川陈皮素在治疗主动脉瓣膜钙化病中的用途制造技术

本发明专利技术涉及主动脉瓣膜钙化病的预防和/或治疗领域，发明专利技术人经研究发现川陈皮素可以有效下调瓣膜间质细胞中成骨分化标志基因BMP2和RUNX2的表达，抑制瓣膜间质细胞钙化，从而抑制或延缓瓣膜钙化，进而提供了川陈皮素在制备用于预防和/或治疗个体主动脉瓣膜钙化病的药物中的用途。为采用非手术方法来治疗主动脉瓣膜钙化病提供了新的选择。

Application of Citrinin in the Treatment of Aortic Valve Calcification

The invention relates to the field of prevention and/or treatment of aortic valve calcification. The inventor has found that the expression of BMP2 and RUNX2 markers of osteogenic differentiation in the interstitial cells of valves can be effectively down-regulated and the calcification of interstitial cells of valves can be inhibited or delayed by the inventor, and furthermore, it provides the preparation of the cortin for the prevention and/or treatment of individual aortic valve calcium. Uses in Chemotherapeutic Drugs. It provides a new choice for non-surgical treatment of aortic valve calcification.

【技术实现步骤摘要】
川陈皮素在治疗主动脉瓣膜钙化病中的用途
本专利技术涉及主动脉瓣膜钙化病的预防和/或治疗领域，具体涉及川陈皮素在预防和/或治疗主动脉瓣膜钙化病中的用途。
技术介绍
川陈皮素是一种在柑橘类水果中广泛分布的物质。它是一种常见的食品添加剂，具有一定的抗炎、抗氧化、抗过敏和抗肿瘤等作用。除此之外，关于川陈皮素与血管疾病，仅存在有限的报道，例如：1、川陈皮素可能通过抑制血管平滑肌细胞的体外增殖和迁移来抑制动脉粥样硬化斑块的形成；2、颈动脉球囊损伤的大鼠通过灌胃施用川陈皮素(25mg/kg/d)，被证实可以通过调节ROS驱动的NF-κB通路，降低血清TNF-α和IL-6水平，显著降低新生内膜增生。而对于川陈皮素与主动脉瓣膜钙化之间的研究，目前尚未见报道。钙化是指人体中的某种组织在一些因素的作用下发生坏死，继而体内的钙盐沉积于坏死灶内，使病变局限而趋于稳定的过程。实质上，钙化是机体对于病变的一种防御性的反应，其有利于坏死灶的清除和炎症的消退。虽然大多数钙化是一种防御性反应，但是一些钙化却会导致不良后果，例如，前列腺钙化可能导致前列腺炎的治疗困难和易复发等等。主动脉瓣膜钙化病，是钙化性心脏瓣膜病(Calcificheartvalvedisease,CHVD)的一种。它是一种因心脏主动脉瓣膜钙化而引起的疾病，会引起栓塞从而导致脑卒中，还可能导致感染性心内膜炎，而严重危害人的健康。主动脉瓣膜钙化病在世界范围内是一种常见且多发的疾病：在发达国家65岁以上的人群中，超过20％有不同程度主动脉瓣硬化，在我国50岁以上人群中瓣膜钙化检出率达12.5％，其中主动脉瓣受累占94.4％。据统计，近年来主动脉瓣膜钙化病发病率仍呈逐年增高的趋势。瓣膜组织中的细胞主要包括有瓣膜内皮细胞(Valvularendothelialcells,VEC)、人瓣膜间质细胞(Valvularinterstitialcells,VIC)、瓣膜前体细胞等。已有研究提出：人瓣膜间质细胞向成骨样细胞表型转化所导致的骨基质蛋白和钙盐含量增加可能是引发瓣膜钙化发生的关键始动因素之一。目前，主动脉瓣膜钙化病最主要的治疗手段是手术，例如，主动脉瓣置换术、主动脉去钙化术和经皮穿刺球囊瓣膜成形术等。然而，手术将不可避免地对患者带来较高的风险，如围术期死亡率高、远期效果欠佳，同时还会加重患者家庭的经济负担。因此，存在对采用非手术方法来有效治疗主动脉瓣膜钙化病的强烈需求。
技术实现思路
本专利技术要解决的问题是如何有效地治疗或预防个体主动脉瓣膜钙化病。根据上述需求，在第一方面，本专利技术提供了川陈皮素在制备用于预防和/或治疗个体的主动脉瓣膜钙化病中的用途。在本专利技术中，川陈皮素(NBT)是指CAS号为478-01-3；分子式为C21H22O8的物质；其主要来源于芸香科川橘的果皮、酸橙的果皮、柑橘的叶和茎。在本专利技术中，“预防和/或治疗”是指预防和/或延缓疾病或病症的发生或使之正常化。在一个实施方案中，所述川陈皮素的浓度为10μM-50μM。进一步的，在优选的实施方案中，所述川陈皮素的浓度为10μM-20μM。更优选的实施方案中，所述川陈皮素的浓度为10μM或20μM。更优选的实施方案中，所述川陈皮素的浓度为20μM。在一个实施方案中，所述个体为哺乳动物，所述哺乳动物包括但不限于大鼠、小鼠、非人灵长类、人、犬、猫、马、牛、绵羊、猪、山羊。优选地，所述个体为人。在这一方面，本专利技术的有益效果在于川陈皮素可以有效下调瓣膜间质细胞中成骨分化标志基因BMP2和RUNX2的表达，抑制瓣膜间质细胞钙化，从而抑制或延缓瓣膜钙化。除此之外，在临床诊断过程中，专利技术人还发现患有主动脉瓣膜钙化病的个体，通常伴有瓣膜增厚，而专利技术人经过研究发现川陈皮素还可以抑制瓣膜间质细胞增殖，从而抑制瓣膜增厚。据此，在第二方面，在一个实施方案中，本专利技术提供了川陈皮素在制备用于预防和/或治疗个体的主动脉瓣膜钙化以及瓣膜增厚的药物中的用途。在另一个实施方案中，本专利技术提供了川陈皮素在制备用于预防和/或治疗个体的主动脉瓣膜钙化病中的用途，其中，所述主动脉瓣膜钙化病伴有瓣膜增厚的症状。在一个实施方案中，所述川陈皮素的浓度为10μM-50μM。进一步的，在优选的实施方案中，所述川陈皮素的浓度为10μM-20μM。更优选的实施方案中，所述川陈皮素的浓度为10μM或20μM。更优选的实施方案中，所述川陈皮素的浓度为20μM。在一个实施方案中，所述个体为哺乳动物，所述哺乳动物包括但不限于大鼠、小鼠、非人灵长类、人、犬、猫、马、牛、绵羊、猪、山羊。优选地，所述个体为人。在这一方面本专利技术的有益效果在于：在延缓瓣膜钙化的同时，还可以抑制瓣膜间质细胞增殖，从而抑制瓣膜增厚。附图说明图1示出了未使用NBT或使用浓度范围为10μM至50μM的NBT处理的情况下经TNF-α处理的hVIC的细胞增殖分析结果。图1a是细胞周期分析的流式细胞术结果；图1b是对图1a的数据进行统计学比较，*p<0.05(相对于对照：DMSO)和#p<0.05(相对于TNF-α)认为有显著差异，n＝3；图1c是用于检测指示细胞增殖的DNA合成的EdU测定的荧光染色结果；图1d是EdU(深色)阳性染色百分比的统计分析，*p<0.05(相对于对照：DMSO)和#p<0.05(相对于TNF-α)认为有显著差异(随机选择五个不同的区域)。图2示出了川陈皮素抑制TNF-α诱导的hVIC钙化的结果。图2a为茜素红S阳性染色；图2b为条件培养18天的吸光度值(OD)，当分别与DMSO组和TNF-α组相比时，*p<0.05和#p<0.05认为是显著差异，n＝3；图2c为用于检测条件培养的hVIC的BMP2和RUNX2基因表达的qRT-PCR，当分别与DMSO组和TNF-α组相比时，*p<0.05和#p<0.05认为有显著差异，n＝3。具体实施方式下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本专利技术，本专利技术的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本专利技术，而非限制本专利技术。实施例1、TNF-α诱导人瓣膜间质细胞钙化模型的构建取培养密度接近80％的瓣膜间质细胞，2％FBS+DMEM高糖培养液饥饿过夜，将新配置成骨诱导培养基中加入30ng/μl终浓度的TNF-α以制备钙化诱导培养基培养饥饿完毕的瓣膜间质细胞。TNF-α诱导人瓣膜间质细胞钙化模型的方法具体请参考如下文献：Yu,Z,Seya,K,Daitoku,K,Motomura,S,Fukuda,I,Furukawa,K.2011.Tumornecrosisfactor-alphaacceleratesthecalcificationofhumanaorticvalveinterstitialcellsobtainedfrompatientswithcalcificaorticvalvestenosisviatheBMP2-Dlx5pathway.TheJournalofpharmacologyandexperimentaltherapeutics337(1):16-23.，在此以引用的方式整体并入本文。实施例2、川陈皮素抑制人瓣膜间质细胞增殖采用如上述实施例1构建本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.川陈皮素在制备用于预防和/或治疗个体主动脉瓣膜钙化病的药物中的用途。

【技术特征摘要】
1.川陈皮素在制备用于预防和/或治疗个体主动脉瓣膜钙化病的药物中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述川陈皮素的浓度为10μM-50μM。3.根据权利要求1所述的用途，其中，所述川陈皮素的浓度为10μM-...

【专利技术属性】
技术研发人员：许康，董念国，朱鹏，史嘉玮，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属协和医院，
类型：发明
国别省市：湖北,42