一种具有抗癌作用的毛诃子提取物及其有效部位制备方法技术

本发明专利技术涉及毛诃子抗癌活性部位及其制备方法，包括对含有活性成分部位的提取，以及采用大孔吸附树脂进行富集的工艺研究，还包括对活性成分中有效成分的鉴定，以及该活性部位用于体内或体外抑制肝癌HepG2、肺癌A549、肺腺癌NCI‑H1703、胃癌BGC823、骨肉瘤细胞MG‑63、结直肠癌HCT116、乳腺癌MCF‑7、神经母瘤细胞shsy5y、肾癌ACHN、肝正常细胞L02、人乳腺导管癌细胞ZR75‑1、人结肠直肠腺癌细胞Colo‑205、人乳腺导管癌细胞BT‑474、人乳腺癌细胞T‑47D、人宫颈癌细胞株HeLa、肝癌细胞H22等药物中的用途。本发明专利技术将大孔吸附树脂应用毛诃子抗癌活性部位的富集方法，工艺简单、安全无毒、生产成本低，可用于工业生产，具有巨大的经济效益和较大的推广性。

A kind of anti-cancer extract of Terminalia chebula and the preparation method of its effective fraction

The present invention relates to the anticancer active fraction of Terminalia chebula and its preparation method, including the extraction of the active fraction and the enrichment process by macroporous adsorption resin. It also includes the identification of the active ingredient and the application of the active fraction in inhibiting hepatocellular carcinoma HepG2, lung cancer A549, lung adenocarcinoma NCI H1703, gastric cancer BGC 823, osteosarcoma cell MG in vivo or in vitro. Uses of drugs such as 63, colorectal cancer HCT116, breast cancer MCF_7, neuroblastoma shsy5y, renal cancer ACHN, normal hepatocyte L02, human breast ductal cancer cell ZR75_1, human colorectal adenocarcinoma cell Colo_205, human breast ductal cancer cell BT_474, human breast cancer cell T_47D, human cervical cancer cell line HeLa, hepatocellular carcinoma cell H22, etc. The present invention applies macroporous adsorption resin to the enrichment method of anticancer active part of Terminalia chebula. The process is simple, safe and non-toxic, and the production cost is low. It can be used in industrial production and has huge economic benefits and great popularization.

【技术实现步骤摘要】
一种具有抗癌作用的毛诃子提取物及其有效部位制备方法
本专利技术涉及毛诃子抗癌提取物及其有效部位制备方法，还涉及到该活性部位的制药用途。
技术介绍
毛诃子始载于《新修本草》，是使君子科植物毗黎勒Terminaliabillerica(Gaertn.)Roxb.的干燥成熟果实。又名均保奈、噶拉珠玛、作贝相、莫合、如卡、次木西、巴那、纳合、曼吉德，都离、帕肉拉等，是常用的藏药、蒙药和维药。毛诃子味苦、涩，性平，有清热解毒、收敛养血、调和诸药之功效，用于治疗各种热症、泄痢、黄水病、肝胆病、病后虚弱，且能去腐生肌、愈合伤口，使皮肤滋润光泽。在部颁标准藏药、蒙药和维药分册中，其涉及方药（剂）众多，且这些方药（剂）多具有清热解毒、收敛养血、消食、止咳的作用。毛诃子常与诃子、余甘子配伍出现在藏药复方中，谓之“大三果”，具有清热凉血、解毒生津的作用，常用于治疗热病、发烧、劳累过度等症。其使用频繁，为众多藏药复方的基础方，且在此基础方中毛诃子作为辅助药，性平，味涩、苦，助君药清热解毒、收敛养血。现代药理研究表明，毛诃子具有抗氧化、抗糖尿病、抗动脉粥样硬化等功效，还可用于治疗腹泻和四氯化碳所致的肝损伤等症。其提取物经乙酸乙酯萃取后，其乙酸乙酯部位具有较强的清除DPPH自由基的能力，显示出较好的抗氧化活性。此外，毛诃子提取物可显著提高链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠血浆中胰岛素、C肽和糖耐量水平，降低血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、尿素、尿酸和肌酐水平。体外溶栓实验还发现毛诃子溶栓活性达32.95%，可作为未来溶栓候选药物。另外，毛诃子丙酮提取物对四氯化碳诱导的肝损伤模型具有很好的保护作用，能恢复肝功能各项指标（谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、总胆红素、白蛋白）和肝氧化应激指标（超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽），提示该植物在在减轻肝脏氧化应激和组织损伤方面的治疗潜力。相关学者通过体内实验发现毛诃子抑制腹泻率为41.87%，可作为一种治疗腹泻的有效药物。虽然现有研究发现毛诃子具有诸多药理活性，但是对于毛诃子在抗癌活性方面的研究，特别是抗癌活性部位提取富集等工艺方面的技术发展仍然存在显著的差距，现有技术中对毛诃子抗癌活性研究也不全面，且2015版《中国药典》中仅对毛诃子药材进行性状鉴别和显微鉴别、理化鉴别。因此，本申请旨在对毛诃子有效部位的提取富集工艺、质量控制方法、抗癌活性进行研究，为毛诃子开发利用提供依据。
技术实现思路
本专利技术涉及毛诃子抗癌提取物及其活性部位制备方法，包括对含有活性成分部位的提取，以及采用大孔吸附树脂进行富集的工艺研究，还包括对活性成分中有效成分的鉴定，解决了长期以来抗癌活性研究不明确、提取富集工艺不全面，现有提取工艺有效成分含量低等不足。本专利技术通过以下技术方案来实现：一种毛诃子抗癌活性部位的制备方法，其特征在于，采用含水有机溶剂从毛诃子中得到具有抗癌活性成分的提取物，然后使用大孔吸附树脂对抗癌活性成分进行富集即得；（1）将树脂材料先用90-100%的含水有机溶剂浸泡12-48h，用4-10BV90-100%的含水有机溶剂动态洗脱，再用水洗至无味；用5%酸溶液浸泡3h后，3BV洗脱，用水洗至中性；用5%碱溶液浸泡3h后，3BV洗脱，用水洗至中性；然后用95%的含水有机溶剂洗至洗脱液与水混合（1:5）无白色浑浊；再用水洗至无味，备用；（2）取毛诃子药材，粉碎，使用8-12倍量50-70%含水有机溶剂提取1-3次，每次8-12h，提取液过滤，在-0.06～-0.09MPa、45～50℃条件下，经减压回收，浓缩，即得具有抗癌活性成分的提取物，所述具有抗癌活性成分的提取物中活性成分含量不低于19.1%，不含100%；（3）将上述具有抗癌活性成分提取物，加水稀释至一定浓度，以3000r/min离心30min后，得到的上清液按生药量与树脂体积比为1:2-1:5上样于大孔树脂柱（树脂柱径高比为1:7-1:9），吸附速度分别为0.5-2ml/min，吸附完成后，用0-15%含水有机溶剂洗脱1.5-3BV，流速为0.5-2ml/min。再用60-80%含水有机溶剂洗脱4-6BV，洗脱流速为0.5-2ml/min，收集洗脱液，在-0.06～-0.09MPa、45～50℃条件下，减压浓缩，干燥，即得毛诃子抗癌活性部位，所得抗癌活性部位中有效成分含量不低于51%，不含100%。毛诃子抗癌活性部位的制备方法，其特征在于，具有抗癌活性成分的提取物制备时，粉碎目数为5-10目；有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮中的任一种；所述具有抗癌活性成分的提取物中活性成分含量不低于19.1%，不含100%。所述树脂材料选自非极性吸附树脂、极性大孔树脂材料中的任一种，所得抗癌活性部位中有效成分含量不低于51%，不含100%。所述树脂选自HPD100、HPD400、HPD826、AB-8、DM130、NKA-9、D101中的任一种及其性能相似的大孔树脂。步骤（1）中酸选择强酸，碱选择强碱，优选的，强酸选择硫酸、盐酸中的任一种，强碱选择氢氧化钠、氢氧化钾中的任一种。一种毛诃子抗癌活性部位，其特征在于，取毛诃子药材，粉碎，使用8-12倍量50-70%含水有机溶剂提取1-3次，每次8-12h，提取液过滤，在-0.06～-0.09MPa、45～50℃条件下，减压回收，浓缩，即得具有抗癌活性成分的提取物，所述具有抗癌活性成分的提取物中活性成分含量不低于19.1%，不含100%。所述的抗癌活性部位，其特征在于，将所述具有抗癌活性成分提取物，加水稀释至一定浓度，以3000r/min离心30min后，得到的上清液按生药量与树脂体积比为1:2-1:5上样于大孔树脂柱柱（树脂柱径高比为1:7-1:9），吸附速度分别为0.5-2ml/min，吸附完成后，用0-15%含水有机溶剂洗脱1.5-3BV，流速为0.5-2ml/min。再用60-80%含水有机溶剂洗脱4-6BV，洗脱流速为0.5-2ml/min，收集洗脱液，在-0.06～-0.09MPa、45～50℃条件下，减压浓缩，干燥，即得毛诃子抗癌活性部位，所得抗癌活性部位中有效成分含量不低于51%，不含100%。毛诃子抗癌活性部位，其特征在于，所述抗癌活性部位中活性成分至少包括鞣质类，还含有黄酮、酚酸类、苯甲酸、糖苷等成分；优选的，所述鞣质类至少包含诃子次酸、诃子酸、诃子宁、诃黎勒酸、诃子鞣酸、柯里拉京（鞣云实素）、三没食子酰葡萄糖、四没食子酰葡萄糖、五没食子酰葡萄糖；2,3-二-O-没食子酰基-1,5-脱水葡萄糖醇、3,3'-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-吡喃木糖苷、安石榴苷A、安石榴苷B；优选的，所述酚酸类至少包含没食子酸、3,6-二没食子酰葡萄糖、没食子酰葡萄糖、没食子酸甲酯、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯、没食子酸丙酯、没食子酰肉豆蔻酸酯；鞣花酸、鞣花酸脱氧已糖；3,3'-二甲氧基鞣花酸、3,4-二甲氧基鞣花酸、3,3',4-三甲氧基鞣花酸、（+）-南烛树脂酚、云实酸、丁香酸、芥子酸、3,4-二甲氧基肉桂酸、对羟基苯甲酸、莽草酸、奎宁酸、丁香苷；优选的，所述苯甲酸类至少包含2,3,4,5,6-五羟基苯甲酸。一种如上所述方法制得的毛诃子抗癌活性部位、或所述毛诃子抗癌活性部位用于制备治疗癌症药物中的用途。如本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种毛诃子抗癌活性部位的制备方法，其特征在于，采用含水有机溶剂从毛诃子中得到具有抗癌活性成分的提取物，然后使用大孔吸附树脂对抗癌活性成分进行富集即得；（1）将树脂材料先用90‑100%的含水有机溶剂浸泡12‑48h，用4‑10 BV、90‑100%的含水有机溶剂动态洗脱，再用水洗至无味；用5%酸溶液浸泡3h后，3BV洗脱，用水洗至中性；用5%碱溶液浸泡3h后，3BV洗脱，用水洗至中性；然后用95%的含水有机溶剂洗至洗脱液与水混合（1:5）无白色浑浊；再用水洗至无味，备用；（2）取毛诃子药材，粉碎，使用8‑12倍量50‑70%含水有机溶剂提取1‑3次，每次8‑12h，提取液过滤，在‑0.06～‑0.09 MPa、45～50℃条件下，经减压回收，浓缩，即得具有抗癌活性成分的提取物，所述具有抗癌活性成分的提取物中活性成分含量不低于19.1%，不含100%；（3）将上述具有抗癌活性成分提取物，加水稀释至一定浓度，以3000r/min离心30min后，得到的上清液按生药量与树脂体积比为1:2～1:5上样于大孔树脂柱（树脂柱径高比为1:7‑1:9），吸附速度分别为0.5‑2 ml/min，吸附完成后，用0‑15%含水有机溶剂洗脱1.5‑3 BV，流速为0.5‑2 ml/min，再用60‑80%含水有机溶剂洗脱4‑6 BV，洗脱流速为0.5‑2 ml/min，收集洗脱液，在‑0.06～‑0.09 MPa、45～50℃条件下，减压浓缩，干燥，即得毛诃子抗癌活性部位，所得抗癌活性部位中有效成分含量不低于51%，不含100%。...

【技术特征摘要】
1.一种毛诃子抗癌活性部位的制备方法，其特征在于，采用含水有机溶剂从毛诃子中得到具有抗癌活性成分的提取物，然后使用大孔吸附树脂对抗癌活性成分进行富集即得；（1）将树脂材料先用90-100%的含水有机溶剂浸泡12-48h，用4-10BV、90-100%的含水有机溶剂动态洗脱，再用水洗至无味；用5%酸溶液浸泡3h后，3BV洗脱，用水洗至中性；用5%碱溶液浸泡3h后，3BV洗脱，用水洗至中性；然后用95%的含水有机溶剂洗至洗脱液与水混合（1:5）无白色浑浊；再用水洗至无味，备用；（2）取毛诃子药材，粉碎，使用8-12倍量50-70%含水有机溶剂提取1-3次，每次8-12h，提取液过滤，在-0.06～-0.09MPa、45～50℃条件下，经减压回收，浓缩，即得具有抗癌活性成分的提取物，所述具有抗癌活性成分的提取物中活性成分含量不低于19.1%，不含100%；（3）将上述具有抗癌活性成分提取物，加水稀释至一定浓度，以3000r/min离心30min后，得到的上清液按生药量与树脂体积比为1:2～1:5上样于大孔树脂柱（树脂柱径高比为1:7-1:9），吸附速度分别为0.5-2ml/min，吸附完成后，用0-15%含水有机溶剂洗脱1.5-3BV，流速为0.5-2ml/min，再用60-80%含水有机溶剂洗脱4-6BV，洗脱流速为0.5-2ml/min，收集洗脱液，在-0.06～-0.09MPa、45～50℃条件下，减压浓缩，干燥，即得毛诃子抗癌活性部位，所得抗癌活性部位中有效成分含量不低于51%，不含100%。2.如权利要求1所述的毛诃子抗癌活性部位的制备方法，其特征在于，具有抗癌活性成分的提取物制备时，粉碎目数为5-10目；有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮中的任一种；所述具有抗癌活性成分的提取物中活性成分含量不低于19.1%，不含100%；所述树脂材料选自非极性吸附树脂、极性大孔树脂材料中的任一种，所得抗癌活性部位中有效成分含量不低于51%，不含100%。3.如权利要求2所述的毛诃子抗癌活性部位的制备方法，其特征在于，所述树脂优选自HPD100、HPD400、HPD826、AB-8、DM130、NKA-9、D101中的任一种。4.如权利要求1所述的毛诃子抗癌活性部位的制备方法，其大孔树脂处理方法其特征在于，所述步骤（1）中酸选择强酸，碱选择强碱，优选的，强酸选择硫酸、盐酸中的任一种，强碱选择氢氧化钠、氢氧化钾中的任一种。5.一种毛诃子抗癌活性部位，其特征在于，取毛诃子药材，粉碎，使用8-12倍量50-70%含水有机溶剂提取1-3次，每次8-12h，提取过滤，在-0....

【专利技术属性】
技术研发人员：张兰珍，梁文仪，陈文静，梁林金，叶婷，
申请(专利权)人：北京中医药大学，
类型：发明
国别省市：北京,11