细叶石仙桃药材指纹图谱的建立方法及其指纹图谱技术

本发明专利技术涉及中药材的指纹图谱技术领域，具体涉及一种细叶石仙桃药材指纹图谱的建立方法及其指纹图谱，包括以下步骤：（1）对照品溶液的制备，（2）供试品溶液的制备，（3）高效液相色谱分析，（4）测定。本发明专利技术一种细叶石仙桃药材指纹图谱的建立方法及其指纹图谱，具有重现性好、精密度高、稳定性好的特点，通过该方法构建得到细叶石仙桃药材的标准指纹图谱，通过细叶石仙桃药材的标准指纹图谱，可较全面地对细叶石仙桃药材的内在质量进行控制与评价，监控细叶石仙桃药材的质量及鉴别真伪，确保药材的真实、安全、有效、稳定和一致性，为进一步开发、制定其中药材标准提供参考依据，规范、保障临床用药。

【技术实现步骤摘要】
细叶石仙桃药材指纹图谱的建立方法及其指纹图谱
本专利技术涉及中药材的指纹图谱
，具体涉及一种细叶石仙桃药材指纹图谱的建立方法及其指纹图谱。
技术介绍
中药虽然已经有几千年的应用发展历史，但如何有效的评价中药材质量的好坏，一直是中药材研究与应用的重点和难点。随着科技的发展，指纹图谱质控技术在中药领域被提出并得到广泛认可，其在中药材质控中的应用也越来越多；中药材指纹图谱是指中药材经过适当处理后，采用一定的分析手段和检测仪器得到的，能够标示该中药材特性的图谱，它是现阶段可以较全面地反映中药材内在质量的最有效的手段之一，也得到了国际社会的认可。细叶石仙桃PholidotacantonensisRolfe．是一种常用中药，为兰科石仙桃属植物，常以假鳞茎或全草入药，又名双叶岩珠等，俗称石穿盘（广西）、浮石斛等，产于中国浙江、江西、福建、台湾、湖南、广东和广西。味微苦、甘，性凉，归肺经、肾经，具有滋阴润肺、清热凉血、解毒、消瘀等功效。用于咳嗽，吐血，痢疾，白带，疳积。人们对细叶石仙桃开展的化学成分研究中发现，细叶石仙桃含黄酮类、菲类、酚类、萜类、甾体类、多糖、脂肪族类及矿物质等化学成分，具有麻醉、镇痛、抑制中枢神经系统、抗疲劳、耐缺氧等药理作用。目前国内外对细叶石仙桃的研究主要集中在化学成分的提取、分离、分析和抑菌及中药材真伪鉴别等方面的研究，而在HPLC指纹图谱方面的研究少有报道。而由于不同的气候条件等外界环境因素，各产地的细叶石仙桃样品中所含成分有一定差别。但现有技术中对细叶石仙桃的检测大都只能粗略地鉴别细叶石仙桃的真伪，不能全面、客观的检测和评价细叶石仙桃的质量。因此为全面、准确、有效地控制细叶石仙桃的质量及合理利用细叶石仙桃，有必要建立细叶石仙桃的指纹图谱，弥补细叶石仙桃质量控制不足，使其更加完善、科学。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种细叶石仙桃药材（PholidotacantonensisRolfe.）指纹图谱的建立方法及其指纹图谱，利用该图谱能够明显区别细叶石仙桃和其他药材，并能区别不同产地的细叶石仙桃，监控细叶石仙桃药材的质量及鉴别真伪，确保药材的真实、安全、有效、稳定和一致性，为进一步开发、制定其中药材标准提供参考依据，规范、保障临床用药。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种细叶石仙桃药材指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：（1）对照品溶液的制备：精密称取没食子酸标准品、绿原酸标准品、丁香醛标准品，分别置10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制得浓度分别为0.125g/ml、0.0588g/ml、0.112g/ml的溶液，再用0.45μm微孔滤膜过滤，即为对照品溶液；（2）供试品溶液的制备：取细叶石仙桃粗粉2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加80mL体积浓度为80%的甲醇超声处理1.5h，用体积浓度为80%的甲醇溶液补重，摇匀后过滤，取续滤液，离心10min，取上清液，用0.45μm微孔滤膜过滤，即为供试品溶液；（3）高效液相色谱分析色谱条件为：用Agilent5TC-C18，250mm×4.6mm，5μm色谱柱；以乙腈为流动相B，以体积百分含量为0.4%的磷酸溶液为流动相D，采用以下梯度洗脱的方式进行梯度洗脱：从0～26mim，流动相B的体积百分含量由18％提高至33％，流动相D的体积百分含量由82％降低至67％；26～38mim，流动相B的体积百分含量由33％提高至38％，流动相D的体积百分含量由67％降低至62％；38～58mim，流动相B的体积百分含量由38％提高至50％，流动相D的体积百分含量由62％降低至50％；58～68mim，流动相B的体积百分含量由50％提高至60％，流动相D的体积百分含量由50％降低至40％；流速：1.0mL·min-1；进样量：10μL；检测波长为280nm，柱温为30℃；（4）测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，记录60分钟色谱图，以绿原酸为特征图谱参照物，以绿原酸色谱峰为参照物峰，测定10批细叶石仙桃药材的指纹图谱，得到由其共有特征峰构成的细叶石仙桃药材的标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有7个，其中2号峰为绿原酸。本专利技术的另一目的是提供上述细叶石仙桃药材指纹图谱的建立方法构建得到的细叶石仙桃药材的标准指纹图谱，所述的细叶石仙桃药材的标准指纹图谱具有7个共有特征峰，以参照物峰相应的峰为S峰，所述7个共有特征峰的相对保留时间如下：峰1：2.973，峰2：3.832，峰3：9.542，峰4：11.35，峰5：16.907，峰6：26.71，峰7：28.748。本专利技术的有益效果为：本专利技术一种细叶石仙桃药材指纹图谱的建立方法及其指纹图谱，具有重现性好、精密度高、稳定性好的特点，通过该方法构建得到细叶石仙桃药材的标准指纹图谱，通过比较指纹图谱中共有峰的有无，能有效地鉴别细叶石仙桃药材的真伪及产地，用于反映细叶石仙桃药材质量的优劣，完善细叶石仙桃药材的质量评价体系。通过细叶石仙桃药材的标准指纹图谱，可较全面地对细叶石仙桃药材的内在质量进行控制与评价，监控细叶石仙桃药材的质量及鉴别真伪，确保药材的真实、安全、有效、稳定和一致性，为进一步开发、制定其中药材标准提供参考依据，规范、保障临床用药。附图说明图1为色谱柱Agilent5TC-C18（2）（250mm×4.6mm，5μm）的HPLC色谱图；图2为色谱柱AgilentZorbaxSB-C18（250mm×4.6mm，5μm）的HPLC色谱图；图3为流动相乙腈-水系统色谱图；图4为流动相乙腈-0.1%磷酸系统色谱图；图5为流动相乙腈-0.4%磷酸系统色谱图；图6为流动相甲醇-水系统色谱图；图7为流动相甲醇-0.1%磷酸系统色谱图；图8为流动相甲醇-0.2%磷酸系统色谱图；图9为流速为1.0mL/min的色谱图；图10为流速为0.8mL/min的色谱图；图11为流速为0.5mL/min的色谱图；图12为超声提取的色谱图；图13为回流提取的色谱图；图14为热浸12h提取的色谱图；图15为冷浸24h提取的色谱图；图16为空白溶剂试验HPLC色谱图；图17为延长冲洗试验HPLC色谱图；图18为细叶石仙桃药材的标准指纹图谱；图19为10批细叶石仙桃药材HPLC图谱叠加图；图20为聚类分析结果图；图21为没食子酸色谱图；图22为绿原酸色谱图；图23为丁香醛色谱图。具体实施方式以下结合具体实施例对本专利技术进行进一步详细的叙述。实施例1一种细叶石仙桃药材指纹图谱的建立方法，具体实验步骤如下：一、试验材料1.1、实验材料10批次细叶石仙桃药材样品主要采集于广西不同产地，详见（表1），经广西中医药大学滕建北教授鉴定为兰科石仙桃属植物细叶石仙桃PholidotacantonensisRolfe.全草。1.2、仪器美国Agilent1260高效液相色谱仪（G1311C四元泵，G1329B自动进样器，G1316A柱温箱和G1314B检测器）；KQ-500DA数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BSA224S电子分析天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）；电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒仪器本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细叶石仙桃药材指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）对照品溶液的制备：精密称取没食子酸标准品、绿原酸标准品、丁香醛标准品，分别置10mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制得浓度分别为0.125g/ml、0.0588g/ml、0.112g/ml的溶液，再用0.45μm 微孔滤膜过滤，即为对照品溶液；（2）供试品溶液的制备：取细叶石仙桃粗粉2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加80mL体积浓度为80%的甲醇超声处理1.5h，用体积浓度为80%的甲醇溶液补重，摇匀后过滤，取续滤液，离心10min，取上清液，用0.45μm微孔滤膜过滤，即为供试品溶液；（3）高效液相色谱分析色谱条件为：用Agilent5 TC‑C18，250mm×4.6mm，5μm色谱柱；以乙腈为流动相B，以体积百分含量为0.4%的磷酸溶液为流动相D，采用以下梯度洗脱的方式进行梯度洗脱：从0～26mim，流动相B的体积百分含量由18％提高至33％，流动相D 的体积百分含量由82％降低至67％；26～38mim，流动相B的体积百分含量由33％提高至38％，流动相D 的体积百分含量由67％降低至62％；38～58mim，流动相B的体积百分含量由38％提高至50％，流动相D 的体积百分含量由62％降低至50％；58～68mim，流动相B的体积百分含量由50％提高至60％，流动相D 的体积百分含量由50％降低至40％；流速：1.0 mL·min‑1；进样量：10μL；（4）测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，记录60分钟色谱图，以绿原酸为特征图谱参照物，以绿原酸色谱峰为参照物峰，测定10批细叶石仙桃药材的指纹图谱，得到由其共有特征峰构成的细叶石仙桃药材的标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有7个，其中2号峰为绿原酸。...

【技术特征摘要】
1.一种细叶石仙桃药材指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）对照品溶液的制备：精密称取没食子酸标准品、绿原酸标准品、丁香醛标准品，分别置10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制得浓度分别为0.125g/ml、0.0588g/ml、0.112g/ml的溶液，再用0.45μm微孔滤膜过滤，即为对照品溶液；（2）供试品溶液的制备：取细叶石仙桃粗粉2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加80mL体积浓度为80%的甲醇超声处理1.5h，用体积浓度为80%的甲醇溶液补重，摇匀后过滤，取续滤液，离心10min，取上清液，用0.45μm微孔滤膜过滤，即为供试品溶液；（3）高效液相色谱分析色谱条件为：用Agilent5TC-C18，250mm×4.6mm，5μm色谱柱；以乙腈为流动相B，以体积百分含量为0.4%的磷酸溶液为流动相D，采用以下梯度洗脱的方式进行梯度洗脱：从0～26mim，流动相B的体积百分含量由18％提高至33％，流动相D的体积百分含量由82％降低至67％；26～38mim，流动相B的体积百分含量由33％提高至38％，流动相D的体积百分含量由67％降低至62％；38～58mim，流动相B的体积百分含量由38％...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁爽，朱华，吴秀彩，李鹏，江媛萍，
申请(专利权)人：广西中医药大学，
类型：发明
国别省市：广西,45