蛋白酶变体、液体洗涤剂组合物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，提供一种蛋白酶变体、液体洗涤剂组合物及其应用。一种蛋白酶变体，其为亲本蛋白酶的变体，所述亲本蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶，所述蛋白酶变体至少包含以下氨基酸置换：G97D+A98R+S99N，其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的氨基酸位置。本发明专利技术还提供一种液体洗涤剂组合物及其应用。

Protease variants, liquid detergent compositions and their applications

The invention relates to the field of biotechnology, and provides a protease variant, a liquid detergent composition and its application. A protease variant is a parent protease variant, the parent protease is subtilisin, the protease variant contains at least the following amino acid substitution: G97D+A98R+S99N, and the position corresponds to the amino acid position of the polypeptide of SEQ ID NO:1. The invention also provides a liquid detergent composition and its application.

【技术实现步骤摘要】
蛋白酶变体、液体洗涤剂组合物及其应用
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种蛋白酶变体、液体洗涤剂组合物及其应用。
技术介绍
在洗涤剂工业中，酶在洗涤剂配制品中已应用数十年。用于这些配方的酶包括蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶、甘露糖苷酶和其他酶或它们的混合物。目前商业上最为重要的酶是蛋白酶。越来越多的商用蛋白酶是天然存在的野生型蛋白酶的蛋白质工程化变体。已描述多种有用的蛋白酶和蛋白酶变体，其中很多已提供在不同洗涤剂中的改进活性、稳定性以及溶解度。然而，仍然需要许多进一步改进的工业用途蛋白酶或蛋白酶变体。因为当前加酶的洗涤产品还无法完全解决温度和pH等洗涤条件会随时间而发生变化导致去污效果下降的问题，其结果是许多污渍在当前洗涤产品和洗涤条件下仍然难以完全去除。此外，液体洗涤剂中的特殊环境可致使酶失活，不利于加酶洗涤产品保持质量稳定，导致存储后的加酶洗涤产品在洗涤过程中洗涤性能损失。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述现有技术的缺点，提供一种蛋白酶变体、液体洗涤剂组合物及其应用。为解决上述技术问题，专利技术采用如下所述的技术方案。一种蛋白酶变体，其为亲本蛋白酶的变体，所述亲本蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶，所述蛋白酶变体至少包含以下氨基酸置换：G97D+A98R+S99N，其中所述位置对应于SEQIDNO:1的多肽的氨基酸位置。优选地，所述蛋白酶变体还包含置换L124M。优选地，所述蛋白酶变体还包含选自以下的一种或多种改变：Q12K、S101R、A151G、N184G、A194P、N218S、N155*、A161R。优选地，所述蛋白酶变体至少包括3个位点的置换。优选地，所述亲本蛋白酶与SEQIDNO：2具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。优选地，所述蛋白酶变体与SEQIDNO:3具有至少96.6％的序列同一性的氨基酸序列。优选地，所述蛋白酶变体具有由SEQIDNO:3表示的氨基酸序列。一种液体洗涤剂组合物，包含上述的蛋白酶变体。优选地，所述液体洗涤剂组合物还包含淀粉酶、过氧化氢酶、纤维素酶、角质酶、脂肪酶、甘露聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、过氧化物酶、蛋白酶、黄原胶酶、木葡聚糖酶中的一种或多种。一种液体洗涤剂组合物的应用，将上述的液体洗涤剂组合物用于衣物洗涤和/或餐具洗涤。本专利技术的有益效果在于：本专利技术所提供的蛋白酶变体与亲本枯草杆菌酶相比具有改良的稳定性或洗涤性能，因此更适用于液体洗涤剂，如衣物液体洗涤剂组合物和餐具洗涤组合物。附图说明图1为枯草杆菌蛋白酶BPN’(SEQID：1)与枯草杆菌蛋白酶309(SEQID：2)及枯草杆菌酶变体(SEQID：3)的氨基酸序列的比对。具体实施方式为使本领域的普通技术人员更加清楚地理解专利技术的目的、技术方案和优点，以下结合附图和实施例对专利技术做进一步的阐述。定义液体洗涤剂为洗涤剂在环境温度(例如25℃)下为液体。术语“改善的性质”指与本文所定义的蛋白酶变体相关的与亲本蛋白酶相比改善的特征。这样的改善的性质包括但不限于改善的洗涤性能、蛋白酶活性、改善的热稳定性、改善的pH活性特征、提高的pH稳定性、提高的稳定性、贮存条件下改善的稳定性和化学稳定性。“改善的稳定性”或“提高的稳定性”在本文中定义为当在相同的条件下测试时，相对于包含亲本蛋白酶的组合物的稳定性，包含变体蛋白酶的洗涤剂组合物老化后蛋白酶活性的相对提高。蛋白酶稳定性通过比较在包含感兴趣的蛋白酶的液体洗涤剂组合物中于特定的温度下温育特定的时间段后测得的残余蛋白酶活性来确定。可使用如在实施例4所描述的测定来对蛋白酶稳定性进行测量。术语“洗涤性能”用作洗涤剂在例如洗涤如洗衣过程中去除存在于待清洁的物品上的污渍的能力。洗衣洗涤性能可如实施例5中所示例的那样测量，即通过向纺织品施用(标准化的)污渍，并使纺织品进行洗涤程序和测量经纺织品的颜色的亮度。术语“改进的洗涤性能”在此被定义为根据本专利技术的蛋白酶变体相对于亲本蛋白酶的洗涤性能，若果在两种或更多种感兴趣的洗涤剂组合物之间没有显著或有意义的差异，则洗涤性能在本文中以“同等”表示。术语“残留活性”或“残余活性”在此文中意指存储后，特别是在液体洗涤剂中存储后留下的或剩余的蛋白酶活性。在将蛋白酶添加至洗涤剂中之后，当测量残留活性时，在t1测量该蛋白酶的活性。然后在存储一定量的时间之后，典型的数分钟或数周后，在t2测量残留活性。术语“蛋白酶”在本文中理解为具有蛋白酶活性的酶。术语“蛋白酶活性”意指能够通过蛋白酶降解蛋白为氨基酸，其为通过水解在多肽链中将氨基酸连接在一起形成蛋白的肽键而进行的蛋白分解代谢。术语“野生型蛋白酶”意指由天然存在的野生型生物体如自然界中存在的细菌、古生菌、酵母、真菌、植物或动物表达的蛋白酶。野生型蛋白酶的实例为枯草杆菌蛋白酶309，即SEQIDNO：2的氨基酸1至269。术语“亲本”或“亲本蛋白酶”意指对其加以改变以产生本文定义的变体的蛋白酶，即用来描述对其进行突变来获得本文定义的蛋白酶变体的起始蛋白酶。术语“成熟多肽”在本文中定义为具有蛋白酶变体活性的多肽，其为经翻译和任何翻译后修饰，如N-端加工、C-端截短、糖基化、磷酸化、自身催化活化等之后形成的最终形式多肽。“蛋白酶变体”在本文中理解为与其亲本相比在一个或多个(几个)特定位置包含改变或修饰，如取代、插入和/或缺失一个或多个(几个)氨基酸残基的多肽。蛋白酶变体可通过在适于包含编码所述蛋白酶变体的基因的微生物表达所述基因的条件下培养所述微生物而获得。编码蛋白酶变体的基因可经过人为干预通过修饰编码野生型蛋白酶的基因序列而获得。置换：对于氨基酸置换，使用如下命名法：原始氨基酸、位置、置换的氨基酸。相应地，在12位用赖氨酸取代谷氨酰胺命名为“Q123K”或“Asn123Lys”。多重突变可用加号(“+”)分开，例如，“Q123K+L234M”或“Asn123Lys+Leu234Met”，分别代表在123位及234位用赖氨酸(K)取代谷氨酰胺(Q)，及用甲硫氨酸(M)取代亮氨酸(L)。缺失：对于氨基酸缺失，使用一下命名法：原始氨基酸、位置、*。因此，位置155处天冬酰胺的缺失命名为“Asn155*”或“N155*”。多个缺失可如上述对于取代那样用(“+”)分开。插入：对于氨基酸插入，使用了如下命名法：初始氨基酸、位置、初始氨基酸、新插入的氨基酸。例如，在195位甘氨酸之后插入赖氨酸命名为“G195GK”。当插入多于一个氨基酸残基时，例如在G195之后插入Lys和Ala时，表示为：Gly195GlyLysAla或G195GKA。在其中置换和插入发生在同一位置处的情况下，可表示为S99SD+S99A或简写为S99AD。不同改变：当可在某个位置处引入不同的改变时，所述不同的改变由逗号分开，例如，“Asn184Asp,Gly,Ser”表示位置184处的天冬酰胺被天冬氨酸或甘氨酸或丝氨酸置换。或者，不同的改变或任选的置换可在括号中指示，例如，Asn184[Asp,Gly,Ser]或Asn184{Asp,Gly,Ser}或者简写为N184[D,G,S]或N184{D,G,S}。两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性由参数“序列一致性”描述。出于本专利技术的目的，使用尼德尔曼-翁施算法(尼德尔曼(Needleman)和翁施(Wuns本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蛋白酶变体，其为亲本蛋白酶的变体，其特征在于：所述亲本蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶，所述蛋白酶变体至少包含以下氨基酸置换：G97D+A98R+S99N，其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的氨基酸位置。

【技术特征摘要】
1.一种蛋白酶变体，其为亲本蛋白酶的变体，其特征在于：所述亲本蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶，所述蛋白酶变体至少包含以下氨基酸置换：G97D+A98R+S99N，其中所述位置对应于SEQIDNO:1的多肽的氨基酸位置。2.如权利要求1所述的蛋白酶变体，其特征在于：所述蛋白酶变体还包含置换L124M。3.如权利要求1所述的蛋白酶变体，其特征在于：所述蛋白酶变体还包含选自以下的一种或多种改变：Q12K、S101R、A151G、N184G、A194P、N218S、N155*、A161R。4.如权利要求3所述的蛋白酶变体，其特征在于：所述蛋白酶变体至少包括3个位点的置换。5.如权利要求1-4任一项所述的蛋白酶变体，其特征在于：所述亲本蛋白酶与SEQIDNO...

【专利技术属性】
技术研发人员：安群，王俊，冯甲，周雨叶，孙飞野，
申请(专利权)人：广州立白企业集团有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44