本发明专利技术公开了一种抑制香蕉枯萎病的草酸青霉菌株及其应用，从土壤中分离筛选得到一个微生物菌株，结合形态学特征及分子鉴定，将该菌株鉴定为草酸青霉(Penicillium oxalicum)，其菌种保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2018183，地址：中国，武汉，武汉大学。该菌株能够明显抑制香蕉FOC发病率，提高香蕉苗生长势，具有良好的枯萎病防治效果与应用潜力。
A Penicillium Oxalate Strain Inhibiting Banana Fusarium Wilt and Its Application
The invention discloses a Penicillium oxalicum strain which can inhibit Banana Fusarium Wilt and its application. A microbial strain is isolated and screened from soil. The strain is identified as Penicillium oxalicum by combining morphological characteristics and molecular identification. The strain is stored in a typical culture preservation center in China with the preservation number CCTCC NO:M 2018183, address: Wu, China. Han, Wuhan University. The strain can significantly inhibit the incidence of FOC in banana, improve the growth potential of banana seedlings, and has good control effect and application potential of Fusarium wilt.
【技术实现步骤摘要】
一种抑制香蕉枯萎病的草酸青霉菌株及其应用
本专利技术属于微生物领域，具体涉及一种抑制香蕉枯萎病的草酸青霉菌株及其应用。
技术介绍
我国是世界上重要的香蕉生产国，2015年全国种植面积达到43.11万公顷，产量达到1264.16万吨，成为我国南方重要的农业经济产业支柱(《中国香蕉产业发展报告》，2017年)。然而，我国香蕉产业良好发展正在饱受枯萎病(尖孢镰刀菌，Fusuraumoxysporumf.sp.cubense，FOC)严峻的考验。FOC是一种土壤真菌病害，严重破坏香蕉维管束组织，导致感病香蕉苗短时间大面积死亡，极大程度上降低老百姓收入，打击果农生产积极性。化学农药防治依然是我国香蕉枯萎病防治主要技术手段。但化学农药的使用不仅带来土壤水体的环境污染，打破整个生态系统平衡，而且通过食物链威胁人体健康。2015年，我国农业部制定了《到2020年农药使用量零增长行动方案》，提出“预防为主、综合防治”的方针和“科学植保、公共植保、绿色植保”的理念，依靠科技进步，大力推进绿色防控、环境友好型病虫害可持续治理技术体系；主要农作物病虫害生物、物理防治覆盖率达到30％以上，实现农药减量控害，保障农业生产安全、农产品质量安全和生态环境安全。生物防治对环境无污染、无残留、对环境中有益微生物无影响，成为利国利民的首选方法，因此生物防治迎来国家政策利好，发展潜力巨大。利用土壤有益微生物抑制FOC的生长繁殖，是一种方法可行、绿色防控的技术措施。目前，我国已经有少许香蕉枯萎病拮抗菌的研究，如，利用芽孢杆菌Bsp.6可以同时抑制FOC1号和4号生理小种(一株防治香蕉枯萎病的细菌及其应用.CN201310023046)；采用灰黄青霉XJ-EP-058对香蕉FOC孢子萌芽抑制率达到10％，平均防治效果达到74.38％(一株灰黄青霉XJ-EP-058菌株及其抗香蕉枯萎病微生物制剂与应用.CN201110396251)。然而，由于土壤微生物对环境中土壤理化性状、土壤pH值以及当地气候等敏感，导致不同香蕉产区土壤中拮抗微生物多样性差异明显，同一个菌株在大范围跨区域蕉园防治枯萎病效果差异显著。因此，适用于大规模田间应用以及不同小区域小气候的生防微生物资源依然很少。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种抑制香蕉枯萎病的草酸青霉菌株及其应用。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之一是：一种草酸青霉PenicilliumoxalicumHQF8021，其菌种保藏号为CCTCCNO：M2018183，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为中国武汉，武汉大学，保藏日期为2018年04月08日。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之二是上述的草酸青霉PenicilliumoxalicumHQF8021在抑制香蕉枯萎病中的用途。一实施例中：所述抑制香蕉枯萎病为抑制香蕉枯萎病病原菌生长。一实施例中：所述香蕉枯萎病的病原菌为尖孢镰刀菌Fusuraumoxysporumf.sp.cubense(FOC)。一实施例中：所述香蕉枯萎病的病原菌为FOC4号生理小种。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之三是一种包含上述的草酸青霉PenicilliumoxalicumHQF8021的香蕉枯萎病抑制制剂，为HQF8021发酵液，其中的HQF8021浓度不低于1×108cfu/mL。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之四是一种上述的香蕉枯萎病抑制制剂的制备方法，将HQF8021接种至马铃薯葡萄糖液体培养基中，26～30℃，160～200rpm/min培养4～6天，至HQF8021浓度不低于1×108cfu/mL。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之五是一种上述的香蕉枯萎病抑制制剂的使用方法，将所述制剂浇淋于栽种有香蕉的土壤中，每隔4～6天浇淋一次。本技术方案与
技术介绍
相比，它具有如下优点：本专利技术从土壤中分离筛选得到一个微生物菌株，结合形态学特征及分子鉴定，将该菌株鉴定为草酸青霉(Penicilliumoxalicum)，该菌株能够显著抑制香蕉枯萎病病原菌生长，对香蕉苗枯萎病盆栽防效达85％，且香蕉苗叶片深绿、长势良好，表明HQF8021菌株能够明显抑制香蕉FOC发病率，提高香蕉苗生长势，具有良好的枯萎病防治效果与应用潜力。附图说明下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步说明。图1为本专利技术采用的香蕉枯萎病菌FOC4号生理小种。图2为本专利技术实施例中的平板对峙结果(A.FOC；B.HQF8021+FOC)。图3为本专利技术的HQF8021菌株的菌落形态(A)和分生孢子结构(B)。图4为本专利技术的HQF8021rDNA-ITS序列PCR扩增结果(泳道M：DL2000DNAMarker；泳道1～3：HQF8021菌株PCR产物)。图5为本专利技术的HQF8021菌株基于青霉属rDNA-ITS序列的系统发育树。图6为本专利技术的HQB8021菌株对香蕉苗发病的影响，从上到下分别为CK组、FOC处理组、HQF8021处理组。具体实施方式下面通过实施例具体说明本专利技术的内容：1、拮抗菌株的分离与筛选(1)土壤样品的采集及香蕉枯萎病菌种土壤取自福建漳州香蕉园。香蕉枯萎病致病菌为FOC4号生理小种，由广东省农业科学院果树研究所提供。(2)拮抗菌的分离将采集后的土样自然室内晾干后破碎，过100目筛。称取1g过筛样品，加灭菌水100mL，剧烈振荡30min，依次稀释至10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8g/mL浓度梯度，充分混匀。取1mL稀释液加入冷却至约50℃的选择性培养基中，轻微摇匀，在28℃下培养3～5天，挑取不同类型的菌落，划线纯化培养。(3)拮抗菌初筛用打孔器(直径6mm)在已活化的病原菌平板打孔，将菌块接种于PDA平板中央，在28℃下恒温培养1天后，将分离得到的菌落点种于病原菌块四周，28℃恒温培养5天后，挑选有抑制病原菌生长效果的菌落，编号记录。(4)拮抗菌复筛使用平板对峙法，用打孔器(直径为6mm)分别在已活化的病原菌、初筛得到的待测菌HQF8021打孔，分别置于同一PDA平板两侧，两菌饼相距5cm，以单独接种病原菌为对照，设3个重复。待对照菌丝长满培养皿后，观察待测菌对病原菌落的抑制情况(图2)。由图可知，该待测菌拮抗系数为Ⅱ级。拮抗系数分级标准，根据BellDK(1982)进行修正，分为5级：Ⅰ级，拮抗菌占据培养皿100％，病原菌菌落萎缩；Ⅱ级，拮抗菌占据培养皿大于2/3，病原菌菌落边缘萎缩；Ⅲ级，拮抗菌占据培养皿大于1/3且小于2/3，病原菌停止生长，菌落边缘凹陷；Ⅳ级，拮抗菌占据培养皿小于1/3，拮抗菌停止生长；Ⅴ级，病原菌占据培养皿100％。(5)菌株保藏将筛选的拮抗菌株接种于PDA试管斜面，放置于4℃保藏。2、HQF8021菌株的鉴定(1)形态鉴定采用形态学特征观察以及rDNA-ITS序列比对分析对HQF8021菌株进行种属鉴定。将HQF8021菌株接种于PDA平板，28℃下培养7天，菌落直径55～72mm，其形态特征如图3A。菌落形态较大，平坦或近于平坦，外观干燥，不透明，质地疏松，呈现绒毛状，菌丝体初为白色，成熟后逐渐变为黄绿色、暗绿色；期间分生孢子大量产生且易脱落，分生孢子面呈暗绿色，渗出液缺乏，反面近于无色，可溶性色素本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种草酸青霉Penicillium oxalicum HQF 8021，其菌种保藏号为CCTCC NO：M2018183。
【技术特征摘要】
2018.08.29 CN 20181100864351.一种草酸青霉PenicilliumoxalicumHQF8021，其菌种保藏号为CCTCCNO：M2018183。2.权利要求1所述的草酸青霉PenicilliumoxalicumHQF8021在抑制香蕉枯萎病中的用途。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述抑制香蕉枯萎病为抑制香蕉枯萎病病原菌生长。4.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述香蕉枯萎病的病原菌为尖孢镰刀菌Fusuraumoxysporumf.sp.cubense。5.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述香蕉枯萎病的病原菌为FOC4号生理小种。6.一种包含...
【专利技术属性】
技术研发人员：王明元，徐志周，刘建福，张敏瑜，侯式贞，于海玲，
申请(专利权)人：华侨大学，
类型：发明
国别省市：福建,35
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