一种水稻半矮秆基因sd1等位基因及其鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种水稻半矮秆基因sd1等位基因及其鉴定方法，是水稻半矮秆基因sd1基因第3外显子上的第146位碱基发生C‑G突变形成的等位基因，是调控水稻株高性状的基因。本发明专利技术还公开了所述功能性分子标记的检测方法及其应用，本发明专利技术的功能性分子标记以PCR技术为基础，能区分鉴定稻种资源的矮源类型，不受环境以及人为因素的影响，可以用于水稻矮化育种，改良水稻株型，该sd1等位基因及其鉴定方法在水稻育种领域具有广阔的应用前景。

A Semi-dwarf Gene sd1 Allele in Rice and Its Identification Method

The invention discloses a rice semi-dwarf gene sd1 allele and its identification method, which is an allele formed by C_G mutation at the 146 base of the third exon of the rice semi-dwarf gene sd1, and is a gene regulating plant height traits of rice. The invention also discloses the detection method and application of the functional molecular markers. The functional molecular markers of the invention are based on the PCR technology, and can distinguish and identify the dwarf source types of rice germplasm resources, which are not affected by environment and human factors. The functional molecular markers of the invention can be used for rice dwarf breeding and improving rice plant type. The sd1 allele and its identification method have wide application in rice breeding field. Application prospects.

【技术实现步骤摘要】
一种水稻半矮秆基因sd1等位基因及其鉴定方法
本专利技术属于水稻选育
，涉及一种水稻半矮秆基因sd1等位基因及其鉴定方法。
技术介绍
水稻是人类主要的能源作物，随着全球人口数量的持续增加及耕地面积的急剧减少，粮食安全正成为一个严重的全球问题。株高是水稻重要的农艺性状之一，半矮秆基因sd1的应用极大提高了水稻单产，解决了高秆水稻品种高肥条件下的倒伏问题，在“绿色革命”中起到了关键性的作用。以矮仔占、矮脚南特或低脚乌尖为矮源育成的矮秆品种，已为世界水稻生产做出了举世瞩目的贡献。但是，目前籼稻品种的矮源基因来源过于单一，主要集中在矮脚南特突变类型。因此，目前亟待解决的问题是在育种中如何利用现有品种为亲本，在繁育新品种时不受单一矮源的限制。
技术实现思路
本专利技术解决的问题在于提供一种水稻半矮秆基因sd1等位基因及其鉴定方法，该等位基因筛选自籼稻品种9311，利用该等位基因进行水稻培育可降低水稻株高，尤其是籼稻的株高，也可以进一步改造粳稻株型。本专利技术是通过以下技术方案来实现：一种水稻半矮秆基因sd1等位基因，是水稻半矮秆基因sd1基因第3外显子上的第146位碱基发生C-G突变形成的等位基因，是调控水稻株高性状的基因。该等位基因的第3外显子核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。该等位基因的C-G突变导致GA20氧化酶编码提前终止，导致蛋白功能缺失，从而调控水稻株高性状。该分子标记用于检测水稻半矮秆基因sd1基因第3外显子上的第146位碱基是否发生了C-G突变，其包括SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示的引物对；SEQIDNO.2:CGCGGTTTGTCCTTGTCG；SEQIDNO.3:AAATCGGCTTCTGTTCGTTCC。本专利技术还提供一种水稻半矮秆基因sd1等位基因的鉴定方法，包括以下操作：以提取的水稻总DNA为模板，以SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示的引物对为引物进行PCR扩增，对扩增产物进行Ncil酶切后电泳检测，根据电泳检测结果进行等位基因的鉴定：若检测结果只有一个486bp的条带，则表明第146位碱基发生C-G突变；若检测结果有184bp和302bp的两条带，则表明第146位碱基未发生C-G突变。在PCR扩增时PCR反应体系如下：DNA模板1μl，2.5mMdNTPs5μl，2×KODbuffer12.5μl，10μM正向引物1μl，10μM反向引物1μl，1U/μlKOD酶0.5μl，H2O4μl；PCR反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性60sec，65℃退火60sec，72℃延伸120sec，共34个循环；最后72℃延伸10min。所述的水稻半矮秆基因sd1等位基因在培育矮秆水稻品种或品系中的应用。进一步的，通过SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示的分子标记鉴定需要改良的水稻品种或品系的水稻半矮秆基因sd1，如果第3外显子上的第146位碱基没有发生C-G突变，则通过杂交回交的方法将水稻9311品系的水稻半矮秆基因sd1导入到育种品系中，改良新品种或品系的株高性状。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果：本专利技术提供了一种新的水稻半矮秆基因sd1，通过比较性状筛选出BC1F4，然后对BC1F4的株高性状调控基因进行分析，结合后代群体表型验证最后将候选基因定位到189kb的范围内，基因组注释信息显示半矮秆基因sd1位于该区间，对浙粳22和9311的sd1基因进行测序，测序结果表明位于第3外显子上146位碱基发生C-G突变导致9311中GA20氧化酶编码提前终止，从而导致蛋白功能缺失，这与9311位点植株变矮效应一致，因此确定sd1就是调控9311株高性状的候选基因。而其BC1F4高秆株系中sd1基因为浙粳22片段，所以其表现出高秆的性状。本专利技术提供的水稻半矮秆基因sd1分子标记及鉴定方法，通过检测与sd1等位基因连锁的分子标记可以鉴定新的水稻矮源，用于水稻矮化育种，改良水稻株型。利用9311的sd1位点可降低水稻株高，尤其是籼稻株高，也可以进一步改造粳稻株型，使其适应特定地区的栽培条件，从而提高水稻耐肥和抗倒伏能力，并最终增产。附图说明图1为BC1F4群体中的高秆株系与9311的对比图；图2为遗传背景筛选结果；图3为9311位点、浙粳22位点及杂合位点对株高的贡献率；图4为水稻半矮秆基因sd1新等位基因定位图谱；图5为半矮秆等位基因的序列对比图；图6为特异性分子标记Sd1SNP对48个籼稻品种的DNA检测结果，箭头所指为9311矮源类型。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术进一步说明，所述是对本专利技术的解释而不是限定。实施例1：籼稻品种9311中半矮秆基因sd1的新等位基因本专利技术用粳稻品种浙粳22作母本、籼稻品种9311作父本杂交，并将杂交所得F1代继续与9311回交，随后连续自交4代获得BC1F4。在BC1F4群体中筛选株高显著高于9311的株系，表型观察显示BC1F4群体中的高秆株系株高明显高于9311(如图1所示，BC1F4代中的高秆株系株高明显超过9311)，进一步统计分析发现高秆株系的株高增加是由于每个节长高于9311，但穗长没有明显变化，这表明浙粳22和9311包含独立的株高基因。因此，对其BC1F4高秆株系中的1株极端高秆植株用遍布水稻基因组的分子标记进行遗传背景筛选(遗传背景筛选方法参见：MappingofqGL7-2,agrainlengthQTLonchromosome7ofrice，J.Genet.Genomics37(2010)523-531)，结果发现该BC1F4株系的基因组中大部分已被9311片段替换，仅有7个基因组区域(图2黑色片段标注)包含纯合浙粳22片段，而且对应的后代株高稳定，全部为高秆植株，因此推测浙粳22片段置换区域包含控制株高基因。进一步，利用1号染色体长臂端标记A1和A2对定位群体进行连锁分析，发现该区域与高秆表型连锁(图2)；统计分析显示该1号染色体长臂端连锁片段(图2)对表型的贡献率达到44.5％(图3)，证明其中包含一个株高主效位点，影响高秆表型。通过比对日本晴和9311该位点序列，设计新的连锁标记鉴定定位群体，最终找到4个关键交换个体L30-11-5、L30-14-5、L30-16-1和L31-12-2，根据4个关键交换单株发生重组位置的基因型，结合后代群体表型验证最后将候选基因定位到189kb的范围内(如图4所示，L30-11-5在A147.5-1和A149.1-1标记之间发生交换，L30-14-5、L30-16-1和L31-12-2在A149.1-1和A150.7-1标记之间发生交换，其中L30-11-5和L31-12-2后代表型为高秆，证明黑色区域为高秆调控区域，即A147.5-1和A150.7-1之间)，基因组注释信息显示半矮秆基因sd1位于该区间(图4，左侧代表四个交换单株名称，上部为分子标记名称，右侧数字为交换单株后代数目)。对浙粳22和9311的sd1基因进行测序，两者在3个外显子上都有SNP差异，而位于第3外显子上146位碱基发生C-G突变导致9311中GA20氧化酶编码提前终止，从而导致蛋白功能缺失，这与9311位点植株变矮效应一致，因此确定sd1就是调控9311株高性状的候选本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种水稻半矮秆基因sd1等位基因，其特征在于，是水稻半矮秆基因sd1基因第3外显子上的第146位碱基发生C‑G突变形成的等位基因，是调控水稻株高性状的基因。

【技术特征摘要】
1.一种水稻半矮秆基因sd1等位基因，其特征在于，是水稻半矮秆基因sd1基因第3外显子上的第146位碱基发生C-G突变形成的等位基因，是调控水稻株高性状的基因。2.如权利要求1所述的水稻半矮秆基因sd1等位基因，其特征在于，该等位基因的第3外显子核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。3.如权利要求1所述的水稻半矮秆基因sd1等位基因，其特征在于，该等位基因的C-G突变导致GA20氧化酶编码提前终止，导致蛋白功能缺失，从而调控水稻株高性状。4.权利要求1所述的水稻半矮秆基因sd1等位基因的分子标记，其特征在于，该分子标记用于检测水稻半矮秆基因sd1基因第3外显子上的第146位碱基是否发生了C-G突变，其包括SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示的引物对；SEQIDNO.2:CGCGGTTTGTCCTTGTCG；SEQIDNO.3:AAATCGGCTTCTGTTCGTTCC。5.一种水稻半矮秆基因sd1等位基因的鉴定方法，其特征在于，包括以下操作：以提取的水稻总DNA为模板，以SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示的引物对为引物进行PCR扩增，对扩增产物进行Ncil酶切后电泳检测，根...

【专利技术属性】
技术研发人员：翟荣荣，张林，张小明，叶胜海，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，扬州大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33