一种用于构建小鼠顺铂内耳损伤模型的联合制剂及其构建的模型制造技术

本发明专利技术公开了一种用于构建小鼠顺铂内耳损伤模型的联合制剂，所述联合制剂包括顺铂注射液和速尿注射液，所述顺铂注射液中的顺铂与用于建立内耳损伤模型的实验小鼠重量比为0.4‑1mg/kg，所述速尿注射液中的速尿与用于建立内耳损伤模型的实验小鼠重量比为200‑400mg/kg。本发明专利技术还提供利用该联合制剂构建小鼠顺铂内耳损伤模型的方法。本发明专利技术的联合制剂，能够构建出稳定、可靠的小鼠顺铂内耳损伤模型，并且构建方法简单、易操作。

A combined preparation for the establishment of cisplatin-induced inner ear injury in mice and its model

The invention discloses a joint preparation for constructing a model of inner ear injury induced by cisplatin in mice. The joint preparation comprises cisplatin injection and furosemide injection. The weight ratio of cisplatin in the cisplatin injection to the experimental mice used for establishing the model of inner ear injury is 0.4 1 mg/kg, and the weight ratio of furosemide in the furosemide injection to the experimental mice used for establishing the model of inner ear injury is 200. 400 mg/kg. The invention also provides a method for constructing an inner ear injury model of mice with cisplatin by using the combined preparation. The combined preparation of the invention can construct a stable and reliable mouse cisplatin inner ear injury model, and the construction method is simple and easy to operate.

【技术实现步骤摘要】
一种用于构建小鼠顺铂内耳损伤模型的联合制剂及其构建的模型
本专利技术涉及医学领域，更具体地说，涉及一种用于构建小鼠顺铂内耳损伤模型的联合制剂及其构建的模型。
技术介绍
顺铂是临床常用的抗肿瘤药物之一，对常见的多种肿瘤，如膀胱癌、睾丸癌、子宫颈癌、肺癌和头颈癌等都具有较好的抗肿瘤效果。但在临床用药过程中，有较高比例的患者出现了耳鸣、听力下降和头晕等不良反应。顺铂的耳毒性和肾毒性、神经毒性一起，已经成为限制其临床应用的主要原因之一。为了了解顺铂引起的内耳损伤机制，寻找有效防治顺铂耳毒性的药物或治疗方法，人们利用动物构建模型来寻找答案；而小鼠为应用最广泛的实验动物之一。如果能够建立一种稳定的小鼠顺铂内耳损伤模型，就可以利用已知的小鼠基因库知识，从分子水平研究顺铂所导致的内耳细胞死亡(凋亡)的机制，并可能寻找到主导的凋亡调控基因，为下一步的基因防治铂类的内耳损伤提供重要依据。为此，国内外研究者做了许多尝试，试图建立一个可靠的小鼠顺铂耳毒性模型。但是，由于小鼠体积小、体重轻等原因，小鼠对大剂量顺铂的耐受性很差，当采用大剂量顺铂单次注射或中等剂量顺铂多次注射法时，多数小鼠在注射顺铂后因为严重的肾毒性和神经毒性反应而死亡。正因如此，小鼠顺铂内耳损伤模型的建立多年来一直是国内、外学者们试图攻克的难题之一。
技术实现思路
针对现有技术无法建立稳定、可靠小鼠顺铂内耳损伤的模型，本专利技术提供一种用于构建稳定、可靠的小鼠顺铂内耳损伤模型的联合制剂，同时本专利技术还提供利用该联合制剂构建小鼠顺铂内耳损伤模型的方法。一种用于构建小鼠顺铂内耳损伤模型的联合制剂，所述联合制剂包括顺铂注射液和速尿注射液，所述顺铂注射液中的顺铂与用于建立内耳损伤模型的实验小鼠重量比为0.4-1mg/kg，所述速尿注射液中的速尿与用于建立内耳损伤模型的实验小鼠重量比为200-400mg/kg。一种利用上述联合制剂构建小鼠顺铂内耳损伤模型的方法，包括如下步骤：给实验小鼠腹腔注射速尿注射液，注射速尿的剂量为200-400mg/kg体重；0.5-1小时后，再腹腔注射顺铂注射液，注射顺铂的剂量为0.4-1mg/kg体重；注射顺铂注射液的当天至注射后的3-7天内，每天注射1-2次0.8-1mL的质量百分数为0.9％的氯化钠注射液，并每天2-5次用四环素眼膏涂抹实验小鼠的眼睑；得到模型；所述实验小鼠为听力正常的成年鼠。本专利技术的联合制剂，通过顺铂和速尿的联用以及确定二者合适的剂量，避免因顺铂的肾毒性和神经毒性而导致的小鼠死亡，从而能够成功的构建稳定、可靠的小鼠顺铂内耳损伤模型；次外，利用该联合制剂构建小鼠顺铂内耳损伤模型的方法具有简单、操作方便的优点。附图说明图1是实施例1的各组小鼠听觉脑干电反应测听各频率平均听阈值曲线图；图2是实施例1的实施例1的各组小鼠DPOAE检测(4kHz)的数据曲线图；图3是实施例1的实施例1的各组小鼠DPOAE检测(8kHz)的数据曲线图；图4是实施例1的实施例1的各组小鼠DPOAE检测(12kHz)的数据曲线图；图5是实施例1的实施例1的各组小鼠DPOAE检测(16kHz)的数据曲线图；图6是实施例1的实施例1的各组小鼠DPOAE检测(20kHz)的数据曲线图；图7是实施例1的实施例1的各组小鼠DPOAE检测(24kHz)的数据曲线图；图8是实施例1的B组小鼠平均耳蜗数据图；图9是实施例1的A组小鼠平均耳蜗数据图；图10是实施例1的各组小鼠耳蜗毛数据对比图(耳蜗顶回)；图11是实施例1的各组小鼠耳蜗毛数据对比图(耳蜗底回上)；图12是实施例1的各组小鼠耳蜗毛数据对比图(耳蜗底回下)；图13是实施例1的各组小鼠全耳蜗基底膜铺片图。具体实施方式一种用于构建小鼠顺铂内耳损伤模型的联合制剂，所述联合制剂包括顺铂注射液和速尿注射液，所述顺铂注射液中的顺铂与用于建立内耳损伤模型的实验小鼠重量比为0.4-1mg/kg，所述速尿注射液中的速尿与用于建立内耳损伤模型的实验小鼠重量比为200-400mg/kg。本文中的mg/kg的值，是指注射的药物中顺铂和速尿与小鼠体重的比例，如顺铂注射液中的顺铂与用于建立内耳损伤模型的实验小鼠重量比5mg/kg，可以做如下理解：将小鼠重量用kg计量，然后对应1kg重量的老鼠注射5mg的顺铂，对应的结合所注射的顺便注射液的质量百分数去换算注射液的体积。顺铂，又名顺二氯二氨基铂、顺双氯双氨络铂、顺-二氯二氨合等，分子式为：Cl2H4N2Pt，CAS号为：15663-27-1，临床用于卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、肺癌、鼻咽癌、食道癌、恶性淋巴瘤、头颈部鳞癌、甲状腺癌及成骨肉瘤等多种实体肿瘤均能显示疗效。速尿，又名呋喃苯胺酸、呋塞米、腹安酸、利尿磺胺、利尿灵、速尿灵；子式C12H11ClN2O5S，CAS号：54-31-9，临床上用于治疗心脏、肾性水肿，肝硬变腹水、降压症状。本专利技术中，进一步的方案为，所述顺铂注射液中的顺铂与用于建立内耳损伤模型实验小鼠重量比为1mg/kg，所述速尿注射液中的速尿与用于建立内耳损伤模型的实验小鼠重量比为200mg/kg。一种利用上述联合制剂构建小鼠顺铂内耳损伤模型的方法，给实验小鼠腹腔注射速尿注射液，注射速尿的剂量为200-400mg/kg体重(该处的理解可参照具体实施方式第1段的对应内容)；0.5-1小时后，再腹腔注射顺铂注射液，注射顺铂的剂量为0.4-1mg/kg体重；注射顺铂注射液的当天至注射后的3-7天内，每天注射1-2次0.8-1mL的质量百分数为0.9％的氯化钠注射液，并每天2-5次用四环素眼膏涂抹实验小鼠的眼睑；得到模型；所述实验小鼠为听力正常的成年鼠。本专利技术中，进一步的方案为，注射速尿的剂量为200mg/kg体重，注射顺铂的剂量为1mg/kg体重，注射顺铂注射液的当天至注射后的3天内，每天注射1次1mL的质量百分数为0.9％的氯化钠注射液，并每天2次用四环素眼膏涂抹实验小鼠的眼睑。为了观察小鼠是否受顺铂的损伤过重而可能导致死亡的情况，可以在注射氯化钠注射液和涂抹四环素眼膏结束后，继续饲养小鼠10天，在这期间进行观察，得到模型。对于实验小鼠的选择，并无特殊的限制，可选用实验室常用的小鼠；如采用年龄为8-12周、体重为25-33g的小鼠。本专利技术中，为了更好的验证模型的效果和对比，可采用正常小鼠做对照组。为了避免小鼠在注射过程中挣扎而引起不必要的损伤，在给实验小鼠注射速尿注射液前将小鼠全身麻醉，在注射速尿注射液和顺铂注射液的过程中保持小鼠处于麻醉状态，在注射顺铂注射液后继续将小鼠麻醉3-4小时。为了保证小鼠的健康，在小鼠处于麻醉状态中保持小鼠处于正常体温的状态。对小鼠进行麻醉，对麻醉剂的选择并无特别的限制，可以选用常用的麻醉剂，如异氟醚。为了更好的说明本专利技术，下面通过实施例来进一步说明和论证本专利技术的进步性。实施例11.1实验动物选用26只听力正常的成年健康CBA/CAJA雄性大鼠(JacksonLab，U.S.A.)，年龄8-12周，体重25-33g。1.2动物分组和实验方案20只小鼠按照随机数字法平分为2组，每组10只；(1)A组小鼠气体吸入异氟醚全身麻醉(4％异氟醚诱导，1.0-1.5％异氟醚维持)后，先行200mg/kg速尿(PhoenixPharmaceuticalINC.StJo本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于构建小鼠顺铂内耳损伤模型的联合制剂，其特征在于：所述联合制剂包括顺铂注射液和速尿注射液，所述顺铂注射液中的顺铂与用于建立内耳损伤模型的实验小鼠重量比为0.4‑1mg/kg，所述速尿注射液中的速尿与用于建立内耳损伤模型的实验小鼠重量比为200‑400mg/kg。

【技术特征摘要】
1.一种用于构建小鼠顺铂内耳损伤模型的联合制剂，其特征在于：所述联合制剂包括顺铂注射液和速尿注射液，所述顺铂注射液中的顺铂与用于建立内耳损伤模型的实验小鼠重量比为0.4-1mg/kg，所述速尿注射液中的速尿与用于建立内耳损伤模型的实验小鼠重量比为200-400mg/kg。2.根据权利要求1所述的用于构建小鼠顺铂内耳损伤模型的联合制剂，其特征在于：所述顺铂注射液中的顺铂与用于建立内耳损伤模型实验小鼠重量比为1mg/kg，所述速尿注射液中的速尿与用于建立内耳损伤模型的实验小鼠重量比为200mg/kg。3.一种利用权利要求1所述联合制剂构建小鼠顺铂内耳损伤模型的方法，其特征在于包括如下步骤：给实验小鼠腹腔注射速尿注射液，注射速尿的剂量为200-400mg/kg体重；0.5-1小时后，再腹腔注射顺铂注射液，注射顺铂的剂量为0.4-1mg/kg体重；注射顺铂注射液的当天至注射后的3-7天内，每天注射1-2次0.8-1mL的质量百分数为0.9％的氯化钠注射液，并每天2-5次用四环素眼膏涂抹实验小鼠的眼睑；得到模型；所述实验小鼠为听力正常的成年鼠。4.根据权利要求3所述联合制剂构建小鼠顺铂内耳损伤模型的方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：李永奇，杨钦泰，
申请(专利权)人：中山大学附属第三医院中山大学肝脏病医院，
类型：发明
国别省市：广东,44