一株戊糖片球菌菌株、其微生态制剂及其制备方法技术

一株戊糖片球菌菌株、其微生态制剂及其制备方法，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC NO：M 2018109，分类命名为：戊糖片球菌SL001。由该菌株通过相应方法制成的适用水产养殖的微生态制剂混合于饲料后，对淡水鱼类进行喂食，能快速抑制嗜水气单胞菌等鱼类病原菌对草鱼、鲫鱼等淡水鱼类的感染，其保护率≥70%，同时也能改善淡水鱼类肠道菌群结构、促进淡水鱼类的生长、提高淡水鱼类的免疫力。

A Staphylococcus pentosae strain, its microecological preparation and its preparation method

A strain of Tabacillus pentosae, its microecological preparation and its preparation method are deposited in the typical culture preservation center of China. The preservation number of the strain is CCTCC NO:M 2018109, which is classified as Tabacillus pentosae SL001. The microecological preparation for aquaculture made by the strain can be mixed with feed and fed to freshwater fish. It can quickly inhibit the infection of pathogenic bacteria such as Aeromonas hydrophila to grass carp, crucian carp and other freshwater fish. Its protection rate is more than 70%. At the same time, it can improve the structure of intestinal flora of freshwater fish, promote the growth of freshwater fish and improve the immunity of freshwater fish. Epidemic force.

【技术实现步骤摘要】
一株戊糖片球菌菌株、其微生态制剂及其制备方法
本专利技术涉及水产微生物
，具体涉及一株戊糖片球菌菌株、其微生态制剂及其制备方法。
技术介绍
我国养殖水域面积辽阔，随着人们对蛋白资源食物的需求增大，水产养殖行业的发展越来越受到重视。根据《中国水产养殖市场调查与发展前景研究报告（2018年版）》显示，我国水产养殖以淡水养殖为主，其产量占比超过60%，淡水养殖以鱼类为主，占淡水养殖总产量的88%以上。近年来，随着国家对农业环境保护的重视，水产精养鱼池面积迅速扩展，相应精养鱼池的病害爆发越来越严重，成为制约鱼类水产养殖可持续发展的技术瓶颈。目前，已报道的淡水鱼类病害主要以细菌性病害为主，尤为严重的是，嗜水气单胞菌病害导致鱼类减产损失严重，近两年暴发率达50%以上，鱼类减产损失率达20%～30%，每年造成的直接经济损失超过百亿元之巨。现有淡水养殖鱼类病害的防控技术措施，主要是利用抗生素、化学药物、益生菌和疫苗，其中使用化学药物是鱼类病害防控的主要手段，虽然有一定效果，但是，化学药物的长期大量使用会导致病原菌产生耐药性，影响生态环境和导致水产品农药残留。益生菌是微生物中的一大类，其生长繁殖速度快，周期短，而且在生长过程中能产生一些代谢产物，这些代谢产物能抑制病原菌的繁殖，和病原菌达到某种生态和微生态平衡，同时某些代谢产物能促进鱼类生长。疫苗在水产养殖病害防治中效果也较佳，目前我国用的最多的是灭活疫苗，现阶段疫苗的制备造价和如何对水产动物进行免疫，一直是大量推广使用的瓶颈。目前，水产养殖行业常用的微生态制剂益生菌有芽胞杆菌、乳酸菌、双歧杆菌、酵母菌等，由于芽胞杆菌的芽胞具有耐高温、耐酸碱等优势，使得芽孢杆菌加工更方便，应用范围更广。乳酸菌能够产生有机酸、过氧化氢、双乙酰、细菌素等，是鱼类病原菌的天然抑菌产物，同时乳酸菌还能产生益生元，促进动物体生长发育。乳酸菌作为肠道益生菌，它能定殖在动物肠壁上，恢复和增强肠道稳态发挥作用，从而起到维持宿主免疫稳态、帮助宿主拮抗病原微生物和促进宿主对营养物质的吸收作用，进而达到促进动物生长，防治疾病的目的。戊糖片球菌（Pediococcuspentosaceus）作为乳酸菌的一种，属于乳杆菌科、片球菌属，是一种典型的乳酸菌，可以发酵糖产酸以及IIa类片球菌素等物质，具有杀灭病原菌及腐败微生物的功能。近年来，乳酸菌类戊糖片球菌作为微生态制剂在国际上养殖领域受到高度重视。2013年，中华人民共和国农业部第2045号公告《饲料添加剂品种目录(2013)》中规定，戊糖片球菌是可作为微生态制剂直接饲喂养殖动物的饲料级微生物添加剂菌种。CN102132788B公开了一种水产养殖用橙色粘球菌微生态制剂的制备及应用方法，包括以下步骤：（1）取一株橙色粘球菌JCH-04，保藏号为CGMCCNo.2893，菌株在CY培养基上30℃培养3天，在发酵培养基中30℃、180rpm摇瓶培养5天；（2）从斜面挑取一环菌种接种于CY液体培养基中试管30℃培养3天，再将接种于装有发酵培养基试管中30℃培养3天；（3）将步骤（2）的液体菌种接种于装有发酵培养基三角瓶中30℃、180rpm摇瓶培养5天；（4）将步骤（3）的摇瓶培养菌液用0.2μm微滤膜过滤浓缩成500亿CFU/mL菌液，获得的浓缩菌液为微生态制剂，对该微生态制剂的稳定性并没有提及。现有微生态制剂在运输、使用和保存过程中易失活，稳定性差，从而降低其生物活性作用；有些菌株进入消化道后，不能有效抵抗盐酸、胆汁酸等的作用，从而无法长时间定植肠道发挥功能；微生态制剂预防效果好于治疗效果，但作用慢，需长时间连续使用，成本相应增加等不利因素和技术制约。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一株戊糖片球菌新菌株，该戊糖片球菌菌株兼性厌氧生长，对高温有较好的耐受力，进入消化道后，能有效抵抗盐酸、胆汁酸等的作用，能较长时间定植肠道发挥功效。本专利技术进一步要解决的技术问题是，提供一种对鱼类病原菌抑菌效果好，能提高鱼类免疫力和促进鱼类生长，并且菌株耐热性强，稳定性好，被鱼体吸收后，能够迅速抑制鱼类病原菌的生长，对草鱼、鲫鱼等淡水鱼类的抗嗜水气单胞菌感染防治效果尤其显著，有利于菌剂运输和延长货架期的适用于水产养殖鱼类疾病防治的微生态制剂。本专利技术更进一步要解决的技术问题是，提供一种所述微生态制剂的制备方法。本专利技术解决其技术问题采用的技术方案是，一株戊糖片球菌菌株，2018年3月24日保藏于中国典型培养物保藏中心（简称CCTCC；地址：中国武汉武汉大学），菌种保藏号为CCTCCNO:M2018109，分类命名为：戊糖片球菌SL001；拉丁文学名：PediococcuspentosaceusSL001。本专利技术进一步解决其技术问题所采用的技术方案如下：一种适用于水产养殖的微生态制剂，由菌种保藏号为CCTCCNO:M2018109的戊糖片球菌SL001发酵制成。其中的抑菌活性物质对蛋白酶不敏感，在高温中稳定，在运输、使用和保存过程中不易失活，稳定性好；能抑制淡水鱼类病原菌的生长，能改善鱼类肠道菌群结构，对鱼类生长有促进作用，并能提高鱼类的免疫力。进一步，所述戊糖片球菌SL001微生态制剂为液体制剂或固体制剂。进一步，所述水产养殖的动物为淡水鱼类。进一步，所述淡水鱼类为草鱼、鲫鱼或鲤鱼。本专利技术更进一步解决其技术问题所采用的技术方案是：一种适用于水产养殖的微生态制剂的制备方法，包括以下步骤：（1）接种活化：将戊糖片球菌SL001保藏斜面菌种转接到活化斜面培养基上活化过夜，得到活化好的种子液；所述活化斜面培养基为MRS液体培养基，所述活化培养条件：温度30～40℃，装液量为容器体积的10～30％，厌氧静置培养12～16h；（2）第一次扩大培养：将步骤（1）所述活化好的种子液按1～2%的接种量接种到培养基装液量为65～70%的50L发酵罐中进行第一次扩大培养；所述第一次扩大培养的发酵培养基配方：葡萄糖15～20g/L、鱼粉蛋白胨3～5g/L、大豆蛋白胨1～4g/L、牛肉浸膏5～10g/L、酵母粉10～15g/L、MgSO4•7H2O0.3～0.5g/L、MnSO4•5H2O0.1～0.2g/L、柠檬酸铵1～2g/L、乙酸钠2～3g/L、吐温-801～2mL/L；所述第一次扩大培养的培养条件：初始pH为6.2～6.4，控制温度为30～40℃，培养12～15h，整个培养过程无需通气，每隔6～8h搅拌一次，每次2～5min，OD600为3.0～5.0；（3）第二次扩大培养：将步骤（2）所述第一次扩大培养得到的种子液按8～10%接种量接种到培养基装液量为70～75%的500L发酵罐中，第二次扩大培养的发酵培养基配方同步骤（2）所述第一次扩大培养的发酵培养基配方，第二次扩大培养的培养条件：初始pH为6.2～6.4，控制温度为30～40℃，整个培养过程无需通气，每隔6-8h搅拌一次，每次2～5min，OD600为3.0～5.0，直至发酵罐内pH=3.4～4.0时终止发酵；（4）浓缩收集：放罐后，浓缩，收集，得到微生态液体制剂，或经喷雾干燥后得到微生态固体制剂。本专利技术之利用戊糖片球菌SL001制备微生态制剂拌入饲料中投喂淡水鱼类时，按1×109～1×1011cf本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株戊糖片球菌菌株，其特征在于，保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC NO: M 2018109，分类命名为：戊糖片球菌SL001；拉丁文学名：Pediococcus pentosaceus SL001。

【技术特征摘要】
1.一株戊糖片球菌菌株，其特征在于，保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCCNO:M2018109，分类命名为：戊糖片球菌SL001；拉丁文学名：PediococcuspentosaceusSL001。2.一种适用于水产养殖的微生态制剂，其特征在于，由权利要求1所述菌种保藏号为CCTCCNO:M2018109的戊糖片球菌SL001发酵制成。3.根据权利要求2所述适用于水产养殖的微生态制剂，其特征在于，所述微生态制剂为液体制剂或固体制剂。4.根据权利要求2或3所述适用于水产养殖的微生态制剂，其特征在于，所述水产养殖的动物为淡水鱼类。5.根据权利要求4所述适用于水产养殖的微生态制剂，其特征在于，所述淡水鱼为草鱼、鲫鱼或鲤鱼。6.一种如权利要求2或3所述适用于水产养殖的微生态制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）接种活化：将戊糖片球菌SL001保藏斜面菌种转接到活化斜面培养基上活化过夜，得到活化好的种子液；所述活化斜面培养基为MRS液体培养基，所述活化培养条件：温度30～40℃，装液量为容器体积的10～30％，厌氧静置培养12～16h；（2）第一次扩大培养：将步骤（1）所述活化好的种子液按1～2%的接种量接种到培养基装液量为...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏立秋，龚亮，丁学知，胡胜标，孙运军，李东杰，
申请(专利权)人：湖南师范大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43