一种豌豆蛋白四肽的制备方法及其在降压领域的应用。本发明专利技术属于功能性食品技术领域，具体涉及一种豌豆蛋白低分子肽的制备方法及其在降血压方面的应用。本发明专利技术通过对豌豆蛋白进行挤压、粉碎、酶解、纯化得到由4个氨基酸组成豌豆蛋白降压肽。该工艺酶解时间短，酶解效率高，所得豌豆蛋白降压肽可通过抑制ACE酶活性，降低血压。本发明专利技术的豌豆蛋白降压肽可用于功能性食品、补剂、药品等领域。
A preparation method of pea protein tetrapeptide and its application in antihypertensive field
The invention relates to a preparation method of pea protein tetrapeptide and its application in the field of hypotension. The invention belongs to the technical field of functional food, in particular to a preparation method of low molecular weight peptide of pea protein and its application in lowering blood pressure. The pea protein antihypertensive peptide composed of four amino acids is obtained by extruding, crushing, enzymatic hydrolysis and purification of pea protein. The enzymatic hydrolysis time is short and the enzymatic hydrolysis efficiency is high. The obtained pea protein antihypertensive peptide can reduce blood pressure by inhibiting ACE activity. The pea protein antihypertensive peptide of the invention can be used in the fields of functional foods, supplements, pharmaceuticals, etc.
【技术实现步骤摘要】
一种豌豆蛋白四肽的制备方法及其在降压领域的应用
本专利技术属于功能性食品
，具体涉及豌豆蛋白开发、降压肽制备方法及其应用领域。技术背景豌豆蛋白是一种优质蛋白质，其氨基酸比例较平衡，除蛋氨酸含量稍低外，其余必需氨基酸均达到FAO/WHO推荐模式值“1”。另外，豌豆蛋白具有较好的保水性、吸油性和凝胶形成性，可应用于各种功能性食品中。但目前为止。我国对豌豆加工重点是提取利用豌豆淀粉，制备淀粉后残渣中的蛋白尚未能进行充分开发和利用，目前绝大部分残渣仅作饲料之用，造成宝贵的蛋白质资源浪费，所以从豌豆蛋白中制备降压肽，可以充分利用资源、变废为宝、减少浪费。据调查统计，50年来我国人群高血压患病率呈明显上升趋势，2016年我国18岁及以上成人高血压患病率为25.2%，每年新增患病人数1000万左右。目前我国高血压患者人数已超过3亿。中国高血压发病人群逐年增加，高血压用药市场会进一步增加。基于我国高血压患病率的现状，高血压的治疗是一个极其重要的问题。目前，高血压患者中知情并且进行药物干预的人数占比较少，随着医疗水平和人们医疗意识的不断提升，高血压用药市场会进一步打开，前景广阔。血管紧张素转换酶（AngiotensinI-convertingEnzyme，简称ACE）对调节血压起着关键性的作用，血管紧张素I（AngiotensinI，简称AI）不具有活性，但是AI在ACE的作用下可以转变为具有活性的血管紧张素II（AngiotensinII，简称AII），AII具有收缩血管平滑肌的活性功能，从而引起血压升高。由于体内ACE活性太高而引起的高血压，可以通过抑制ACE活性，阻止血管紧张素II的生成和激肽降解的减少，从而达到降低甚至治疗高血压的作用。因此，ACE抑制剂可作为降血压的药物，而ACE抑制评价就成为降血压药物或功能性食品开发评价依据。据报道，许多发达国家早已尝试化学合成ACE的抑制剂，并在临床治疗中使用。然而，化学合成的降压药物往往会引起皮疹、喉咙肿痛、味觉系统失调、肾脏损害等各种副作用，不适合长期连续服用。研究表明，已经可以从动物蛋白、植物蛋白、微生物代谢产物中分离提取降血压肽。食源性像从豌豆蛋白提取降压肽与化学合成的降血压药物相比，具有无副作用、吸收好、并仅对病理性高血压患者有降压效果，对正常机体无副作用等优点。有研究证明人们分别从不同来源的原料中制备出了高效的ACE抑制肽，对植物蛋白源的研究有大豆、玉米、花生、米糠等，却还没有关于从豌豆蛋白制备降压肽的研究。因此，本专利技术开发具有原创性和巨大的市场前景。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种豌豆蛋白四肽的制备方法及其在降压领域的应用，通过对豌豆蛋白进行挤压、粉碎、酶解、纯化得到豌豆蛋白四肽，该专利技术为豌豆蛋白开发提供了思路和可行性技术路线，缩短了酶解时间，提高了酶解效率，小分子肽比例高；并研究其对高血压的抑制作用，其只对高血压患者有降压作用，而对血压正常的机体没有影响，安全性高且无毒副作用。本专利技术所述的豌豆蛋白四肽的制备方法，其特征在于：豌豆蛋白经挤压、粉碎、酶解、纯化后得到由4个氨基酸组成的小分子肽，检测其对ACE的抑制作用，证明本专利技术的豌豆蛋白四肽具有显著的降压作用。豌豆蛋白四肽与ACE酶反应温度为35~37.5℃，反应时间为30~45min，豌豆蛋白四肽的添加量为每1单位ACE酶活添加0.2~1.5mg豌豆蛋白四肽。豌豆蛋白挤压条件特征在于：含水量为25%~30%豌豆蛋白经单螺杆挤压机挤压，其中挤压温度58~60℃，螺杆转速为168~170r/min，模孔孔径为12mm。豌豆蛋白酶解条件特征在于：中性蛋白酶酶解反应温度为39~41℃，酶解反应的pH值为6.9~7，加酶量为12.6%~13%（E/S），酶解反应中豌豆蛋白浓度为6.8%~6.85%（g/mL），酶解时间为150~210min，酶解后，灭酶温度为100℃，灭酶时间为12~14min。豌豆蛋白四肽纯化条件特征在于：酶解物纯化工艺为分子量＜1KDa透析袋纯化至透析液无色后，通过凝胶色谱G-15分离，收集得到豌豆蛋白四肽，其中纯度达70%~75%。豌豆蛋白四肽应用的降压领域特征在于：以ACE酶为血压降低途径或机理之一的血压降低的功能性食品、药品等领域。与现有的技术相比，本专利技术的有益效果如下：（1）本专利技术中，豌豆蛋白经过挤压粉碎，空间结构发生了一定变化，链状结构比例增加，孔隙增多，表面的凹凸感更为强烈，比面积增加，所以豌豆蛋白与中性蛋白酶的接触面积更大，有利于酶进入豌豆蛋白内部，缩短酶解时间，提高酶解反应效率，提高了小分子酶解物的比例。（2）本专利技术中，由豌豆蛋白得到的四肽作为一种生物活性多肽，只对高血压患者有降压作用，而对血压正常的机体没有影响，安全性高且无毒副作用。可以取代传统的化学降压药物。（3）本专利技术中，豌豆蛋白四肽还具有提高人体新陈代谢、增强免疫力、延缓衰老等功能，对人体有益无害。（4）本专利技术中，豌豆蛋白四肽降压效果显著，适合后期合成推广。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术做进一步描述。实施例1豌豆蛋白四肽的制备方法：将含水量为25%豌豆蛋白经单螺杆挤压机挤压，其中挤压温度60℃，螺杆转速为168r/min，模孔孔径为12mm。豌豆蛋白四肽酶解条件特征在于：中性蛋白酶酶解反应温度为41℃，酶解反应的pH值为6.9，加酶量为13%（E/S），酶解反应中豌豆蛋白浓度为6.8%（g/mL），酶解时间为210min，酶解后，灭酶温度为100℃，灭酶时间为12min。豌豆蛋白四肽纯化条件特征在于：酶解物纯化工艺为分子量＜1KDa透析袋纯化至透析液无色后，通过凝胶色谱G-15分离，收集得到豌豆蛋白四肽，其中纯度达70%。豌豆蛋白四肽对ACE酶抑制率的测定：采用Cushman的测定方法，在2mL的离心管中，每次测试的总体积为0.2mL。将HHL溶解在0.1mol/L含0.3mol/L氯化钠的硼酸盐缓冲液中（pH=8.3），配制成浓度为5mmol/L的马尿酰组氨酰亮氨酸（HHL）溶液备用。在离心管中依次加入80uL的HHL，100uL去离子水，10uL豌豆蛋白四肽溶液（0.20mg/mL），将此混合液放入37℃恒温水浴中保温3min，然后加入10uLACE酶液启动反应。恒温保持30min，加入0.2mL的1mol/LHCL终止反应，再加入1.2mL（-20℃）的乙酸乙酯，均匀混合大约15s，以萃取被ACE所释放的马尿酸（Hip），最后，离心（3500r/min）5min后取出0.8mL酯层，转入另一个试管中，在120℃的烘箱中烘干1h左右，重新溶于0.8mL的去离子水中，在228nm处测定吸光值。空白对照管除在反应前先加入0.2mL的1mol/LHCL终止反应外，其余操作相同。其中，抑制率计算式如下：抑制率（%）=(ODA-ODB)/(ODA-ODC)ODB为存在抑制剂与酶时的吸光值；ODA为不存在抑制剂时的吸光值（去离子水代替水解液）；ODC为抑制剂与酶都不存在时的吸光值（用去离子水代替水解液，并在反应前加盐酸终止反应）。豌豆蛋白四肽对ACE酶抑制率为40.4%。实施例2豌豆蛋白四肽的制备方法：含水量为30%豌豆蛋白经单螺杆挤压机挤压，其中挤压温度58℃，螺杆转速为170r/min，模孔孔径为1本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种豌豆蛋白四肽的制备方法及其在降压领域的应用，其特征在于：豌豆蛋白经挤压、粉碎、酶解、纯化后得到由4个氨基酸组成的小分子肽，检测其对ACE的抑制作用，证明本专利技术的豌豆蛋白四肽具有显著的降压作用。
【技术特征摘要】
1.一种豌豆蛋白四肽的制备方法及其在降压领域的应用，其特征在于：豌豆蛋白经挤压、粉碎、酶解、纯化后得到由4个氨基酸组成的小分子肽，检测其对ACE的抑制作用，证明本发明的豌豆蛋白四肽具有显著的降压作用。2.根据权利要求1所述的一种豌豆蛋白四肽的制备方法及其在降压领域的应用，其特征在于：豌豆蛋白四肽与ACE酶反应温度为35~37.5℃，反应时间为30~45min，豌豆蛋白四肽的添加量为每1单位ACE酶活添加0.2~1.5mg豌豆蛋白四肽。3.根据权利要求1所述的一种豌豆蛋白四肽的制备方法及其在降压领域的应用，其中豌豆蛋白挤压条件特征在于：含水量为25%~30%的豌豆蛋白经单螺杆挤压机挤压，其中挤压温度58~60℃，螺杆转速为168~170r/min，模孔孔径为12mm。4.根据权利要求1所述的一种豌豆蛋白四肽的制备方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：盛桂华，周泉城，王猛，孙婉婷，王赛，王琪，李慧，
申请(专利权)人：山东理工大学，
类型：发明
国别省市：山东,37
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