一种美味牛肝菌菌丝多糖的提取方法及其应用技术

技术编号:20538555 阅读:26 留言:0更新日期:2019-03-09 09:56
本发明专利技术公开了一种美味牛肝菌菌丝多糖的提取方法及其应用,采用酶法提取美味牛肝菌多糖,该方法是在常温、常压下进行催化反应,降低了反应能耗,反应条件温和,没有副反应发生,该方法可以较好的保持美味牛肝菌多糖原有的结构和活性,提高了美味牛肝菌多糖的提取率,设备简单,可操作性强,而且成本低,易于实现生产工艺的连续化和工业化。美味牛肝菌多糖提取于天然植物,安全无毒、无刺激性,具有广谱抑菌效果,进一步扩大了美味牛肝菌多糖资源的应用范围,也为开发前景的抗菌药物或药物前体物质提供了理论支持。

Extraction and application of Polysaccharide from Boletus edulis mycelium

The invention discloses a method for extracting polysaccharides from Boletus edulis mycelia and its application. Enzymatic method is used to extract polysaccharides from Boletus edulis. The method catalyzes reaction under normal temperature and pressure, reduces energy consumption, mild reaction conditions, and no side effects occur. The method can better maintain the original structure and activity of Boletus edulis polysaccharides, and improves the activity of Boletus edulis polysaccharides. The extraction rate of polysaccharides is simple, easy to operate, low cost, and easy to realize the continuity and industrialization of production process. Boletus edulis polysaccharide is extracted from natural plants. It is safe, non-toxic, non-irritating and has broad-spectrum bacteriostasis effect. It further enlarges the application scope of Boletus edulis polysaccharide resources, and provides theoretical support for the development of antimicrobial drugs or drug precursors in the future.

【技术实现步骤摘要】
一种美味牛肝菌菌丝多糖的提取方法及其应用
本专利技术涉及真菌多糖提取
,特别的涉及一种美味牛肝菌菌丝多糖的提取方法及其应用。
技术介绍
食用菌多糖(polysaccharide)被称为“生物反应调节剂”,多由10个以上的单糖分子通过α-或β-糖苷键分枝或线性连接而成,是在自然界随处可见的一类天然高分子聚合物。多糖具有多种生理活性,参与了细胞识别、分化、癌变、凋亡、抗氧化等过程,与蛋白质、脂类、核酸共同作为组成生命活动的基础物质,目前有数百种多糖被发现,部分多糖已被临床应用,在食品、药品和化妆品中有广阔前景。因此从食用菌中提取多糖一直都是国内外研究的热点。美味牛肝菌(Boletusedulis)又称大脚菇、白牛肝菌,是一种营养价值丰富的珍稀食用菌,其菌肉厚而细软,风味独特,香气浓郁,因其外形酷似牛肝而得名,被称为“牛肝菌之王”,是食药兼用经济价值较高的真菌。其富含丰富的蛋白质、生物碱以及多种维生素,具有滋补气血、健脾、美颜等功效,还能缓解手足麻木、四肢疼痛和抽搐等相关症状,在国内外的需求量都不断增加。美味牛肝菌多糖功效显著,具有降血压、抗衰老、抗疲劳、抗动脉粥硬化等,亦能增强人体免疫功能。专利CN201310480673.7公开了一种美味牛肝菌菌丝多糖的提取方法,该方法采用超声波辅助热水浸提法,操作复杂,提取效率低。至今关于美味牛肝菌菌丝多糖的生物功能并未见有报道。
技术实现思路
针对现有技术的存在的上述不足,本专利技术的目的在于提供一种美味牛肝菌菌丝多糖的提取方法及其应用,解决现有提取方法操作复杂和提取效率低等问题。本专利技术还提供了美味牛肝菌菌丝多糖在抑制细菌活性方面的应用,扩大了美味牛肝菌菌丝多糖的应用范围,也为抑菌剂提供了更多的选择。为了解决上述技术问题,本专利技术采用如下的技术方案:一种美味牛肝菌菌丝多糖的提取方法,包括以下步骤:1)将美味牛肝菌菌丝接种于PDA液体培养基中,28℃振荡培养7d,加入适量无水乙醇,然后离心弃上清,将菌丝烘干得到菌丝干粉;2)将步骤1)得到的菌丝体干粉末加入去离子水中,常温下浸泡1~2h,然后加入复合酶充分酶解,再水浴加热使所述复合酶失活,冷却后离心收集上清液得到多糖浸提液,向所述多糖浸提液中加入乙醇沉淀12~24h后,离心取沉淀溶于去离子水中,即得到多糖溶液;所述复合酶为纤维素和果胶酶的混合物;3)向步骤2)得到的多糖溶液中加入所述多糖溶液1/4体积的氯仿-正丁醇溶液,置于摇床剧烈振荡30~60min,室温放置1~2h,离心取上清,即得到粗多糖;4)将得到的粗多糖重复步骤3)多次,直至蛋白完全去除,然后用旋转蒸发仪除去溶液中的溶剂,即得到美味牛肝菌菌丝多糖。进一步,所述酶解时间为50~70min,酶解温度为35~45℃;所述复合酶的用量为菌丝体干粉末质量的0.4~0.8%。优选的,所述酶解时间为60~70min,酶解温度为40~45℃;所述复合酶的用量为菌丝体干粉末质量的0.6~0.8%;优选的,所述酶解时间为60min,酶解温度为40℃;所述复合酶的用量为菌丝体干粉末质量的0.6%。当纤维素-果胶酶(2:1)用量低于0.6%时,随着酶用量增大,多糖提取率上升幅度较大,当酶用量大于0.6%时,随着酶用量增大,多糖提取率的增大幅度较缓,再增加酶量对多糖产量的增加无显著影响,催化能力已接近饱和,故酶用量为0.6%较适宜。当酶解时间在60min前,随着酶解时间延长,多糖提取率随之上升,但当酶解时间达到60min时,多糖提取量最高,在反应60min后,随着时间的延长多糖提取量反而下降,可能由于酶反应时间过长,酶发生钝化现象,导致催化能力下降,因此酶解时间以60min较适宜。当酶解温度在40℃以下时,美味牛肝菌多糖提取率随着酶解温度的上升逐渐提高,且增大幅度较大;但当温度升高到40℃以上,多糖提取率开始降低,由于酶是蛋白质,温度升高导致酶逐渐变性失活。在酶解温度为40℃时,多糖提取率最高,因此酶解温度为40℃较适宜。pH值对多糖提取率的影响不大,但过酸过碱都会破坏酶的空间结构,降低它与底物的结合,故选择pH为6较适宜。进一步,所述菌丝体干粉末与去离子水的料液比为1g:10~30ml。进一步,所述纤维素酶与果胶酶的质量比为2:1。进一步,所述氯仿-正丁醇溶液中氯仿与正丁醇的体积比为5:1。一种抑菌剂,其主要成份采用上述提取方法获得的美味牛肝菌菌丝多糖。进一步,所述菌为鼠伤寒沙门氏菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌中的一种或多种。抑菌机理:美味牛肝菌多糖主要成分为D-木糖、D-甘露糖、D-乳糖、D-葡萄糖,其中D-甘露糖含量占30%~60%。D-甘露糖可以与细菌细胞壁上的外源凝集素结合,使细菌细胞壁和细菌膜通透性增大,使细胞壁趋于溶解发生细菌溶解而死亡。相比现有技术,本专利技术具有如下有益效果:1、本专利技术采用酶法提取美味牛肝菌多糖,该方法是在常温、常压下进行催化反应,降低了反应能耗,反应条件温和,没有副反应发生,该方法可以较好的保持美味牛肝菌多糖原有的结构和活性,提高了美味牛肝菌多糖的提取率,设备简单,可操作性强,而且成本低,易于实现生产工艺的连续化和工业化。2、本专利技术采用分光光度法和牛津杯进行抑菌试验,结果表明,美味牛肝菌多糖对鼠伤寒沙门氏菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌均有抑制作用,美味牛肝菌多糖提取于天然植物,安全无毒、无刺激性,因此在皮肤消毒、食品防腐、人体抑菌等方面具有良好的应用前景。进一步扩大了美味牛肝菌多糖资源的应用范围,为开发前景的抗菌药物或药物前体物质提供了理论支持。附图说明图1为美味牛肝菌多糖对菌的抑制率;其中,Sa表示鼠伤寒沙门氏菌;Mo表示白色念珠球菌;Ba表示枯草芽孢杆菌;St表示金黄色葡萄球菌。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的详细说明。以下实施例中所用试剂无特别说明均为普通市售。美味牛肝菌菌丝来源于长江师范学院微生物实验室,鼠伤寒沙门氏菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌来源于中科院微生物所。一、一种美味牛肝菌菌丝多糖的提取方法实施例11)将美味牛肝菌菌丝接种于PDA液体培养基中,28℃振荡培养7d,加入适量无水乙醇,8000r/min离心10min,重复3次,弃上清,将菌丝置于培养皿中于50℃烘干得到菌丝干粉;2)将1g步骤1)得到的菌丝体干粉末加入20ml的去离子水中得到菌丝体溶液,常温下浸泡1h,然后加入复合酶(纤维素酶:果胶酶=2:1),复合酶的用量为菌丝体质量的0.4%,然后在pH值为5和35℃的条件下酶解50min,再于90℃水浴30min灭酶活,冷却后离心收集上清液得到多糖浸提液,向多糖浸提液中加入乙醇沉淀24h后,离心取沉淀溶于去离子水中,即得到多糖溶液;3)向步骤2)得到的多糖溶液中加入多糖溶液体积1/4的氯仿:正丁醇(5:1),置于摇床剧烈振荡30min,室温放置1h,5000r/min离心20min,得到粗多糖;4)将得到的粗多糖重复步骤3)多次,直至蛋白完全去除,然后用旋转蒸发仪除去溶液中的溶剂,即得到美味牛肝菌菌丝多糖。采用苯酚-硫酸法测定多糖含量:S1:配置0.2mg/mL的葡萄糖标准液,分别取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml的葡萄糖标准液,然后用蒸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种美味牛肝菌菌丝多糖的提取方法,其特征在于,包括以下步骤:1)将美味牛肝菌菌丝接种于PDA液体培养基中,28℃振荡培养7d,加入适量无水乙醇,然后离心弃上清,将菌丝烘干得到菌丝干粉;2)将步骤1)得到的菌丝体干粉末加入去离子水中,常温下浸泡1~2h,然后加入复合酶充分酶解,再水浴加热使所述复合酶失活,冷却后离心收集上清液得到多糖浸提液,向所述多糖浸提液中加入乙醇沉淀12~24 h后,离心收集沉淀溶于去离子水中,即得到多糖溶液;所述复合酶为纤维素和果胶酶的混合物;3)向步骤2)得到的多糖溶液中加入所述多糖溶液1/4体积的氯仿‑正丁醇溶液,置于摇床剧烈振荡30~60 min,室温放置1~2 h,离心取上清,即得到粗多糖;4)将得到的粗多糖重复步骤3)多次,直至蛋白完全去除,然后用旋转蒸发仪除去溶液中的溶剂,即得到美味牛肝菌菌丝多糖。

【技术特征摘要】
1.一种美味牛肝菌菌丝多糖的提取方法,其特征在于,包括以下步骤:1)将美味牛肝菌菌丝接种于PDA液体培养基中,28℃振荡培养7d,加入适量无水乙醇,然后离心弃上清,将菌丝烘干得到菌丝干粉;2)将步骤1)得到的菌丝体干粉末加入去离子水中,常温下浸泡1~2h,然后加入复合酶充分酶解,再水浴加热使所述复合酶失活,冷却后离心收集上清液得到多糖浸提液,向所述多糖浸提液中加入乙醇沉淀12~24h后,离心收集沉淀溶于去离子水中,即得到多糖溶液;所述复合酶为纤维素和果胶酶的混合物;3)向步骤2)得到的多糖溶液中加入所述多糖溶液1/4体积的氯仿-正丁醇溶液,置于摇床剧烈振荡30~60min,室温放置1~2h,离心取上清,即得到粗多糖;4)将得到的粗多糖重复步骤3)多次,直至蛋白完全去除,然后用旋转蒸发仪除去溶液中的溶剂,即得到美味牛肝菌菌丝多糖。2.根据权利要求1所述美味牛肝菌菌丝多糖的提取方法,其特征在于,所述酶解时间为50~7...

【专利技术属性】
技术研发人员:梁姗
申请(专利权)人:长江师范学院
类型:发明
国别省市:重庆,50

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