一种胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)检测试剂盒及生产工艺制造技术

本发明专利技术的一种胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)检测试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，试剂R1包括如下成分：

【技术实现步骤摘要】
一种胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)检测试剂盒及生产工艺
本专利技术涉及一种胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)检测试剂盒，属于诊断试剂盒

技术介绍
胃蛋白酶是一种消化性蛋白酶，由胃部中的胃粘膜主细胞所分泌，功能是将食物中的蛋白质分解为小的肽片段。胃蛋白酶原(PG)是胃液中胃蛋白酶的无活性前体，分为PGⅠ和PGⅡ，胃蛋白酶原经胃酸或者胃蛋白酶刺激后形成胃蛋白酶。PGⅠ来源于胃底腺的主细胞和颈粘液细胞，PGⅡ则来源与全胃腺(胃贲门腺、胃底腺、胃窦幽门腺)和远端十二指肠Brunner氏腺，前列腺和胰腺也产生少量PGⅡ，胃黏膜合成的PGⅡ约为总量的25％。合成后的PG大部分进入胃腔，在酸性胃液作用下活化成胃蛋白酶，只有少量(约1％)PG透过胃粘膜毛细血管进入学循环。血清PG水平反应了不同部位胃粘膜的形态和功能。PGⅠ是检测胃泌酸腺细胞功能的指针，PGⅠ升高意味着胃酸分泌增多，PGⅠ的降低意味着胃酸分泌减少或胃粘膜腺体萎缩。PGⅡ与胃底粘膜病变的相关性较大(相对于胃窦粘膜)，其升高与胃底腺管萎缩、肠上皮化生或假幽门腺化生、异型增生有关。PGⅠ/PGⅡ比值进行性降低与胃黏膜萎缩进展相关。联合测定胃蛋白酶原PGⅠ和PGⅠ/PGⅡ比值可以代替胃底腺粘膜“血清学活检”的作用。是检查手段的革命(定量检测，减少活检痛苦和防止组织取样错漏)。目前现有技术中对于胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)的测定需要比较复杂的配液过程，并且存放时间受环境条件影响较大，长期存放的稳定性差，灵敏度差，测量重复性低。
技术实现思路
为克服现有技术的不足，本专利技术提出一种胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)检测试剂盒，即开即用，无需配制，检测灵敏度高，测量重复性好，并且长期存放的稳定性较好。为实现上述目的，本专利技术的一种胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)检测试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，其中：试剂R1包括如下成分：试剂R2包括如下成分：进一步地，试剂R1包括如下成分：试剂R2包括如下成分：进一步地，在试剂R2中，胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)抗体与羧基胶乳微球偶联，羧基胶乳微球的粒径为20nm～500nm。进一步地，羧基胶乳微球的粒径为220nm。进一步地，在试剂R2中，胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)抗体采用抗人类胃蛋白酶原Ⅰ(小鼠)单克隆抗体。进一步地，在试剂R2中，表面活性剂包括聚氧乙烯基联苯乙烯化苯基醚、乙氧基化脂肪酸甲酯的磺酸盐。进一步地，试剂R1与试剂R2的体积比为27:5。本专利技术检验血清胃蛋白酶原Ⅰ的原理是：样品中的胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)和被乳状液粒吸附的抗体发生抗原抗体反应，即通过使用与抗体共价结合的胶乳颗粒予以增强免疫沉淀反应，形成免疫复合物。在波长700nm处检测浊度的变化，浊度的变化程度与样品中胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)的含量成正比，通过计算得出样品中的胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)含量。三羟甲基氨基甲烷缓冲液作为一种生物缓冲剂，为反应提供稳定的、适宜的PH环境。氯化钠提供一个离子环境，同时能够增加试剂中盐离子效应。聚乙二醇20000是环氧乙烷水解产物的聚合物，属于一种非离子型的水溶性聚合物，具有水溶性、不挥发性、生理惰性、温和性等特性，作为分散剂和乳化剂，提高配制溶液和反应体系的均匀性和稳定性，提高抗原抗体结合物的反应浊度，提高试剂的灵敏度。吐温20是一种表面活性剂，配合聚乙二醇20000，能够增加乳化剂的稳定性，提高反应体系的反应效率。海藻糖是生物活性物质的稳定剂和保护剂，可以提高胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)抗体和胶乳微球偶联复合物的结合效率和稳定性。叠氮化钠作为防腐剂能够防止溶液中微生物生长，保持试剂的稳定性。聚氧乙烯基联苯乙烯化苯基醚作为一种低泡性表面活性剂，分散于各种原料中，具有良好的润湿性、渗透性。乙氧基化脂肪酸甲酯的磺酸盐具有极佳的分散力，是一种乳化、分散、净洗、耐碱各项指标均衡的全能型表面活性剂。胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)抗体可以与血清样本中的胃蛋白酶原Ⅰ特异性结合形成抗原抗体复合物，通过测定复合物的反应浊度可以计算出样本中胃蛋白酶原Ⅰ的浓度。本专利技术还提出一种胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)检测试剂盒的生产工艺，包括以下步骤：S1：配制试剂R1，精确称量试剂R1的各组分，加入溶剂中搅拌，搅拌均匀后静置，过滤并除去杂质；S2：以50mmol/L的MES缓冲液溶解胶乳微球活化剂，配制710mg/ml的胶乳微球活化剂，在聚苯乙烯胶乳微球中加入胶乳微球活化剂进行活化，在25℃下搅拌反应45min，得到活化的胶乳微球溶液；S3：以50mmol/L的MES缓冲液稀释胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)抗体，将胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)抗体稀释液缓慢滴加到步骤S2中制得的胶乳微球溶液中，在25℃下搅拌反应2h，制得偶联胃蛋白酶原I(PGⅠ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液；S4：在步骤S3中制得的偶联胃蛋白酶原I(PGⅠ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液中加入规定量的表面活性剂、防腐剂、稳定剂、缓冲液，混匀搅拌2h后制得试剂R2；S5：对试剂R1和试剂R2分别进行半成品检验；S6：清洗包装器具，烘干，分别灌装试剂R1和试剂R2；S7：包装，成品检验，入库存储。进一步地，在步骤S3中，向制得的偶联胃蛋白酶原I(PGⅠ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液中加入50g/L的封闭剂，在25℃下封闭60min。进一步地，步骤S1～步骤S4和步骤S6均在十万级净化车间内进行。在步骤S3中未偶联的游离抗体不需要通过高速离心机多次离心去除，仅需通过特殊的封闭处理即可实现试剂的稳定，大大简化了操作步骤，减小了包被的批间差，提高了包被效率。本专利技术的一种胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)检测试剂盒，即开即用，无需配制，检测灵敏度高，测量重复性好，并且长期存放的稳定性较好。附图说明下面结合附图对本专利技术作进一步描写和阐述。图1是本专利技术首选实施方式的胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)检测试剂盒的标准曲线；图2是本专利技术首选实施方式的胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)检测试剂盒的测定值与理论值的线性范围示意图；图3是本专利技术首选实施方式的胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)检测试剂盒的测定值与理论值的样本相关性示意图。具体实施方式下面将结合附图、通过对本专利技术的优选实施方式的描述，更加清楚、完整地阐述本专利技术的技术方案。实施例1：胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)检测试剂盒的生产，包括以下步骤：S1：对试剂R1各组分进行称量，加入溶剂中搅拌，搅拌均匀后静置，过滤并除去杂质，其中各组分的含量如下：S2：以50mmol/L的MES缓冲液溶解胶乳微球活化剂，配制710mg/ml的胶乳微球活化剂，在10g聚苯乙烯胶乳微球中加入6ml胶乳微球活化剂进行活化，在25℃下搅拌反应45min，得到活化的胶乳微球溶液；S3：以50mmol/L的MES缓冲液稀释胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)抗体，制得2mg/ml的胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)抗体稀释液，将胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)抗体稀释液缓慢滴加到步骤S2中制得的胶乳微球溶液中，控制胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)抗体与聚苯乙烯胶乳微球质量比为0.03:1，在25℃下搅拌反应2h，制得偶联胃蛋白酶原I(PGⅠ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液；S4：向制得的偶联胃蛋白酶原I(PGⅠ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液中加入50g/L的封闭剂，在25℃下封闭60min；S5：在步骤S4中制得的偶联胃蛋白酶原I(PGⅠ)抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)检测试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，其中：试剂R1包括如下成分：

【技术特征摘要】
1.一种胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)检测试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，其中：试剂R1包括如下成分：试剂R2包括如下成分：2.如权利要求1所述的一种胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)检测试剂盒，其特征在于，试剂R1包括如下成分：试剂R2包括如下成分：3.如权利要求1所述的一种胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)检测试剂盒，其特征在于，在试剂R2中，所述胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)抗体与羧基胶乳微球偶联，所述胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)抗体与羧基胶乳微球的质量比为0.03:1，所述羧基胶乳微球的粒径为20nm～500nm。4.如权利要求3所述的一种胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)检测试剂盒，其特征在于，所述羧基胶乳微球的粒径为220nm。5.如权利要求1所述的一种胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)检测试剂盒，其特征在于，在试剂R2中，所述胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)抗体采用抗人类胃蛋白酶原Ⅰ(小鼠)单克隆抗体。6.如权利要求1所述的一种胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)检测试剂盒，其特征在于，在试剂R2中，所述表面活性剂包括聚氧乙烯基联苯乙烯化苯基醚、乙氧基化脂肪酸甲酯的磺酸盐。7.如权利要求1所述的一种胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1与试剂R2的体积比为27:5。8.一种用于生产权利要求1-7任意项所述胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)检测试剂盒的生产工艺，其特征在于，包括以下步骤：S1...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾宪亮，路爱成，宣善浪，
申请(专利权)人：南京澳林生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32