DBN1蛋白在制备神经变性疾病诊断药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了DBN1蛋白在制备神经变性疾病诊断药物中的应用，诊断中的应用包括神经变性疾病的早期诊断和神经损伤严重程度的评估；诊断和评估方法是通过测定外周血血浆中DBN1蛋白的含量进行，神经变性疾病患者的DBN1蛋白有明显的增加表达情况；将DBN1蛋白作为神经变性疾病标志蛋白，通过酶联免疫定量试剂盒检测患者血液中的DBN1蛋白含量，来评估临床症状以及临床检查改变出现之前进行判断是否患有神经变性疾病并监控神经损伤程度；整体上检测手段方便，不会对患者造成二次伤害，这对相关疾病的预测、预防和评估具有重要的临床意义和社会经济效益。

【技术实现步骤摘要】
DBN1蛋白在制备神经变性疾病诊断药物中的应用
本专利技术涉及医药生物
，具体涉及到DBN1蛋白在制备神经变性疾病诊断药物中的应用。
技术介绍
神经变性病(NeurodegenerativeDiseases)是指由于神经元变性、凋亡所导致的神经系统退行性疾病。根据临床症状和病理解剖分为以下几组：1、姿势和运动异常综合征，如帕金森病，多系统萎缩2、进行性痴呆综合征，如阿尔茨海默病，额颞叶痴呆3、进行性痴呆伴其他神经性异常，如Huntington舞蹈病，皮质基底节变性4、进行性共济失调综合征，如脊髓小脑共济失调5、缓慢进展的肌无力和肌萎缩综合征，如运动神经元病6、感觉和运动障碍，如遗传性运动感觉神经病(CMT)7、进行性失明或眼外肌麻痹，如青光眼，遗传性视神经病8、以神经感觉性耳聋为特点的综合征，如遗传性听力丧失伴神经系统萎缩有研究发现Tau蛋白通过调节神经元微管的动态稳定性在轴突传导过程中发挥重要作用，Tau蛋白病变在视网膜疾病以及阿尔茨海默病(AD)等神经变性疾病中已有广泛研究，但也都局限于视网膜组织以及脑脊髓液等中的研究。其在神经变性疾病患者脑或视网膜组织中以及在脑脊髓液(CSF)中的表达量显著上升。检测在脑或视网膜组织中的表达需要病理标本，而脑脊髓液也需要腰穿来获取，对患者造成负担，临床应用存在困难。另一方面青光眼作为视网膜神经变性疾病，只能临床检查发现和评估视神经损伤程度，目前尚无有效生物标志物用于诊断与评估。但是，也有些患者因为屈光介质浑浊等原因，无法精确的观察眼底并准确的评估神经损伤程度。更为严重的是，因为早期没有任何症状，很多患者被医院诊断为青光眼时已有30-50％视网膜神经节细胞已丢失。能开发一个可应用于早期诊断和评估神经损伤的生化学标记物，对临床的意义重大。研究发现脑发育调节蛋白Drebrin(亦称DBN1)作为神经骨架蛋白actin调节蛋白，在中枢神经系统中发挥重要的作用，并与神经变性疾病的发生发展相关。因此，本领域中存在人群中诊断与神经变性疾病风险的需要，即存在对患有所述疾病的风险的评估和指导精准的治疗方案。所述疾病严重程度的评估和/或所述疾病预估风险的需要，提供一种在检测手段上方便检测，不会对患者造成二次伤害的检测方法的需要。这对相关疾病的预测、预防具有重要的临床意义和社会经济效益。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的在于提供DBN1蛋白的新用途，以提供一种方便快捷的诊断神经变性的方法以及药物。为实现上述目的，本专利技术提供了DBN1蛋白在诊断神经变性疾病的药物的制备中的用途，所述诊断中的应用包括神经变性疾病的早期诊断和神经损伤严重程度的评估，所述诊断通过测定外周血血浆中DBN1蛋白的含量进行。在本专利技术的实施方案中，其中神经变性疾病包括姿势和运动异常综合征，其中包括帕金森病，多系统萎缩；进行性痴呆综合征，其中包括阿尔茨海默病，额颞叶痴呆；进行性痴呆伴其他神经性异常，其中包括亨廷顿舞蹈病，皮质基底节变性；进行性共济失调综合征，其中包括脊髓小脑共济失调；缓慢进展的肌无力和肌萎缩综合征，其中包括运动神经元病；感觉和运动障碍，其中包括遗传性运动感觉神经病(CMT)；进行性失明或眼外肌麻痹，其中包括青光眼，遗传性视神经病；以神经感觉性耳聋为特点的综合征，其中包括遗传性听力丧失伴神经系统萎缩；以及其他神经变性疾病。在本专利技术的实施方案中，其中进行性失明特别包括青光眼疾病中的原发性闭角型青光眼和原发性开角型青光眼。在本专利技术的实施方案中，其中所述诊断通过酶联免疫定量检测试剂盒进行检测。在本专利技术的实施方案中，其中所述药物包括试剂盒。在本专利技术的实施方案中，其中所述试剂盒为酶联免疫试剂盒。在本专利技术的实施方案中，其中所述试剂盒中包含所述DBN1蛋白的抗体。在本专利技术的实施方案中，其中所述抗体中包含捕获抗体A和/或酶标检测抗体B。在本专利技术的实施方案中，其中所述试剂盒还包括预包被板、标准品、包被缓冲液、样品稀释液、封闭液、辣根过氧化物酶、洗脱液，显色剂。本专利技术在研究基础上发现DBN1蛋白在中枢神经系统中发挥重要的作用，在神经系统发生变性，血液中的DBN1蛋白的表达会增加，以此基础，通过实验论证，神经变性疾病的患者的DBN1蛋白均有明显的增加表达情况，将DBN1蛋白作为神经变性疾病标志蛋白，通过酶联免疫定量检测试剂盒检测患者血液中的DBN1蛋白含量，来诊断患者是否患有神经变性疾病，整体上检测手段方便检测，不会对患者造成二次伤害，这对相关疾病的预测、预防具有重要的临床意义和社会经济效益。附图说明图1为动物模型视神经夹闭损伤3d，7d，14d及对照组视网膜的WesternBlot实验结果；图2为动物模型视神经夹闭损伤3d，7d，14d及对照组视网膜的WesternBlot实验定量分析结果；图3为视神经夹闭损伤动物模型的血清中DBN1蛋白表达量变化图；图4为经细胞毒性试剂NMDA处理的Neuro-2A细胞及对照组DBN1蛋白的免疫荧光染色的定量分析结果；图5为开青、闭青、青睫患者在将视神经纤维层厚度分为八个象限后在每个象限的厚度；图6为青光眼患者及对照组血浆DBN1蛋白表达水平；图7为青光眼患者及对照组血浆Tau表达水平；图8为DBN1蛋白阳性及阴性患者视神经纤维层厚度的八个象限中，正常范围、临界值及明显变薄的占比；图9为DBN1蛋白表达量与视神经纤维层厚度的Logistic回归分析图。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术做进一步的详述。本专利技术涉及一种新发现，即DBN1蛋白在神经变性疾病中高表达，并经细胞分泌，进入血液循环，使神经变性疾病患者血清中该蛋白水平升高。因此DBN1蛋白可以作为新的神经变性疾病血清标记物，可用于神经变性疾病的筛查、追踪、早期诊断、治疗指导和预后判断。DBN1蛋白的氨基酸序列如序列表SEQIDNO：1所示。本专利技术提供的检测神经变性疾病的试剂盒，包括特异性识别DBN1蛋白的捕获抗体A，该捕获抗体A被包被在预包被板上。本专利技术基于抗DBN1蛋白特异性抗体，开发出利用ELISA检测技术检测血清DBN1蛋白抗原的试剂盒，此试剂盒适用于神经变性疾病的筛查、追踪、早期诊断和指导治疗与判断预后。本专利技术提供的检测DBN1蛋白抗原的ELISA试剂盒特征是，主要包括有：包被有捕获DBN1蛋白特异性抗体的预包被板、酶标检测抗体、标准品、包被缓冲液、样品稀释液、封闭液、辣根过氧化物酶、洗脱液，显色剂。捕获抗体与检测抗体均可与DBN1蛋白抗原结合。实施例1公开抗原的纯化以及抗体的制备过程；1.表达、纯化及鉴定DBN1蛋白：DBN1蛋白是从前期研究中的经过基因工程改造过的酿酒酵母，利用半乳糖诱导过量表达，琼脂糖亲和介质(谷胱甘肽)分离纯化，并经过Western-Blotting鉴定。2.血清样品的准备：全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟左右，取上清即可立即检测；或进行分装，并将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。解冻后的样品应再次离心，然后检测。所检测样品中不能含有NaN3，因为NaN3抑制辣根过氧化物酶(HRP)的活性。3.ELISA法各种缓冲液及试剂的配制方法：(1)包被缓冲液：0.05MpH9.6的Na2CO3-NaHCO3(2)样品稀释液：pH7.4PB本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.DBN1蛋白在制备神经变性疾病诊断药物中的应用，所述诊断中的应用包括神经变性疾病的早期诊断和神经损伤严重程度的评估，所述诊断通过测定外周血血浆中DBN1蛋白的含量进行。

【技术特征摘要】
1.DBN1蛋白在制备神经变性疾病诊断药物中的应用，所述诊断中的应用包括神经变性疾病的早期诊断和神经损伤严重程度的评估，所述诊断通过测定外周血血浆中DBN1蛋白的含量进行。2.如权利要求1所述的用途，其中神经变性疾病包括姿势和运动异常综合征，其中包括帕金森病，多系统萎缩；进行性痴呆综合征，其中包括阿尔茨海默病，额颞叶痴呆；进行性痴呆伴其他神经性异常，其中包括亨廷顿舞蹈病，皮质基底节变性；进行性共济失调综合征，其中包括脊髓小脑共济失调；缓慢进展的肌无力和肌萎缩综合征，其中包括运动神经元病；感觉和运动障碍，其中包括遗传性运动感觉神经病(CMT)；进行性失明或眼外肌麻痹，其中包括青光眼，遗传性视神经病；以神经感觉性耳聋为特点的综合征，其中包括遗传性听力丧失伴神经系统萎缩；以及其他...

【专利技术属性】
技术研发人员：池在龙，甘宜静，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33