理特性,包括抗原呈递,免疫调控和程序化的细胞死亡。许多细胞都产生细胞外囊泡,比如CD4+、CD8+T细胞、B细胞以及树突状细胞(DCs)。这些细胞来源的外泌体已经有证据表明可以介导免疫刺激和免疫调节。外泌体在细胞间的通讯中扮演着重要的角色,可通过内吞被摄入或者外泌体膜蛋白与细胞膜蛋白的作用将蛋白质、miRNA、mRNA和细胞因子在细胞间传递和转移。最近的研究表明,小鼠来源的CD4+CD25+Foxp3+Tcells(Tregs)可释放外泌体并减少CD4+T细胞的增殖和细胞因子的表达,具有免疫抑制功能。T细胞外泌体可以转移miRNAs导致其靶基因的降解或抑制调节受体抗原提呈细胞(APCs)的功能。最近的研究显示,Treg外泌体通过一种miRNA(Let-7d)抑制效应T细胞的表达。类风湿关节炎(RheumatoidArthritis,RA)是以对称性多发性小关节受累为主要临床表现的自身系统性、异质性疾病。受累关节的滑膜、软骨、肌腱等出现慢性进展性破坏。我国RA患病率为0.34%,患病人数超500万,未经正规治疗的RA患者3年致残率高达75%。RA多见中青年,是劳动力丧失的主要原因。且病人几乎终身接受药物治疗并缺乏治愈手段,价格昂贵,给国家和患者带来严重的社会和经济负担。因此,提高RA的诊疗水平,降低RA致残率是国家亟待解决的重大健康和经济问题,也是改善患者生命和生活质量、保护社会劳动力、促进社会和经济发展的重要途经。对于RA等治疗的最高目标是修补特定的免疫缺陷或改变整个免疫反应,以达到在不破坏正常免疫防御的前提下阻止自身免疫反应的破坏作用。目前临床上对RA的治疗方法为支持和对症疗法,采取的治疗方法主要是:使用免疫抑制剂、抗炎疗法和对症治疗等,但均无法治愈RA,甚至可能带来严重的副作用,如继发感染、继发肿瘤等,威胁病人的生命。尽管近年来兴起的生物制剂广泛应用于临床,如针对细胞因子靶向治疗的肿瘤坏死因子α抑制剂,拮抗B细胞的抗CD20抗体,拮抗细胞因子IL-6和IL-6受体的生物制剂,仅具有一定的作用疗效,急需开发有确实疗效且毒副作用亦少的新型药物和技术。外泌体作为药物载体,是区别于普通脂质体的复杂而特殊的蛋白和磷脂双分子层结构,有独特的优势主要体现在:(1)外泌体是人体自身产生的,免疫原性低;(2)外泌体在人体中不易被分解清除,在体内的半衰期长;(3)向细胞运输货物的靶向性好和效率高;(4)外泌体直径很小,可以利用增强渗透滞留效应,选择性渗入到炎症或者肿瘤部位。因此,开发一种诱导型调节性T细胞来源的外泌体(iTregexo)用于制备治疗类风湿关节炎的药物成为可能。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足之处而提供诱导型调节性T细胞来源的外泌体(iTregexo)在制备治疗类风湿关节炎的药物中的应用。为实现上述目的,本专利技术采取的技术方案为:本专利技术提供了iTregexo在制备治疗类风湿关节炎的药物中的应用。作为本专利技术所述应用的优选实施方式,所述iTregexo为携带miR-449a-5p的iTregexo。作为本专利技术所述应用的优选实施方式,所述iTregexo为包裹miR-449a-5pmimics的外泌体或mmu-miR-449a-5p过表达细胞释放的外泌体。在本专利技术中,所述iTregexo用于抑制Th1、Th17细胞的增殖和分化,逆转Treg/Th17比例的不平衡,和抑制炎症反应。作为本专利技术所述应用的优选实施方式,所述药物具有miR-449a-5p的RNAi作用。作为本专利技术所述应用的优选实施方式,所述治疗类风湿关节炎的药物为靶向药物。本专利技术还提供了一种用于治疗类风湿关节炎的药物,所述药物包括iTregexo。作为本专利技术所述药物的优选实施方式,所述药物还包括药用载体。与现有技术相比,本专利技术的有益效果为:本专利技术的iTregexo能够携带miR-449a-5p抑制Th1、Th17细胞的增殖和分化,逆转类风湿关节炎小鼠中Treg(抑炎细胞)/Th17(炎症细胞)比例的不平衡,抑制炎症反应,缓解临床症状,可作为治疗类风湿关节炎的新手段,对于进一步认识外泌体在关节炎疾病发生发展以及开发关节炎治疗的新方法起到重要的临床意义。附图说明图1为实施例1中iTreg的检测图以及iTregexo的鉴定图。其中,A为MouseCD4在加或不加TGF-β和IL-2条件下Treg体外分化的流式检测图像;B为外泌体的透射电镜图像;C为外泌体粒径大小分布的nanosight检测;D为外泌体膜表面标志物Alix、CD63、CD81Westernblot的条带图像;E为外泌体膜表面分子CD63、CD81的流式检测图像。图2为实施例2中iTregexo与CD8+、CD4+T细胞体外共培养的细胞增殖检测图。其中,A为外泌体抑制小鼠CD8+、CD4+T细胞增殖的流式检测图像;B为代表A实验3次独立重复的统计图。图3为实施例2中iTregexo对Th1、Th17细胞体外分化作用的检测图。其中,A为外泌体抑制Th1、Th17细胞体外分化的流式检测图像;B为代表A实验3次独立重复的统计图。图4为实施例3中iTregexo治疗CIA小鼠后的病理检测图。其中,A为CIA小鼠经治疗后小鼠脾脏和淋巴结形态学大小的变化图;B为CIA小鼠经治疗后不同时间点关节炎病理评分统计图;C为CIA小鼠经治疗后处死取膝关节部位的切片HE染色图像;D为CIA小鼠经治疗后处死取后腿爪子经micro-CT扫描的图像。图5为实施例3中iTregexo治疗CIA小鼠后的Th17/Treg比例的检测图。其中,A为CIA小鼠经治疗后Th17/Treg(圈中CD4+细胞)比例的流式检测图像;B为代表A实验3次独立重复的Th17/Treg统计图。图6为实施例4中iTregexomiRNA测序以及生物信息学分析图。其中,A为体外加或不加TGF-β诱导的Treg细胞来源的外泌体miRNA测序热图;本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.iTreg exo在制备治疗类风湿关节炎的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.iTregexo在制备治疗类风湿关节炎的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述iTregexo为携带miR-449a-5p的iTregexo。3.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述iTregexo为包裹miR-449a-5pmimics的外泌体或mmu-miR-449a-5p过表达细胞释放的外泌体。4.如权利要求1-3任一项所述的应用,其特征在于,所述iTregexo用于抑制Th...

【专利技术属性】
技术研发人员:郑颂国陈敬荣王菊华
申请(专利权)人:中山大学附属第三医院中山大学肝脏病医院
类型:发明
国别省市:广东,44

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